【摘要】：目的1.了解重慶地區(qū)耐多藥結(jié)核病(MDR-TB)患者對(duì)二線抗結(jié)核藥物的耐藥現(xiàn)狀,為制定合理的MDR-TB化療方案及適合本地區(qū)的MDR-TB控制策略提供參考和依據(jù)。2.分析重慶市MDR-TB臨床菌株二線抗結(jié)核藥物耐藥相關(guān)基因gyr A、gyr B、rrs和eis的突變特征及其與二線抗結(jié)核藥物耐藥的關(guān)系,為探索二線抗結(jié)核藥物的耐藥機(jī)制及適合本地區(qū)耐藥分子生物學(xué)快速檢測(cè)方法的建立提供科學(xué)依據(jù)。方法1.依托重慶市MDR-TB防治及可疑者篩查工作,對(duì)2015年1月至2016年8月全市39個(gè)區(qū)(縣)結(jié)核病防治機(jī)構(gòu)收治的698例可疑MDR-TB患者涂陽(yáng)痰標(biāo)本臨床分離株,進(jìn)行噻吩-2-羧酸肼(TCH)和對(duì)硝基苯甲酸(PNB)生長(zhǎng)試驗(yàn),以初步鑒定菌種;對(duì)初步鑒定為結(jié)核分枝桿菌的菌株,應(yīng)用比例法檢測(cè)其對(duì)一、二線抗結(jié)核藥物的敏感性,對(duì)最終確診的168例MDR-TB患者的二線抗結(jié)核藥物耐藥狀況進(jìn)行分析。2.對(duì)以上168例MDR-TB患者的痰標(biāo)本臨床分離株,用PCR-DNA直接測(cè)序技術(shù),分別對(duì)氧氟沙星(Ofx)耐藥相關(guān)基因gyr A、gyr B,卡那霉素(Km)耐藥相關(guān)基因rrs、eis的突變特征進(jìn)行分析。結(jié)果1.168例MDR-TB患者對(duì)6種二線抗結(jié)核藥物的總耐藥率為50.6%(85/168),其中,Ofx任意耐藥率最高,為41.7%(70/168),之后分別為Km(16.7%)、對(duì)氨基水楊酸(PAS)(14.3%)、阿米卡星(Am)(13.1%)、卷曲霉素(Cm)(8.3%)及丙硫異煙胺(Pto)(7.7%)。168例MDR-TB患者中,發(fā)生廣泛耐藥結(jié)核病(XDR-TB)和廣泛耐藥結(jié)核病前期(Pre-XDR-TB)共計(jì)77例(45.8%,77/168),其中XDR-TB患者22例(13.1%),Pre-XDR-TB患者55例(32.7%)。各登記分類(lèi)中復(fù)治失敗患者的XDR-TB及Pre-XDR-TB總發(fā)生率最高,為60.9%(14/23)。2.168株MDR結(jié)核分枝桿菌中有70株對(duì)Ofx耐藥,其中57株(81.4%,57/70)發(fā)生gyr A基因突變,突變位點(diǎn)包括74、88、89、90、91和94位密碼子,94位突變頻率最高,為52.9%(37/70)。gyr A基因主要突變類(lèi)型為Asp94Gly(17株)、Ala90Val(14株)、Asp94Ala(10株)。另外,57株gyr A基因突變株中有5株為雙位點(diǎn)突變。70株Ofx耐藥株中,5株發(fā)生了gyr B基因突變,突變率為7.1%(5/70),突變類(lèi)型為Asp461Asn 2株、Gly512Arg 3株。3.168株MDR結(jié)核分枝桿菌中有28株對(duì)Km耐藥,28株Km耐藥表型菌株中,19株(67.9%,19/28)發(fā)生rrs基因突變,4株(14.3%,4/28)發(fā)生eis基因突變。19株rrs基因突變類(lèi)型為A1401G 18株,G1339A 1株。4株eis基因啟動(dòng)子區(qū)突變類(lèi)型為G(-10)A 3株、C(-14)T1株。4.與傳統(tǒng)比例法藥敏實(shí)驗(yàn)比較,用gyr A基因突變檢測(cè)Ofx耐藥性,其敏感度、特異度分別為81.4%、92.9%,陽(yáng)性、陰性預(yù)測(cè)值是89.1%、87.5%;對(duì)于gyr B基因,雖然檢測(cè)Ofx耐藥的特異度(94.9%)較高,但敏感度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值及陰性預(yù)測(cè)值分別僅為7.1%、50.0%及58.9%。以rrs基因突變作為Km耐藥菌株診斷標(biāo)記物,其敏感度、特異度分別為67.9%、99.3%,陽(yáng)性、陰性預(yù)測(cè)值是95.0%、93.9%;eis基因檢測(cè)Km耐藥的敏感度、特異度、陽(yáng)性及陰性預(yù)測(cè)值分別為14.3%、99.3%、80.0%及85.3%。結(jié)論1.重慶地區(qū)MDR-TB患者對(duì)二線抗結(jié)核藥物尤其是Ofx的耐藥狀況較為嚴(yán)重,MDR-TB患者中XDR-TB和Pre-XDR-TB發(fā)生率較高。應(yīng)加強(qiáng)對(duì)MDR-TB患者的耐藥性監(jiān)測(cè),防止Pre-XDR-TB甚至XDR-TB的產(chǎn)生。2.gyr A基因突變是重慶市MDR結(jié)核分枝桿菌對(duì)Ofx耐藥的主要機(jī)制,且以90、91、94位密碼子突變?yōu)橹�。gyr A基因是比較理想的檢測(cè)Ofx耐藥的分子標(biāo)記物,具有較好的診斷Ofx耐藥菌株的臨床應(yīng)用價(jià)值;gyr B基因與Ofx耐藥無(wú)明顯相關(guān)性,對(duì)于Ofx耐藥性的診斷,gyr B基因并不是一個(gè)很好的分子標(biāo)記物。3.重慶地區(qū)Km耐藥的主要機(jī)制為rrs基因第1401位A→G突變,其次還與eis基因啟動(dòng)子區(qū)突變有關(guān)。rrs基因應(yīng)用于本地區(qū)Km耐藥的分子生物學(xué)快速檢測(cè)是可行的,eis基因是一種較有前途的耐藥診斷標(biāo)記物,可以與rrs基因進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè),以提高本地區(qū)Km耐藥性快速檢測(cè)的敏感度和準(zhǔn)確度。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R446.5;R52

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2415905