【摘要】：研究背景諾如病毒(Noroviruses,NoVs)是引起人群非細(xì)菌性急性胃腸炎的主要病原體之一。全球預(yù)計(jì)有55%-85%與NoVs相關(guān)的暴發(fā)由GⅡ.4引起。雙殼貝類被公認(rèn)為是引起食源性暴發(fā)的高風(fēng)險食品,其中與牡蠣相關(guān)的暴發(fā)報(bào)道最多。廣東省海產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)達(dá),項(xiàng)目組前期研究發(fā)現(xiàn)廣東省汕尾市長沙灣牡蠣養(yǎng)殖區(qū)的牡蠣NoVs污染率較高。然而,該養(yǎng)殖區(qū)人群急性胃腸炎發(fā)病率為0.10次/人年,低于廣東省平均水平0.25次/人年,也低于全國人群急性胃腸炎發(fā)病率0.56次/人年。該養(yǎng)殖區(qū)急性胃腸炎病人NoVs感染陽性率為20%。在一項(xiàng)針對該地區(qū)健康人群NoVs隱性感染的調(diào)查顯示總?cè)巳篘oVs隱性感染率為4.04%,其中牡蠣養(yǎng)殖區(qū)人群NoVs隱性感染率約為6.30%。該養(yǎng)殖區(qū)人群普遍有常年生食貝類海產(chǎn)品的習(xí)慣,暴露于NoVs機(jī)會相對較多,卻很少發(fā)生人群NoVs急性胃腸炎暴發(fā)和流行。生活在牡蠣養(yǎng)殖區(qū)NoVs高污染環(huán)境中,又有特殊的高危飲食習(xí)慣,該地區(qū)居民的急性胃腸炎發(fā)病率并不比一般人群高,這其中是否存在某些保護(hù)機(jī)制使宿主不易發(fā)病,值得探索和研究。人體感染NoVs主要與宿主遺傳和免疫、環(huán)境和病原體三方面因素相關(guān)。大量研究表明人體感染NoVs與人類組織血型抗原(Human histo-blood group antigen,HBGA)受體密切相關(guān)。HBGA是紅細(xì)胞、呼吸道、泌尿生殖道和消化道粘膜上皮細(xì)胞表面的一類復(fù)雜的碳水化合物,存在于唾液、血液、母乳和腸道等體液中。研究還發(fā)現(xiàn)人體內(nèi)血清特異性NoVs抗體的存在可以阻斷NoVs病毒樣顆粒(Virus-like particle,VLP)與HBGA的結(jié)合,保護(hù)機(jī)體免受感染,降低疾病發(fā)生的風(fēng)險。牡蠣養(yǎng)殖區(qū)人群血清NoVs感染的特異性抗體水平如何?血清抗體是否存在較普通人群具有更高阻斷NoVs與HBGA受體結(jié)合的能力?本研究從人群職業(yè)和特殊飲食情況、HBGA受體分布以及血清抗體水平三個方面探究暴露于NoVs感染高風(fēng)險的牡蠣養(yǎng)殖區(qū)人群較少發(fā)生NoVs急性胃腸炎暴發(fā)和流行的可能因素。研究方法本研究選取了牡蠣養(yǎng)殖區(qū)沿岸A鎮(zhèn)1個村落和B鎮(zhèn)1個居委會作為調(diào)查點(diǎn),以18歲及以上常住人口作為調(diào)查對象,針對其特殊的職業(yè)以及飲食習(xí)慣設(shè)計(jì)調(diào)查問卷,同步收集血液和唾液標(biāo)本。同時匹配年齡和性別,從廣東省內(nèi)陸地區(qū)抽取對照人群血清標(biāo)本作為對照。利用成熟的大腸桿菌BL21(DE3)原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)NoV GⅡ.4 VA387 P顆粒和GⅡ.17 P蛋白作為替代抗原,用間接ELISA試驗(yàn)測定NoV GⅡ.17流行株血清特異性抗體水平;通過ELISA試驗(yàn)測定養(yǎng)殖區(qū)人群唾液HBGA受體表型;用體外阻斷實(shí)驗(yàn)作為體外中和替代模型測定人群血清抗體阻斷NoV GⅡ.4與HBGA受體結(jié)合的效率,分析牡蠣養(yǎng)殖區(qū)人群NoVs感染與HBGA受體阻斷之間的關(guān)系。結(jié)果1.有195人參與問卷調(diào)查及采樣(血液,唾液),平均年齡50.7歲;男性70人,女性125人。A鎮(zhèn)調(diào)查人群年齡分布均數(shù)大于B鎮(zhèn),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=9.28,P=0.003)。B鎮(zhèn)調(diào)查的女性人數(shù)占比高于A鎮(zhèn),A、B鎮(zhèn)之間男女性別比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.452,P=0.02)。人群中有生食腌蠔特殊飲食習(xí)慣,且食用頻率每月≥1次的人占比24.6%(48/195)。從事與牡蠣養(yǎng)殖/加工職業(yè)有74人,占比37.9%(74/195),兩鎮(zhèn)職業(yè)人群之間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=118.039,P0.001)。2.SDS-PAGE電泳得到相對分子量為36kDa NoV GⅡ.4 VA387 P顆粒和60kDa NoVGⅡ.17P蛋白,大小與預(yù)計(jì)大小相符。3.牡蠣養(yǎng)殖區(qū)人群NoV GⅡ.17血清抗體總陽性率為88.2%(172/195)。從事養(yǎng)殖/加工職業(yè)人群血清抗體陽性率為93.2%,非養(yǎng)殖/加工職業(yè)人群血清抗體陽性率為81.8%,差異比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.025,P=0.025)。有生食腌蠔特殊飲食習(xí)慣與無生食腌蠔特殊飲食習(xí)慣人群NoV GⅡ.17血清抗體陽性率之間比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.195份唾液HBGA受體表型鑒定結(jié)果分泌型受體有168人,其中A型有43人,B型有41人,0型有80人,AB型4人,非分泌型27人。分泌型受體占比86.2%(168/195),與中國普通人群唾液HBGA分泌型受體比例一致。5.牡蠣養(yǎng)殖區(qū)人群血清抗體阻斷效率達(dá)到50%(BT50)比例有136人,占比69.7%(136/195),血清抗體滴度平均水平為1:212.30;內(nèi)陸對照人群血清抗體阻斷效率達(dá)到50%(BT50)比例有106人,占比62.7%(106/169),血清抗體滴度平均水平為1:99.09。兩個地區(qū)人群血清抗體阻斷效率達(dá)到50%比例之間比較差異雖無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),但兩個地區(qū)人群血清抗體滴度的總體中位數(shù)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(z=6.235,P0.001),牡蠣養(yǎng)殖區(qū)人群血清阻斷作用抗體滴度高于內(nèi)陸對照人群。結(jié)論1.成功表達(dá)NoV GⅡ.4 VA387 P顆粒和NoV GⅡ.17 P蛋白。2.在2015年1月NoV GⅡ.17新型變異株流行的早期,牡蠣養(yǎng)殖區(qū)人群血清里就已檢出比內(nèi)陸普通人群高的NoV GⅡ.17 IgG抗體陽性率,表明該養(yǎng)殖區(qū)人群確實(shí)存在更多暴露和感染No Vs的機(jī)會。當(dāng)?shù)仉m然有較高感染NoVs風(fēng)險的特殊飲食習(xí)慣,對NoVGⅡ.17也有普遍感染,但主要與從事牡蠣養(yǎng)殖或加工職業(yè)相關(guān),職業(yè)暴露很可能是當(dāng)?shù)厝巳篘oVs感染的主要途徑。3.牡蠣養(yǎng)殖區(qū)人群唾液HBGA分泌型受體分布比例與國內(nèi)其他地區(qū)人群受體分布相一致,從宿主遺傳因素上排除了對NoVs不易感的先天因素。4.牡蠣養(yǎng)殖區(qū)人群血清阻斷作用的抗體滴度高于內(nèi)陸對照人群,表明牡蠣養(yǎng)殖區(qū)人群血清抗體阻斷能力要強(qiáng)于普通人群,提示牡蠣養(yǎng)殖區(qū)人群較普通人群對NoV GⅡ.4感染更有免疫阻斷能力。
[Abstract]:Norovirus (NoVs) is one of the major pathogens causing non-bacterial acute gastroenteritis in the population. The global forecast of 55-85% of the outbreak related to NoVs is caused by the G 鈪，

本文編號：2484448