【摘要】：鼠疫耶爾森氏菌（Yersinia pestis，以下簡稱鼠疫菌）是導(dǎo)致鼠疫爆發(fā)的病原體；其傳染性強(qiáng)、病死率高，曾經(jīng)導(dǎo)致數(shù)以億計(jì)的人死亡，，造成人類歷史上巨大的災(zāi)難。鼠疫菌在遺傳水平上和O1:b血清型腸道致病性假結(jié)核耶爾森氏菌（Yersinia pseudotuberculosis，以下簡稱假結(jié)核菌）很近，但這兩種病原體導(dǎo)致的疾病卻截然不同。 布氏田鼠型201鼠疫菌體內(nèi)有四個(gè)內(nèi)源性質(zhì)粒，分別為pPCP1、pMT1、pCD1和pCRY；目前有關(guān)質(zhì)粒與鼠疫菌在宿主體內(nèi)定居的關(guān)系很少有報(bào)道。第一部分中，我們構(gòu)建了基于質(zhì)粒luxCDABE發(fā)光的鼠疫菌Y. pestis201, Y. pestis201-pCD1+, Y. pestis201-pMT1+, Y. pestis201-pPCP1+, Y. pestis201-pCRY+, Y. pestis201-pˉ株和Y.pseudotuberculosis Pa36060菌株；運(yùn)用生物發(fā)光成像系統(tǒng)研究在原發(fā)性敗血癥小鼠模型上鼠疫菌定居分布或清除規(guī)律；實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，以上菌株在尾靜脈感染早期均可短暫定居在小鼠肝臟、脾臟部位；其中Y. pestis201-pMT1+菌在肝臟、脾臟及血液中定居或存活能力最強(qiáng)；Y. pestis201-pPCP1+在肺臟定居能力最強(qiáng)；而假結(jié)核Pa36060有較強(qiáng)的腸道和肺臟定居能力。小鼠毒力實(shí)驗(yàn)顯示，與其他三株質(zhì)粒缺失鼠疫菌相比，Y. pestis201-pMT1+毒力最強(qiáng)；實(shí)驗(yàn)組和對照組中，野生型Y. pestis201組毒力最強(qiáng)。以上結(jié)果表明，pMT1是敗血癥鼠疫模型中，與鼠疫菌在血液中存活及肝、脾定居最為密切相關(guān)的質(zhì)粒；而質(zhì)粒pPCP1與鼠疫菌在宿主肺臟定居有關(guān)。鼠疫菌在血液中免于被清除或殺死是導(dǎo)致動物最終死亡的至關(guān)重要的因素。 基于質(zhì)粒構(gòu)建的生物發(fā)光鼠疫菌由于其發(fā)光半衰期較短，無法長期觀察質(zhì)粒缺失對鼠疫菌在體內(nèi)定居、分布的影響。因此我們利用Tn5轉(zhuǎn)座系統(tǒng)成功構(gòu)建出基于染色體的生物發(fā)光鼠疫菌、質(zhì)粒缺失菌株和假結(jié)核菌；實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，無需外界壓力下轉(zhuǎn)座后宿主菌體內(nèi)染色體中l(wèi)ux操縱子可以持續(xù)穩(wěn)定表達(dá)；同樣動物實(shí)驗(yàn)也表明，插入宿主菌染色體的lux基因不會影響其生長及毒力。進(jìn)而我們將已構(gòu)建基于染色體的生物發(fā)光菌Y. pestis201-pCD1+-lux、 Y. pestis201-pPCP1+-pCRY+-pMT1+-lux、Y. pestis201-pCD1+-pPCP1+-lux、Y.pestis201-pPCP1+-pCD1+-pCRY+-lux、 Y. pestis201-pPCP1+-pCD1+-pMT1+-lux和Y. pseudotuberculosis Pa3606-lux經(jīng)尾根皮下途徑感染小鼠建立腺鼠疫小鼠模型，通過活體動態(tài)學(xué)成像進(jìn)行比較分析不同質(zhì)粒缺失突變株在感染小鼠后的定居和移位情況；結(jié)果表明，pCD1質(zhì)粒是腺鼠疫中決定鼠疫菌在宿主淋巴結(jié)存活及體內(nèi)定居最為密切相關(guān)的因素之一；假結(jié)核菌體內(nèi)雖然也存在pCD1質(zhì)粒，在皮下感染早期假結(jié)核菌可以導(dǎo)致小鼠局部淋巴結(jié)腫大并可淋巴結(jié)內(nèi)定居，但后期細(xì)菌逐漸被清除；說明假結(jié)核菌具有導(dǎo)致腺鼠疫發(fā)生的潛能，這可能與假結(jié)核菌體內(nèi)的pCD1質(zhì)粒隨進(jìn)化其序列發(fā)生變化有關(guān)。我們另外又發(fā)現(xiàn)，pPCP1質(zhì)粒的存在促進(jìn)了pCD1質(zhì)粒在鼠疫菌皮下感染小鼠后體內(nèi)定居移位的侵襲能力。
【圖文】：

圖 1-1 三次鼠疫大流行地域分布[4]Fig1-1 The region distribution of three times prevalence in world[4]中國歷史上對鼠疫這一古老的自然疫源性疾病也有較早史如有“藥王”之稱的隋朝大醫(yī)藥家孫思邈所著的《千金方》巢元方所著《諸疫原候論》都提到“惡核”一癥，其描述的癥狀實(shí)為現(xiàn)代意義上的腺鼠疫。清朝詩人師道南在《鼠死行“東死鼠，西死鼠，人見死鼠如見虎。鼠死不幾日，人死如坼無人收，官租無人考”，詳細(xì)描述了當(dāng)時(shí)鼠疫流行的慘狀情間鼠疫與人間鼠疫的相互關(guān)系。1860-1950 年間，我國共發(fā)生七次大規(guī)模的鼠疫流行，涉及 省市地區(qū)，其中僅東三省和內(nèi)蒙東部地區(qū)的兩次肺鼠疫流行（

事件呈明顯上升趨勢，因此鼠疫被列為“重新抬頭5]。由于可以作為生物戰(zhàn)劑或生物恐怖而具有潛在被人為的填上一層政治色彩，引起各國相關(guān)部門的菌病原學(xué)森氏菌屬（Yersinia）中有 3 個(gè)種為致病菌，分別、假結(jié)核耶爾森氏菌（Y. pseudotuberculosis，以下小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌（Y. enterocolitica，簡稱小中鼠疫菌在遺傳水平上和假結(jié)核菌很近，染色體雜以上，有研究表明，鼠疫菌是 1500~20000 年前由 耶爾森氏菌進(jìn)化而來的[7-10]。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R378

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本文編號：2530354