【摘要】：重型肝炎是一種預(yù)后很差的疾病，我國以乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus）所致的重型肝炎為主（約占70%）。HBV所致重型肝炎的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜。目前研究認(rèn)為，重型肝炎發(fā)生發(fā)展的 啟動(dòng)或制控點(diǎn)‖受病毒和宿主兩個(gè)方面的因素以及這兩方面相互作用的影響。就乙型肝炎病毒自身因素方面而言，乙型肝炎病毒編碼的病毒蛋白被認(rèn)為在HBV相關(guān)的肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展過程中有著相當(dāng)重要的作用，，并且可以調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)各類分子的表達(dá)以及影響著HBV的整個(gè)復(fù)制過程等[1-3]。 人KCTD9基因位于人第8號(hào)染色體,其編碼蛋白屬于KCTD家族的一員。本實(shí)驗(yàn)室通過基因芯片對(duì)比重型乙型肝炎與慢性乙型肝炎輕度患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)的基因水平表達(dá)差異，發(fā)現(xiàn)重型乙型肝炎患者PBMC中KCTD9mRNA水平大大高于慢性乙型肝炎輕度患者[4-7]。 為探討HBV編碼蛋白是否對(duì)人KCTD9具有激活作用，設(shè)計(jì)了下列試驗(yàn)。最先我們探討乙型肝炎病毒編碼蛋白能否對(duì)人KCTD9基因有著明顯的調(diào)控作用。構(gòu)建三種HBV編碼蛋白HBc、 HBs和HBx的真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA-HBc、pcDNA-HBs和pcDNA-HBx以及hKCTD9啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒，把病毒蛋白表達(dá)質(zhì)粒與啟動(dòng)子質(zhì)粒以及β半乳糖苷酶基因表達(dá)質(zhì)粒（β-Gal）共轉(zhuǎn)染到CHO細(xì)胞系，研究HBV編碼蛋白是否對(duì)人KCTD9(hKCTD9)基因具有激活作用，并且明確何種病毒蛋白發(fā)揮活化基因的作用。通過檢測(cè)報(bào)告基因相對(duì)熒光素酶（Luciferase）值反映乙型肝炎病毒編碼蛋白對(duì)hKCTD9基因的轉(zhuǎn)錄具有明顯激活作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，HBV編碼的HBx蛋白能夠明顯激活hKCTD9基因啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄。 在HBV編碼HBx蛋白作用下，為研究參與激活hKCTD9基因的順式作用元件，接下來做了一系列基因啟動(dòng)子的截短缺失試驗(yàn)，成功構(gòu)建了一系列5‘端缺失、擁有同樣3‘端的hKCTD9基因啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒，把上述質(zhì)粒分別與乙型肝炎病毒編碼的HBx蛋白真核表達(dá)質(zhì)粒同時(shí)共轉(zhuǎn)染進(jìn)HepG2肝癌細(xì)胞中。研究結(jié)果顯示：在hKCTD9基因上游啟動(dòng)子的-751位至-657位（相對(duì)于轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)）之間可能存在著重要的調(diào)控序列。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R512.62

【參考文獻(xiàn)】

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1 徐莉;楊道鋒;陳韜;蘇凱;寧琴;;利用昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)人KCTD9蛋白[J];實(shí)用肝臟病雜志;2010年04期

2 周耀勇;皮斌;劉小娟;韓梅芳;嚴(yán)偉明;習(xí)東;寧琴;;KCTD9多肽抗體的制備和應(yīng)用[J];中國免疫學(xué)雜志;2009年03期

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2 韓梅芳;HBV編碼蛋白通過轉(zhuǎn)錄因子c-Ets-2激活人纖維介素基因hfgl2的作用機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2007年

本文編號(hào)：2445530