【摘要】：第一部分人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞生長特性及HIV-1Tat對細(xì)胞活性影響的初步研究 【目的】探索適宜人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞（human cerebral microvascularendothelial cells,hCMEC/D3）生長的培養(yǎng)體系，明確細(xì)胞生長特性，了解人類免疫缺陷病毒-1型反式轉(zhuǎn)錄激活因子（HIV-1transactivator oftranscription,HIV-1Tat）對細(xì)胞活性影響，，為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。 【方法】以添加堿性成纖維細(xì)胞生長因子、氫化可的松、抗壞血酸、脂質(zhì)濃縮物、青鏈霉素及胎牛血清等成分的EBM-2完全培養(yǎng)液進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)并傳代擴(kuò)增，倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞生長形態(tài)特征，繪制細(xì)胞生長曲線；采用MTT法檢測HIV-1Tat對hCMEC/D3細(xì)胞活性的影響。 【結(jié)果】細(xì)胞傳代后生長能力強(qiáng)，性狀穩(wěn)定，明確細(xì)胞生長規(guī)律；濃度梯度的HIV-1Tat250ng/ml、500ng/ml、1000ng/ml處理細(xì)胞24h后細(xì)胞存活率分別為97.60%、91.57%和87.15%；1000ng/ml HIV-1Tat處理細(xì)胞6h、12h、18h和24h后細(xì)胞存活率分別為96.86%、92.31%、88.06%和86.79%。 【結(jié)論】成功構(gòu)建適宜hCMEC/D3生長的培養(yǎng)體系，細(xì)胞生長狀態(tài)良好；MTT結(jié)果表明當(dāng)處理hCMEC/D3的HIV-1Tat濃度"f1000ng/ml，作用時(shí)間"f24h時(shí)，對細(xì)胞活性無明顯影響。 第二部分PPARγ激動劑對HIV-1Tat誘導(dǎo)的黏附分子蛋白表達(dá)的影響 【目的】探討過氧化物酶體增殖物激活受體γ （peroxisomeproliferator-activated receptor gamma,PPARγ）激動劑羅格列酮對HIV-1Tat誘導(dǎo)的hCMEC/D3中細(xì)胞間黏附分子-1(intercellular adhesionmolecule-1,ICAM-1)和血管細(xì)胞黏附分子-1(vascular cell adhesionmolecule-1,VCAM-1)蛋白表達(dá)的影響。 【方法】將hCMEC/D3分為四組進(jìn)行處理，12h后收集細(xì)胞總蛋白，采用蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測各組hCMEC/D3中ICAM-1、VCAM-1的蛋白表達(dá)。 【結(jié)果】 HIV-1Tat上調(diào)hCMEC/D3中ICAM-1和VCAM-1的蛋白表達(dá)（P㩳0.05和P0.01），PPARγ激動劑羅格列酮抑制HIV-1Tat誘導(dǎo)的ICAM-1蛋白表達(dá)（P㩳0.05），對HIV-1Tat誘導(dǎo)的VCAM-1蛋白表達(dá)下調(diào)作用則較弱（P0.05）。 【結(jié)論】PPARγ激動劑羅格列酮可在一定程度上抑制HIV-1Tat誘導(dǎo)的黏附分子表達(dá)增加。 第三部分PPARγ激動劑對HIV-1Tat誘導(dǎo)的黏附分子mRNA表達(dá)影響及機(jī)制研究 【目的】探討PPARγ激動劑羅格列酮對HIV-1Tat誘導(dǎo)的ICAM-1、VCAM-1的mRNA表達(dá)影響及可能的作用機(jī)制。 【方法】將hCMEC/D3分為八組進(jìn)行處理，6h后提取細(xì)胞總RNA，實(shí)時(shí)反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Real-time RT-PCR）法檢測ICAM-1和VCAM-1的mRNA表達(dá)；將hCMEC/D3分為四組進(jìn)行處理，1h后收集細(xì)胞總蛋白，Western blot法檢測hCMEC/D3中Akt的蛋白表達(dá)。 【結(jié)果】 HIV-1Tat上調(diào)ICAM-1和VCAM-1的mRNA表達(dá)（均P0.001），PPARγ激動劑羅格列酮抑制HIV-1Tat誘導(dǎo)的ICAM-1、VCAM-1的mRNA表達(dá)（均P0.01），這種抑制作用可被PPARγ拮抗劑GW9662（均P0.01）和Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑KP3721逆轉(zhuǎn)（均P0.01）；HIV-1Tat處理后的hCMEC/D3磷酸化Akt（p-Akt）水平顯著上調(diào)（P㩳0.01），PPARγ激動劑羅格列酮顯著抑制HIV-1Tat誘導(dǎo)的Akt磷酸化反應(yīng)（P㩳0.01）。 【結(jié)論】PPARγ激動劑羅格列酮通過Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制HIV-1Tat誘導(dǎo)的黏附分子ICAM-1、VCAM-1促炎反應(yīng)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R512.91

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 ;Peroxisome proliferator-activated receptor gamma inhibits hepatic fibrosis in rats[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2011年01期

2 杜洋,劉栩晗,郭蓮英,沈潔,王曉陶,施廣霞;過氧化物酶體增生物激活的受體γ活化對慢性阻塞性肺疾病大鼠肺中性粒細(xì)胞趨化因子表達(dá)的影響[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2005年04期

3 俸軍林;李浩;吳嵐;李清華;郭萃蓉;劉開祥;;吡格列酮預(yù)處理對大鼠腦缺血再灌注損傷保護(hù)作用及機(jī)制[J];中國老年學(xué)雜志;2011年13期

4 曹曉飛;張峰;張業(yè)偉;;PPARγ激動劑15d-PGJ_2對大鼠肝缺血再灌注損傷中細(xì)胞凋亡的影響[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2008年18期

5 ;PPARγ pathway activation results in apoptosis and COX-2 inhibition in HepG2 cells[J];World Journal of Gastroenterology;2003年06期

6 ;Pioglitazone attenuates the severity of sodium taurocholate-induced severe acute pancreatitis[J];World Journal of Gastroenterology;2007年13期

本文編號：2434180