【摘要】：目的建立可同時檢測四種瘧原蟲的多重?zé)晒舛縋CR方法。方法 PCR擴增四種瘧原蟲目的片段,克隆并構(gòu)建標(biāo)準質(zhì)粒,進行梯度稀釋。體系按濃度加入五重引物探針,對臨床四種瘧原蟲陽性血樣及單一腺病毒和肺炎支原體陽性血樣、人基因組進行特異性檢測。將本地區(qū)優(yōu)勢蟲種惡性瘧及間日瘧陽性血樣混合并檢測。每個反應(yīng)做一式三份驗證重復(fù)性。檢測標(biāo)準品梯度濃度,獲得體系最低檢測限。結(jié)果成功構(gòu)建四種瘧原蟲標(biāo)準質(zhì)粒。對20份樣本進行檢測,其中15份惡性瘧,3份間日瘧,1份三日瘧,1份卵形瘧,與原有確證結(jié)果一致。對單一腺病毒及肺炎支原體陽性血樣、人基因組檢測結(jié)果均為陰性。惡性瘧及間日瘧陽性血樣混合檢測顯示3條特異性擴增曲線。三個復(fù)孔的變異系數(shù)在0.17~4.96之間。惡性瘧可檢測到10~2copies/m L,間日瘧、三日瘧、卵形瘧可檢測到10~3copies/m L。結(jié)論建立五重?zé)晒舛縋CR檢測四種瘧原蟲特異性及重復(fù)性均較好,靈敏度高,可用于瘧原蟲快速篩選及分型鑒定。
[Abstract]:Objective to establish a multiplex fluorescence quantitative PCR method for simultaneous detection of four species of Plasmodium malaria. Methods the fragments of four species of Plasmodium were amplified by PCR, and the standard plasmids were cloned and constructed for gradient dilution. In this system, four clinical samples of malaria parasite, single adenovirus and mycoplasma pneumoniae positive blood samples were detected by adding five-primer probe according to the concentration, and the human genome was detected specifically. The positive blood samples of Plasmodium falciparum and Plasmodium vivax were mixed and detected. Each reaction is done in triplicate to verify repeatability. The minimum detection limit of the system was obtained by detecting the gradient concentration of the standard sample. Results four standard plasmids of Plasmodium malaria were constructed successfully. There were 15 falciparum malaria, 3 vivax malaria, 1 egg malaria and 15 falciparum malaria, 3 vivax malaria, 1 egg malaria. The results of human genome detection were negative for single adenovirus and mycoplasma pneumoniae positive blood samples. The mixed detection of Plasmodium falciparum and Plasmodium vivax showed 3 specific amplification curves. The coefficient of variation of the three complex pores was between 0.17 and 4.96. Plasmodium falciparum can detect 10~2copies/m L, Plasmodium vivax, Plasmodium triviparum, Plasmodium ovale can detect 10~3copies/m L. Conclusion five-fold fluorescence quantitative PCR can be used for rapid screening and typing identification of Plasmodium malaria, which has good specificity and reproducibility and high sensitivity.
【作者單位】： 麗水出入境檢驗檢疫局;浙江省麗水市疾病預(yù)防控制中心檢驗科;
【基金】：浙江出入境檢驗檢疫局重點科研計劃項目計劃(2014-ZKZ-006)
【分類號】：R531.3

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