【摘要】：目的：丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus, HCV）為單股正鏈RNA病毒，全長(zhǎng)為9.6kb。目前全世界近3%的人口為HCV感染者，其中50-80%以上的患者由急性轉(zhuǎn)為慢性持續(xù)感染，甚至發(fā)展為肝硬化、肝細(xì)胞癌。研究發(fā)現(xiàn)固有免疫系統(tǒng)和獲得性免疫系統(tǒng)均參與了HCV感染、清除及慢性化過程，但其確切機(jī)制尚不十分清楚。TIPE2（Tumor necrosis factor-α-inducedprotein8-like2, TNFAIP8L2），即腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白8型-2，是新近發(fā)現(xiàn)的一種免疫信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路重要調(diào)節(jié)器。TIPE2是先天性免疫及獲得性免疫的負(fù)性調(diào)節(jié)者，在炎癥性疾病中發(fā)揮重要作用，也通過作用于Ras信號(hào)通路提供從炎癥到腫瘤的分子橋梁。先前的研究表明TIPE2不僅高表達(dá)于免疫細(xì)胞和組織，如淋巴結(jié)、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞等，也表達(dá)于其他非免疫細(xì)胞，如腺上皮細(xì)胞、分層或假?gòu)?fù)層上皮細(xì)胞及肝細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞、軟骨細(xì)胞等。而且對(duì)人TIPE2特性的研究表明TIPE2可能參與多種疾病的發(fā)生發(fā)展，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、糖尿病腎病、慢性乙型肝炎、肝癌、腎癌等，但具體機(jī)制尚不清楚。Luan等應(yīng)用蛋白印跡法（Western blot）和RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，從BALB/C小鼠脾臟分離提取的CD4+CD25+Treg細(xì)胞（簡(jiǎn)稱Treg細(xì)胞）中可以檢測(cè)到TIPE2的表達(dá)，且能增強(qiáng)Treg細(xì)胞的免疫抑制作用，提示TIPE2基因可能與Treg細(xì)胞介導(dǎo)的免疫調(diào)控機(jī)制有關(guān)，但是其具體機(jī)制尚不十分清楚。Treg細(xì)胞是一群具有免疫抑制作用的T細(xì)胞亞群，在感染、腫瘤免疫和移植中發(fā)揮了重要作用。據(jù)報(bào)道，Treg細(xì)胞可分泌免疫抑制因子從而直接抑制效應(yīng)性T細(xì)胞的功能。在很多腫瘤疾病中，Treg細(xì)胞的廣泛浸潤(rùn)提示著預(yù)后差、生存率低。人叉頭樣轉(zhuǎn)錄因子p3（forkhead/winged helix transcription factor p3, FOXP3）基因是轉(zhuǎn)錄因子forkhead/winged-helix家族成員之一，已被廣泛認(rèn)可是Treg細(xì)胞的特異性標(biāo)記物，是調(diào)控Treg細(xì)胞發(fā)育、分化及成熟的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子。細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（cytotoxic T lymphocyte-associatedantigen4, CTLA-4）是T細(xì)胞活化的負(fù)性調(diào)節(jié)子，是Treg細(xì)胞的細(xì)胞表面分子，對(duì)T細(xì)胞活化有著抑制作用。鑒于免疫系統(tǒng)內(nèi)TIPE2基因的正常表達(dá)可以有效的防止機(jī)體過度反應(yīng)和維持免疫穩(wěn)態(tài)，我們推測(cè)TIPE2基因和FOXP3、CTLA-4在慢性丙型肝炎發(fā)病機(jī)制中具有某種關(guān)聯(lián)性。 因此，本課題的主要目的是通過檢測(cè)TIPE2基因及FOXP3、CTLA-4在慢性丙型肝炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheral blood mononuclearcells, PBMCs）中的表達(dá)情況，一方面了解慢性丙型肝炎患者PBMCs中TIPE2基因表達(dá)情況，另一方面探討TIPE2和FOXP3、CTLA-4在慢性丙型肝炎發(fā)病機(jī)制及進(jìn)展中的作用，為進(jìn)一步闡明TIPE2在慢性丙型肝炎發(fā)生和發(fā)展中的調(diào)控作用奠定基礎(chǔ)。 方法： 1病例選擇 慢性丙型肝炎患者60例，男31例，女29例，平均年齡49.40±14.31歲，均為2012年5月至2013年10月河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合肝病科門診及住院患者，診斷均符合2000年9月西安會(huì)議修訂的病毒性肝炎防治方案標(biāo)準(zhǔn)[1]及2004年丙型肝炎防治指南修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。同時(shí)排除其他合并病毒性肝炎及肝臟疾病。同期選擇健康志愿者42例，男12例，女30例，平均年齡為50.21±8.51歲。所有患者及健康志愿者均清晨空腹抽取抗凝靜脈血7ml，用于分離PBMCs檢測(cè)。抽取不抗凝靜脈血5ml，分離血清備用。 2治療方法 所有慢性丙型肝炎患者均給予干擾素聯(lián)合利巴韋林抗病毒治療，根據(jù)白細(xì)胞及中性粒細(xì)胞減少情況，給予升白藥物治療。肝功能異�；颊呓o予保肝降酶、退黃等治療。 3外周血單個(gè)核細(xì)胞中TIPE2、FOXP3、CTLA-4基因檢測(cè) Ficoll密度梯度離心法常規(guī)分離PBMCs，Trizol一步法提取PBMCs中的總RNA，利用紫外分光光度計(jì)測(cè)量RNA，吸光度（A）260/（A）280nm的值在1.8-2.0時(shí)用于實(shí)驗(yàn)，，利用M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶合成制備cDNA，應(yīng)用Primer5.0設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)合成特異性引物，RT-PCR檢測(cè)TIPE2、FOXP3、CTLA-4mRNA的表達(dá)。 4血清檢測(cè) 留取慢性丙型肝炎患者不抗凝靜脈血5ml，分離血清，全自動(dòng)生化儀酶法檢測(cè)肝功能，ELISA法測(cè)抗-HCV，實(shí)時(shí)熒光定量PCR探針法檢測(cè)HCV-RNA。 結(jié)果： 1慢性丙型肝炎患者PBMCs中TIPE2基因的表達(dá)及與抗病毒治療的關(guān)系 結(jié)果顯示慢性丙型肝炎患者PBMCs中TIPE2mRNA的表達(dá)水平較健康對(duì)照組顯著降低（0.50±0.19vs0.71±0.17，P＜0.01）；其中21例慢性丙型肝炎患者在抗病毒治療前后分別檢測(cè)，結(jié)果顯示PBMCs中TIPE2mRNA水平治療后較治療前明顯升高（0.48±0.12vs0.59±0.12，P＜0.01）。 2慢性丙型肝炎患者PBMCs中FOXP3基因的表達(dá)及與抗病毒治療的關(guān)系 慢性丙型肝炎患者PBMCs中FOXP3mRNA的表達(dá)水平較健康對(duì)照組明顯升高（0.77±0.38vs0.40±0.09，P＜0.01）；21例慢性丙型肝炎患者在抗病毒治療前后分別檢測(cè)，結(jié)果顯示PBMCs中FOXP3mRNA水平治療后較治療前明顯下降（0.85±0.35vs0.50±0.06，P＜0.01）。 3慢性丙型肝炎患者PBMCs中CTLA-4mRNA基因的表達(dá)及與抗病毒治療的關(guān)系 慢性丙型肝炎患者PBMCs中CTLA-4mRNA的表達(dá)水平較健康對(duì)照組顯著升高（0.67±0.19vs0.44±0.13，P＜0.01），21例慢性丙型肝炎患者抗病毒治療前后分別檢測(cè)，結(jié)果顯示PBMCs中CTLA-4mRNA水平治療后較治療前明顯下降（0.70±0.19vs0.55±0.14，P＜0.01）。 4TIPE2基因的表達(dá)與慢性丙型肝炎臨床指標(biāo)的相關(guān)性 分析慢性丙型肝炎患者臨床資料，依據(jù)慢性丙型肝炎患者血清中HCV-RNA、 ALT、 AST、 TBil水平，將其分為HCV-RNA低水平組（HCV-RNA≤1×105IU/ml）和HCV-RNA高水平組（HCV-RNA＞1×105IU/ml）；ALT正常組（ALT≤40U/L）和異常組（ALT＞40U/L）；AST正常組（AST≤40U/L）和異常組（AST＞40U/L）以及TBil正常組（TBiL≤20μmol/L）和異常組（TBil＞20μmol/L），統(tǒng)計(jì)分析顯示，慢丙肝患者PBMCs中TIPE2mRNA的表達(dá)水平HCV-RNA在低水平組顯著高于高水平組（0.63±0.17vs0.37±0.10，P0.01），在ALT、AST、TBil正常組顯著高于異常組（ALT，0.61±0.17vs0.37±0.10，P0.01；AST，0.61±0.17vs0.36±0.10，P0.01；TBil，0.59±0.18vs0.36±0.10，P0.01），且與ALT、AST水平呈負(fù)相關(guān)（ALT，r=-0.529, P0.01；AST，r=-0.567，P0.01），與HCV-RNA、TBil水平無明顯相關(guān)關(guān)系。 5TIPE2的表達(dá)與FOXP3、CTLA-4表達(dá)的相關(guān)性 進(jìn)一步應(yīng)用SPSS13.0分析顯示，TIPE2的表達(dá)與FOXP3、CTLA-4呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為（FOXP3，r=-0.563，P0.01；CTLA-4，r=-0.613，P0.01）。 結(jié)論： 1慢性丙型肝炎患者PBMCs中TIPE2基因的表達(dá)水平顯著低于健康對(duì)照者，接受抗病毒治療后表達(dá)水平升高。 2慢性丙型肝炎患者PBMCs中FOXP3、CTLA-4基因的表達(dá)水平顯著高于健康對(duì)照者，抗病毒治療后表達(dá)水平下降。 3TIPE2基因表達(dá)水平影響肝細(xì)胞壞死和炎癥程度以及丙肝病毒復(fù)制。 4TIPE2、FOXP3、CTLA-4可能通過調(diào)節(jié)CD4+CD25+Treg細(xì)胞的免疫功能參與了慢性丙型肝炎的發(fā)病過程。 5以上結(jié)果提示TIPE2基因通過負(fù)性調(diào)控免疫反應(yīng)參與慢性丙型肝炎的發(fā)病過程及病程演變的過程。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R512.63

【參考文獻(xiàn)】

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1 黎民君;郭麗X;陳利媚;馮思瓊;;CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在急性淋巴細(xì)胞白血病患者中的變化研究[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生;2013年07期

2 朱一婧;姜鳳超;;以調(diào)控Ras信號(hào)傳導(dǎo)為靶標(biāo)的抗腫瘤藥物研究進(jìn)展[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2009年01期

3 王永祥;馬nI;高琦;朱法良;張利寧;;TIPE2和炎性細(xì)胞因子在鼠動(dòng)脈硬化斑塊形成中的表達(dá)及其相互關(guān)系[J];山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2008年12期

4 福軍亮;徐東平;施明;張輝;金磊;湯紫榮;王福生;;乙型肝炎患者外周血CD_4~+ CD_(25)~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表型與功能分析[J];中華內(nèi)科雜志;2006年08期

5 ;The Phenotypic Characterization of Naturally Occurring Regulatory CD4~+CD25~+T Cells[J];Cellular & Molecular Immunology;2006年03期

6 ;丙型肝炎防治指南[J];臨床肝膽病雜志;2004年04期

7 中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與,寄生蟲病學(xué)分會(huì),肝病學(xué)分會(huì);病毒性肝炎防治方案[J];中華肝臟病雜志;2000年06期

本文編號(hào)：2424945