【摘要】：目的體外誘導(dǎo)獲得對(duì)PA-824、利奈唑胺(linezolid,LZD)及同時(shí)對(duì)PA-824和利奈唑胺(linezolid,LZD)耐藥的結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)菌株。方法分別將MTB標(biāo)準(zhǔn)菌株H37Rv在濃度2倍遞增的含藥(PA-824或LZD)固體培養(yǎng)基上傳代培養(yǎng),逐步誘導(dǎo)菌株對(duì)PA-824、LZD耐藥,運(yùn)用微孔板阿爾瑪藍(lán)(microplate alamar blue assay,MABA)法測(cè)定部分抗結(jié)核藥物對(duì)PA-824、LZD耐藥菌株的最低抑菌濃度(minimal inhibitory concentration,MIC),對(duì)PA-824耐藥菌株及LZD耐藥菌株測(cè)序鑒定耐藥相關(guān)基因(ddn和fgd1或rpl C基因)的突變情況。分別將誘導(dǎo)的PA-824耐藥菌株和LZD耐藥菌株在無(wú)藥固體培養(yǎng)基上連續(xù)傳代培養(yǎng)10代以觀察耐藥穩(wěn)定性變化。然后將獲得的PA-824耐藥菌株、LZD耐藥菌株在濃度2倍遞增的含藥(PA-824和LZD)固體培養(yǎng)基上進(jìn)行傳代培養(yǎng),逐步誘導(dǎo)菌株同時(shí)對(duì)PA-824和LZD耐藥(雙重耐藥菌株),運(yùn)用MABA法測(cè)定PA-824和LZD對(duì)雙重耐藥菌株的MIC值,并對(duì)PA-824和LZD雙重耐藥菌株測(cè)序鑒定耐藥相關(guān)基因(ddn或fgd1和rpl C基因)的突變情況。結(jié)果在含PA-824的培養(yǎng)基上,H37Rv經(jīng)逐步誘導(dǎo)后獲得5株單克隆MTB菌株,它們對(duì)PA-824的MIC值(20μg/ml)是誘導(dǎo)前(0.07μg/ml)8倍以上,且對(duì)TBA-354同時(shí)發(fā)生交叉耐藥。測(cè)序結(jié)果顯示fgd1基因未發(fā)生突變,但5株均檢測(cè)到ddn基因突變。耐藥株在無(wú)藥固體培養(yǎng)基上連續(xù)傳代10代后,MIC值無(wú)明顯變化。在含LZD的培養(yǎng)基上,H37Rv誘導(dǎo)后獲得的7株單克隆MTB菌株,其對(duì)LZD的MIC值范圍是5.99~18.28μg/ml,為誘導(dǎo)前(0.25μg/ml)8倍以上,成功獲得LZD耐藥株,且對(duì)Sutezolid(PNU-100480)同時(shí)發(fā)生交叉耐藥,7株菌株均檢測(cè)到rpl C基因中T460C的突變。LZD耐藥株在無(wú)藥固體培養(yǎng)基上連續(xù)傳代10代,MIC值有所下降(范圍為4.71~7.47μg/ml),但均穩(wěn)定在誘導(dǎo)前8倍以上。PA-824耐藥菌株及LZD耐藥菌株在濃度2倍遞增的含藥(PA-824和LZD)固體培養(yǎng)基上進(jìn)行傳代培養(yǎng),成功得到26株P(guān)A-824和LZD雙重耐藥菌株,它們對(duì)PA-824和LZD的MIC值均超過誘導(dǎo)前8倍以上,并且部分菌株(如LP11和PL7)的耐藥相關(guān)基因(ddn和rpl C基因)同時(shí)發(fā)生突變,成功獲得對(duì)PA-824及LZD雙重耐藥的菌株。結(jié)論通過體外誘導(dǎo)可以獲得同時(shí)對(duì)兩種硝基咪唑類(Nitroimidazoles)藥物和兩種VA唑烷酮類(Oxazolidinones)藥物均耐藥的MTB菌株;MTB對(duì)硝基咪唑類藥物的耐藥可能與ddn基因突變有關(guān);MTB對(duì)VA唑烷酮類藥物的耐藥可能與rpl C基因突變關(guān)系密切;MTB對(duì)硝基咪唑類和VA唑烷酮類藥物的耐藥穩(wěn)定性較強(qiáng)。目的應(yīng)用硝基咪唑-VA唑烷酮雙重耐藥結(jié)核分枝桿菌菌株,篩選抗結(jié)核活性良好的新化合物,并評(píng)估新化合物在小動(dòng)物體內(nèi)的抗結(jié)核活性。方法應(yīng)用PA-824和LZD雙重耐藥的MTB菌株,進(jìn)行新化合物的MIC實(shí)驗(yàn)。建立小鼠氣溶膠感染模型,將小鼠隨機(jī)分組并給藥治療。感染后第10天,將基線組小鼠解剖并進(jìn)行肺組織CFU計(jì)數(shù),治療3周后將全部小鼠解剖,觀察治療情況并記錄結(jié)果。結(jié)果應(yīng)用雙功能分子篩選模型,成功篩選出部分抗TB活性良好的新化合物。通過比較分析小鼠肺組織CFU計(jì)數(shù)的下降數(shù)值,評(píng)價(jià)了部分新化合物體內(nèi)抗TB活性。結(jié)論P(yáng)A-824和利奈唑胺雙重耐藥MTB菌株可用于篩選抗TB活性良好的新化合物。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R52

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李小微,遲寧;對(duì)耐藥菌有效的新物質(zhì)[J];日本醫(yī)學(xué)介紹;2000年12期

2 李文;;怎樣防止耐藥菌的產(chǎn)生?[J];赤腳醫(yī)生雜志;1977年09期

3 陳宏;;院內(nèi)感染分析和多藥耐藥菌及泛耐藥菌的研究[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2011年33期

4 郭莉莉;武密玲;;淺談耐藥菌株蔓延的途徑與應(yīng)對(duì)[J];內(nèi)蒙古中醫(yī)藥;2011年14期

5 胡海斌;;“耐藥菌株”中草藥篩選試驗(yàn)的研究[J];廣東醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào);1990年01期

6 梅衛(wèi)玲;毛斐冰;毛W毩，

本文編號(hào)：2429357