【摘要】：第一部分人腦微血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng)、細胞生長特性及HIV-1Tat對細胞活性影響的初步研究 【目的】探索適宜人腦微血管內(nèi)皮細胞（human cerebral microvascularendothelial cells,hCMEC/D3）生長的培養(yǎng)體系，明確細胞生長特性，了解人類免疫缺陷病毒-1型反式轉(zhuǎn)錄激活因子（HIV-1transactivator oftranscription,HIV-1Tat）對細胞活性影響，，為后續(xù)研究奠定基礎。 【方法】以添加堿性成纖維細胞生長因子、氫化可的松、抗壞血酸、脂質(zhì)濃縮物、青鏈霉素及胎牛血清等成分的EBM-2完全培養(yǎng)液進行細胞培養(yǎng)并傳代擴增，倒置相差顯微鏡觀察細胞生長形態(tài)特征，繪制細胞生長曲線；采用MTT法檢測HIV-1Tat對hCMEC/D3細胞活性的影響。 【結(jié)果】細胞傳代后生長能力強，性狀穩(wěn)定，明確細胞生長規(guī)律；濃度梯度的HIV-1Tat250ng/ml、500ng/ml、1000ng/ml處理細胞24h后細胞存活率分別為97.60%、91.57%和87.15%；1000ng/ml HIV-1Tat處理細胞6h、12h、18h和24h后細胞存活率分別為96.86%、92.31%、88.06%和86.79%。 【結(jié)論】成功構(gòu)建適宜hCMEC/D3生長的培養(yǎng)體系，細胞生長狀態(tài)良好；MTT結(jié)果表明當處理hCMEC/D3的HIV-1Tat濃度"f1000ng/ml，作用時間"f24h時，對細胞活性無明顯影響。 第二部分PPARγ激動劑對HIV-1Tat誘導的黏附分子蛋白表達的影響 【目的】探討過氧化物酶體增殖物激活受體γ （peroxisomeproliferator-activated receptor gamma,PPARγ）激動劑羅格列酮對HIV-1Tat誘導的hCMEC/D3中細胞間黏附分子-1(intercellular adhesionmolecule-1,ICAM-1)和血管細胞黏附分子-1(vascular cell adhesionmolecule-1,VCAM-1)蛋白表達的影響。 【方法】將hCMEC/D3分為四組進行處理，12h后收集細胞總蛋白，采用蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測各組hCMEC/D3中ICAM-1、VCAM-1的蛋白表達。 【結(jié)果】 HIV-1Tat上調(diào)hCMEC/D3中ICAM-1和VCAM-1的蛋白表達（P㩳0.05和P0.01），PPARγ激動劑羅格列酮抑制HIV-1Tat誘導的ICAM-1蛋白表達（P㩳0.05），對HIV-1Tat誘導的VCAM-1蛋白表達下調(diào)作用則較弱（P0.05）。 【結(jié)論】PPARγ激動劑羅格列酮可在一定程度上抑制HIV-1Tat誘導的黏附分子表達增加。 第三部分PPARγ激動劑對HIV-1Tat誘導的黏附分子mRNA表達影響及機制研究 【目的】探討PPARγ激動劑羅格列酮對HIV-1Tat誘導的ICAM-1、VCAM-1的mRNA表達影響及可能的作用機制。 【方法】將hCMEC/D3分為八組進行處理，6h后提取細胞總RNA，實時反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應（Real-time RT-PCR）法檢測ICAM-1和VCAM-1的mRNA表達；將hCMEC/D3分為四組進行處理，1h后收集細胞總蛋白，Western blot法檢測hCMEC/D3中Akt的蛋白表達。 【結(jié)果】 HIV-1Tat上調(diào)ICAM-1和VCAM-1的mRNA表達（均P0.001），PPARγ激動劑羅格列酮抑制HIV-1Tat誘導的ICAM-1、VCAM-1的mRNA表達（均P0.01），這種抑制作用可被PPARγ拮抗劑GW9662（均P0.01）和Akt信號轉(zhuǎn)導通路抑制劑KP3721逆轉(zhuǎn)（均P0.01）；HIV-1Tat處理后的hCMEC/D3磷酸化Akt（p-Akt）水平顯著上調(diào)（P㩳0.01），PPARγ激動劑羅格列酮顯著抑制HIV-1Tat誘導的Akt磷酸化反應（P㩳0.01）。 【結(jié)論】PPARγ激動劑羅格列酮通過Akt信號轉(zhuǎn)導通路抑制HIV-1Tat誘導的黏附分子ICAM-1、VCAM-1促炎反應。
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【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R512.91

【參考文獻】

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本文編號：2434180