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結(jié)核分枝桿菌蛋白抗原b夾心ELISA方法的建立及其在結(jié)核性腦膜炎診斷中的應(yīng)用

發(fā)布時間:2019-03-14 10:32
【摘要】:背景結(jié)核性腦膜炎(tuberculous meningitis.TBM)是一種最常見的神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)核病。在肺外結(jié)核中大約有5%~15%的患者累及神經(jīng)系統(tǒng),約占神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)核病的70%左右。近年來,由于人口流動頻繁,免疫抑制劑的廣泛、大量應(yīng)用,耐藥菌種的出現(xiàn)及艾滋病(Acquired Immune Deficiency Syndrome.AIDS)患者的增多,不論是在國內(nèi),還是在國外,結(jié)核病的發(fā)病率及病死率的趨勢,都是在不斷地逐漸增高。結(jié)核病已經(jīng)成為了我們目前需要迫切解決的重大問題,因其對我們?nèi)祟惖慕】翟斐芍卮笸{,故成為全球關(guān)注的衛(wèi)生問題,并成為部分相對比較落后的發(fā)展中國家和經(jīng)濟條件差的部分地區(qū),特別是在一些艾滋病高發(fā)地區(qū)(比如非洲部分國家和地區(qū))的人群中成為首要死因。因此越來越受到人們重視?乖湍X脊液以其特有的優(yōu)勢,作為檢測對象成為我們研究的重點。酶聯(lián)免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay.ELISA)法,以其快速簡潔、價格低廉、操作方便等優(yōu)勢成為我們選擇的根本原因。而單克隆抗體(monoclonal antibody.mAb)和多克隆抗體(polyclonal antibody.p Ab)的制備,為我們檢測抗原奠定基礎(chǔ)。目的通過蛋白抗原b(38kDa抗原)單克隆抗體和多克隆抗體的制備,對單克隆抗體的篩選,用雙抗體夾心ELISA法,摸索包被時間、抗體濃度、優(yōu)化條件等,從而,建立定量檢測腦脊液中結(jié)核分枝桿菌蛋白抗原b(38kDa抗原)的夾心ELISA法,以期建立一種能夠區(qū)分結(jié)核性腦膜炎活動性感染與潛伏性感染的方法。方法制備蛋白抗原b(38kDa抗原)的鼠源性單克隆抗體(mAb)及兔多克隆抗體(pAb);以單克隆抗體為包被抗體,多克隆抗體為檢測抗體,建立檢測結(jié)核分枝桿菌蛋白抗原b(38kDa抗原)的雙抗體夾心ELISA;應(yīng)用此方法檢測正常人(n=6)、非結(jié)核性腦膜炎患者(n=26)及臨床確診結(jié)核性腦膜炎患者(n=42)的腦脊液標本中蛋白抗原b(38kDa抗原)的含量,并分析其與結(jié)核性腦膜炎活動性感染的相關(guān)性。結(jié)果成功建立了檢測蛋白抗原b(38kDa抗原)的夾心ELISA方法,敏感度可達0.4μg/L。應(yīng)用該方法在正常人及非結(jié)核性腦膜炎患者腦脊液中未檢測到蛋白抗原b(38kDa抗原);在結(jié)核性腦膜炎患者腦脊液中蛋白抗原b(38kDa抗原)含量顯著升高。結(jié)論通過夾心ELISA方法檢測結(jié)核分枝桿菌特異性抗原,為結(jié)核性腦膜炎的早期診斷、治療提供了可靠依據(jù)。由于抗原較抗體出現(xiàn)早,在腦脊液中較血清中更易檢出,建立了敏感、特異檢測腦脊液中結(jié)核分枝桿菌蛋白抗原b(38kDa抗原)含量的ELISA方法,可用于檢測腦脊液中的蛋白抗原b(38kDa抗原)水平,為活動性結(jié)核性腦膜炎的早期診斷提供一種有效可行的手段。把結(jié)核性腦膜炎的診斷提高到一個新的水平。
[Abstract]:......
【學位授予單位】:第四軍醫(yī)大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2014
【分類號】:R529.3

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本文編號:2439902

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