【摘要】：艾滋病(AIDS)是一種由人類(lèi)免疫性缺陷病毒(HIV)引起的一種后天性細(xì)胞免疫功能出現(xiàn)缺陷而導(dǎo)致嚴(yán)重隨機(jī)感染及/或繼發(fā)腫瘤并致命的一種疾病。HIV病毒分為兩種：HIV-1, HIV-2。HIV-1的毒性與傳染性均高于HIV-2,因此目前主要針對(duì)HIV-1進(jìn)行大量的研究。HIV-1為帶有Ⅰ型膜融合蛋白的包膜病毒,它進(jìn)入靶細(xì)胞首先是利用它的包膜表面gp120亞基與靶細(xì)胞主要受體CD4和輔助受體CCR5或者CXCR4先后發(fā)生結(jié)合,導(dǎo)致它的跨膜亞基gp41構(gòu)象發(fā)生改變,其N(xiāo)端融合肽插入到宿主細(xì)胞膜中,gp41形成gp41NHR三聚體形式的中間態(tài),然后,gp41的NHR和CHR區(qū)域形成穩(wěn)定的6-HB結(jié)構(gòu),引起病毒包膜與靶細(xì)胞膜的融合。在gp41NHR的溝槽內(nèi)有一個(gè)深的疏水口袋區(qū)域,并且這個(gè)區(qū)域?qū)τ贖IV-1病毒的膜融合和6-HB的穩(wěn)定性非常關(guān)鍵,因此,這個(gè)疏水區(qū)被認(rèn)為是發(fā)展HIV融合抑制劑的重要靶點(diǎn)。 利用計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì),將gp41口袋區(qū)作為靶點(diǎn),并結(jié)合本室建立以ELISA為手段的gp416HB抑制實(shí)驗(yàn),Jiang等人成功地篩選出ADS-J1小分子化合物,它抑制HIV介導(dǎo)的細(xì)胞融合和HIV-1復(fù)制活性達(dá)到低微摩爾水平。機(jī)制研究表明,ADS-J1能夠和一個(gè)可溶性雜交分子IQN17結(jié)合,并且能夠顯著抑制PIE7與IQN17口袋區(qū)特異性地結(jié)合。IQN17是由GCN4序列和形成疏水口袋區(qū)的N-多肽N17聯(lián)接組成,它可以模擬形成gp41三聚體上的口袋區(qū)結(jié)構(gòu)。PIE7是一個(gè)能與IQN17口袋區(qū)特異性地結(jié)合的短肽。另外,ADS-J1能夠阻止衍生于病毒gp41NHR和CHR多肽所模擬的6-HB的形成。計(jì)算機(jī)模型分析表明,ADS-J1的磺酸基團(tuán)能夠與gp41口袋區(qū)的第574位帶正電荷的賴(lài)氨酸(K574)結(jié)合,但是將帶負(fù)電荷的氨基酸替代K574后則完全消除了ADS-J1與gp41口袋區(qū)的結(jié)合。 然而,Este等人認(rèn)為ADS-J1既不作用于gp41口袋區(qū),也不作用于gp41其它區(qū)域,而是靶向gp120的V3區(qū)域。這主要源于他們沒(méi)有誘導(dǎo)出突變點(diǎn)位于gp41口袋區(qū)的ADS-J1抗性株,相反,他們誘導(dǎo)出了位于gp120V3區(qū)域的ADS-J1抗性株。然而,他們選用的HIV-1病毒株是AR177(靶向gp120的抑制劑)抗性株或者相關(guān)病毒株作為野生型毒株,在ADS-J1存在下,侵染MT-4細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)突變。由于他們沒(méi)有設(shè)計(jì)一個(gè)靶向gp41口袋區(qū)的肽或者小分子化合物作為對(duì)照,因此這些結(jié)果不是令人信服的。 因此,本課題主要以ADS-J1為研究對(duì)象,利用gp41口袋區(qū)的假病毒突變株和HIV-1T-2635耐藥性病毒株,探討了ADS-J1的耐受機(jī)制。另外,對(duì)ADS-J1進(jìn)行了抑制T-20耐受株、HIV-1臨床分離株的活性研究。同時(shí),進(jìn)行了將ADS-J1與不同機(jī)制的抗病毒藥物聯(lián)合應(yīng)用時(shí)抑制HIV-1IIIB和HIV-1Bal的活性研究,評(píng)估了它們潛在的協(xié)同效應(yīng)。 實(shí)驗(yàn)方法： 1)Gp41口袋區(qū)Q64和A67突變對(duì)ADS-J1抑制HIV-1病毒活性的影響。利用FuGENE6轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染的方法,對(duì)以前構(gòu)建好的假病毒Q64A,Q64L, A67G和A67S進(jìn)行病毒包裝；測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)p24蛋白的不同濃度與對(duì)應(yīng)的A450值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出假病毒中p24蛋白的含量；將濃度為250ng p24/ml的假病毒與1×105/ml的TZM-B1細(xì)胞共同培養(yǎng),測(cè)定假病毒感染性；將濃度為250ng p24/ml的假病毒,與不同濃度的ADS-J1,對(duì)照抑制劑C34、T20分別孵育30min,加入密度為1×105/ml的TZM-B1細(xì)胞,感染72h后,測(cè)定相應(yīng)的熒光吸收值,采用Calcusyn軟件計(jì)算IC50。 2)T-2635耐藥株對(duì)ADS-J1抑制HIV-1病毒活性的影響。采用CaCl2轉(zhuǎn)染的方法將T-2635耐藥株質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞中,72h后收集T-2635耐藥株上清病毒粒子,然后將其侵染MT-2細(xì)胞,進(jìn)一步擴(kuò)增病毒,根據(jù)CPE現(xiàn)象,在感染4-7天后收集病毒上清；根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出T-2635耐藥株p24蛋白的含量；在測(cè)定這些抗性株具有感染性后,將濃度為5ng p24/ml的T-2635耐藥株與不同濃度的ADS-J1,對(duì)照抑制劑T2635、AZT分別孵育30min,加入密度為1×105/ml的TZM-B1細(xì)胞,感染72h后,測(cè)定相應(yīng)的熒光吸收值,采用Calcusyn軟件計(jì)算IC50。 3)N36Fd和它的突變體N36(Q64A)Fd, N36(Q64L)Fd, N36(A67G)Fd, N36(A67S)Fd, N36(Q66R)Fd構(gòu)建、蛋白表達(dá)和純化。采用PCR方法分別擴(kuò)增出Fd片段、N36及其突變體片段,然后進(jìn)行二次PCR將N36及其突變體分別和Fd片段連接上,構(gòu)建出N36Fd和它的突變體；在0.1mM誘導(dǎo)劑IPTG存在下,采用原核表達(dá)的方法,表達(dá)出上述6種蛋白；利用Glutathione-Sepharose4B層析柱以及3KD、30KD濃縮管,進(jìn)行蛋白的濃縮、純化。 4)天然聚丙烯酰胺凝膠電泳(N-PAGE)檢測(cè)ADS-J1對(duì)N36Fd及其突變體和C34相互結(jié)合形成的復(fù)合體6-HB的抑制作用。將N36Fd及其突變體分別加入PBS或者不同濃度的ADS-J1,孵育30min后,加入C34在共同孵育30min。N36Fd及其突變體蛋白、C34終濃度為10μM。孵育好的樣品混合液與2×Native sample buffer等體積混勻,加樣于預(yù)制的18%Tris-glycine gel孔中。恒壓125V,室溫下電泳2h。用染色劑考馬斯亮藍(lán)R250染色2h,脫色后用FluorChem8800凝膠成像儀拍照記錄。 5)圓二色光譜(CD)檢測(cè)ADS-J1對(duì)N36Fd及其突變體和C34相互結(jié)合形成的復(fù)合復(fù)合螺旋構(gòu)象的干擾作用。將N36Fd及其突變體分別加入PBS或者不同濃度的ADS-J1,孵育30min后,加入C34在共同孵育30min。N36Fd及其突變體蛋白、C34終濃度為10μM,ADS-J1終濃度為50μM。參數(shù)設(shè)置：檢測(cè)溫度：4℃；樣品池：0.1cm；波長(zhǎng)掃描范圍：180-300nm；波寬：5.0nm；狹縫0.1nm；時(shí)間常數(shù)4.0s；掃描速度：50]mm/min。將孵育好的樣品加入CD特定比色皿中,進(jìn)行CD波長(zhǎng)掃描,保存CD信號(hào)[θ]222nm值,并計(jì)算出α-螺旋值。 6)等溫滴定量熱技術(shù)(ITC)檢測(cè)ADS-J1對(duì)N36Fd和它的突變體的結(jié)合能力。將50μM的N36Fd或者它的突變體蛋白加入樣品池中,將750μM ADS-J1逐滴滴入至樣品池中。設(shè)置滴定間隔為200sec,滴定體積為10μL/滴,攪拌速度是350rpm。用軟件Launch Nano Analyze計(jì)算熱力學(xué)常數(shù)。 7) ADS-J1抑制HIV-1T-20耐藥株活性檢測(cè)。利用MT-2細(xì)胞擴(kuò)增出HIV-1T-20耐藥株后,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出p24蛋白的含量,按照ReedMuench法計(jì)算病毒TCID50。將100倍50%組織感染濃度TCID50的HIV-1T-20耐藥株,與不同濃度的ADS-J1,陽(yáng)性對(duì)照T20分別孵育30min,加入密度為1×105/ml的MT-2細(xì)胞,感染4天后,觀察細(xì)胞病變效應(yīng)CPE,取培養(yǎng)上清,并加入等量5%Triton X-100裂解病毒,ELISA方法測(cè)定上清中p24抗原含量,采用Calcusyn軟件計(jì)算IC50。 8) ADS-J1抑制HIV-1臨床分離株活性檢測(cè)。利用CEMx1745.25M7細(xì)胞擴(kuò)增出HIV-1臨床分離株后,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出p24蛋白的含量,按照ReedMuench法計(jì)算病毒TCID50。將100倍50%組織感染濃度TCID50的HIV-1臨床分離株與不同濃度的ADS-J1,陽(yáng)性對(duì)照T20分別孵育30min,加入密度為5×105/mL的CEMx1745.25M7細(xì)胞后,培養(yǎng)7天后取培養(yǎng)上清,并加入等量5%Triton X-100裂解病毒,ELISA方法測(cè)定上清中p24抗原含量,采用Calcusyn軟件計(jì)算IC50。 9) ADS-J1與不同機(jī)制的抗病毒藥物聯(lián)合應(yīng)用時(shí)抑制HIV-1IIIB的活性檢測(cè)。利用MT-2細(xì)胞擴(kuò)增出HIV-1IIIB后,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出p24蛋白的含量,按照ReedMuench法計(jì)算病毒TCID50。將不同濃度的ADS-J1和不同機(jī)制的抗病毒藥物混合液倍比稀釋,加入100倍50%組織感染濃度TCID50的HIV-1IIIB,孵育30min后加入密度為1×105/ml的MT-2細(xì)胞,感染4天后,觀察細(xì)胞病變效應(yīng)CPE,取培養(yǎng)上清,并加入等量5%Triton X-100裂解病毒,ELISA方法測(cè)定上清中p24抗原含量,采用Calcusyn軟件計(jì)算IC50。 10) ADS-J1與不同機(jī)制的抗病毒藥物聯(lián)合應(yīng)用時(shí)抑制HIV-1Bal的活性檢測(cè)。利用CEMx1745.25M7細(xì)胞擴(kuò)增出HIV-1Bal后,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出p24蛋白的含量,按照ReedMuench法計(jì)算病毒TCID50。將不同濃度的ADS-J1和不同機(jī)制的抗病毒藥物混合液倍比稀釋,加入100倍50%組織感染濃度TCID50的HIV-1Bal,孵育30min后加入密度為5×105/mL的CEMx1745.25M7細(xì)胞,培養(yǎng)7天后取培養(yǎng)上清,并加入等量5%Triton X-100裂解病毒,ELISA方法測(cè)定上清中p24抗原含量,采用Calcusyn軟件計(jì)算IC50。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1)Gp41口袋區(qū)帶有突變點(diǎn)的假病毒侵染性降低,且這些假病毒對(duì)ADS-J1和C34具有高的抗性,但對(duì)T-20卻相對(duì)敏感的。單次感染實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與野生型相比,帶有突變點(diǎn)病毒的感染性有顯著性差異,并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=604, P0.001), Q64A和Q64L的突變使HIV-1假病毒的侵染能力大概只有野生型病毒的34%和27%,A67G和A67S的突變使使HIV-1假病毒的侵染能力大概只有野生型病毒的57%和31%。所有的突變株假病毒對(duì)ADS-J1和含有口袋區(qū)的C肽C34產(chǎn)生高的抗性,其中對(duì)ADS-J1了30-91倍的抗性,對(duì)C34產(chǎn)生了103-244倍的抗性,而對(duì)不含口袋區(qū)的C肽T-20相對(duì)敏感的,以上結(jié)果表明ADS-J1可能主要作用于HIV-1gp41NHR的口袋區(qū)。 2)T-2635耐藥株也對(duì)ADS-J1產(chǎn)生了抗性。我們選擇了7株帶有單突變點(diǎn),4株帶有雙突變點(diǎn),和2株帶有多突變點(diǎn)的T2635耐藥株對(duì)T2635, ADS-J1, AZT(逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑做為對(duì)照)的進(jìn)行敏感性檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,單突變株對(duì)T2635產(chǎn)生一定抗性,為4到7倍的抗性,雙突變株對(duì)它產(chǎn)生了較高的抗性,為13到23倍,而多突變株對(duì)它產(chǎn)生了非常高的抗性,達(dá)到36到263倍,這些與以前報(bào)道一致。與T2635相似的是,隨著突變點(diǎn)的增多,對(duì)ADS-J1產(chǎn)生的抗性也相應(yīng)增加。相關(guān)性分析表明,這些病毒株對(duì)T2635和/SDS-Jl抗性具有相關(guān)性(r=0.946,P0.001)。這些結(jié)果說(shuō)明,ADS-J1和T2635可能有相似的作用機(jī)制,都是作用于gp41區(qū)域。 3)N36Fd和它的突變體的構(gòu)建。通過(guò)兩次PCR反應(yīng),構(gòu)建了編碼N36Fd和它的突變體基因片段。然后將其插入帶有BamHI和Xhol酶切位點(diǎn)的pGEX-6P-1表達(dá)載體中,經(jīng)測(cè)序鑒定后篩選出了具有正確序列的克隆載體N36Fd-pGEX6p-1, N36(Q64A)Fd-pGEX6p-1, N36(Q64L)Fd-pGEX6p-1N36(A67G)Fd-pGEX6p-1, N36(A67S)Fd-pGEX6p-1,和N36(Q66R)Fd-pGEX6p-1。利用原核表達(dá)蛋白的方法,表達(dá)出了N36Fd及其突變體蛋白,純化后采用聚丙烯凝膠電泳(SDS-PAGE)的方法進(jìn)行了鑒定。 4)與抑制N36Fd和C34形成6-HB的能力相比,ADS-J1抑制N36Fd突變體和C34形成6-HB的作用降低。N-PAGE實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在ADS-J1存在下,C34能夠和N36Fd以及它的突變體N36(Q64A)Fd, N36(Q64L)Fd, N36(A67G)Fd, N36(A67S)Fd和N36(Q66R)Fd形成6-HB結(jié)構(gòu),表明這些突變點(diǎn)沒(méi)有顯著影響6-HB的形成。但是,隨著ADS-J1濃度增加,6-HB條帶越來(lái)越弱,同時(shí)C34條帶越來(lái)越強(qiáng)。對(duì)于N36Fd來(lái)說(shuō),當(dāng)ADS-J1達(dá)到100μM時(shí),能夠完全阻止N36Fd和C34形成6-HB。相比而言,對(duì)于突變體N36(Q64A)Fd, N36(Q64L)Fd, N36(A67S)Fd和N36(Q66R)Fd,當(dāng)ADS-J1達(dá)到200μM時(shí),才能夠完全阻止N36Fd和C34形成6-HB。另外,對(duì)于突變體N36(A67G)Fd,當(dāng)ADS-J1達(dá)到400μM時(shí),才能夠完全阻止N36Fd和C34形成6-HB,這些結(jié)果表明,ADS-J1抑制突變體N36Fd和C34形成6-HB的能力減弱。 5)與干擾N36Fd和C34形成的二級(jí)構(gòu)象相比,ADS-J1干擾N36Fd突變體和C34形成二級(jí)構(gòu)象的作用降低。CD結(jié)果顯示,Q64,A67,Q66三個(gè)位點(diǎn)突變后,能夠影響N36Fd和C34形成的6-HB的構(gòu)象和穩(wěn)定性,野生型N36Fd和C34可以形成92.8%的α-螺旋含量,突變后的N36Fd和C34形成的α-螺旋含量降低至43.9%到59.1%。在加入ADS-J1后,野生型N36Fd和C34形成的α-螺旋含量從92.8%降低至56.2%。相比而言,ADS-J1的加入對(duì)于突變后的N36Fd和C34形成的α-螺旋含量沒(méi)有顯著影響,這說(shuō)明突變后的N36Fd與ADS-J1結(jié)合力降低。 6)與N36Fd和ADS-J1的結(jié)合能力相比,N36Fd突變體和ADS-J1的結(jié)合能力減弱。ITC結(jié)果顯示,野生型N36Fd與ADS-J1解離常數(shù)為1.91×10-7M,5個(gè)突變株與ADS-J1結(jié)合力降低2-10倍(解離常數(shù)為5.21×10-7-1.76×10-6M),滴定實(shí)驗(yàn)表明,ADS-J1與N36Fd或者它的突變體的化學(xué)比為1.5-2.7：1,而不是1：1,這說(shuō)明大約兩分子的ADS-J1可以與一分子的N36Fd或者它的突變體結(jié)合。 7) ADS-J1有效對(duì)抗T-20耐藥株。病毒抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,ADS-J1能夠有效抑制T-20耐藥株和T-20敏感株的感染,其ICso范圍為0.85到1.98μM。 8) ADS-J1有效對(duì)抗HIV-1臨床分離株。病毒抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,ADS-J1能夠有效的抑制A亞型-F亞型及O亞型的臨床分離株,其IC50范圍為0.64到2.26μM。 9) ADS-J1與不同機(jī)制的臨床使用抗HIV-1藥物聯(lián)合應(yīng)用抑制HIV-1IIIB(X4毒株)具有協(xié)同作用。將ADS-J1與不同機(jī)制的抗病毒藥物聯(lián)合應(yīng)用抑制HIV-1IIIB的協(xié)同效果進(jìn)行分析。利用Calcusyn軟件計(jì)算協(xié)同指數(shù)(CI)的CI50。當(dāng)CI500.1代表很強(qiáng)協(xié)同效應(yīng),CI50=0.1-0.3說(shuō)明強(qiáng)協(xié)同效應(yīng),CI50=0.3-0.7說(shuō)明具有協(xié)同效應(yīng),CI50=0.7-0.85明具有弱協(xié)同效應(yīng),而當(dāng)CI50=0.85-0.90說(shuō)明具有輕微協(xié)同效應(yīng)。ADS-J1與兩種融合抑制劑(T-20和SFT)能引起很強(qiáng)的協(xié)同作用或協(xié)同效應(yīng),其對(duì)抗HIV-1IIIB的協(xié)同作用指數(shù)CI50分別為0.085和0.342；與三種逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(AZT、D4T和TMC120)能引起微弱協(xié)同作用或協(xié)同效應(yīng),其對(duì)抗HIV-1IIIB的協(xié)同作用指數(shù)CI50分別為0.926、0.489和0.322；與三種蛋白酶抑制劑(Kaletra、Invirase和Agenerase)能引起協(xié)同效應(yīng)或強(qiáng)的協(xié)同作用,其對(duì)抗HIV-1IIIB的協(xié)同作用指數(shù)CI50分別為0.548、0.210和0.166；與整合酶抑制劑Raltegravir能引起協(xié)同效應(yīng),其對(duì)抗HIV-1IIIB的協(xié)同作用指數(shù)CIs0為0.462。 10) ADS-J1與不同機(jī)制的臨床使用抗HIV-1藥物聯(lián)合應(yīng)用抑制HIV-1Bal(R5毒株)具有協(xié)同作用。將ADS-J1與不同機(jī)制的抗病毒藥物聯(lián)合應(yīng)用抑制HIV-1Bal的協(xié)同效果進(jìn)行分析。ADS-J1與兩種融合抑制劑(T-20和SFT)能引起協(xié)同效應(yīng)或很強(qiáng)的協(xié)同作用,其對(duì)抗HIV-1Bal的協(xié)同作用指數(shù)CI50分別為0.673和0.128；與三種逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(AZT、D4T和TMC120)能引起微弱協(xié)同作用或協(xié)同效應(yīng),其對(duì)抗HIV-1Bal的協(xié)同作用指數(shù)CI50分別為0.896、0.312和0.792；與三種蛋白酶抑制劑(Kaletra、Invirase和Agenerase)能引起強(qiáng)協(xié)同作用或弱協(xié)同作用,對(duì)抗HIV-1Bal的協(xié)同作用指數(shù)CI50分別為0.107、0.738和0.113；與整合酶抑制劑Raltegravir能引起協(xié)同效應(yīng),其對(duì)抗HIV-1Bal的協(xié)同作用指數(shù)CI50為0.491。 結(jié)論： 1)HIV-1假病毒中g(shù)p41的NHR上口袋區(qū)的Q64和A67兩個(gè)位點(diǎn)的突變導(dǎo)致這些假病毒對(duì)ADS-J1產(chǎn)生抗性。 2)T2635耐藥株中g(shù)p41區(qū)域內(nèi)的單位點(diǎn)突變,雙位點(diǎn)突變,多位點(diǎn)突變也會(huì)導(dǎo)致這些病毒對(duì)ADS-J1產(chǎn)生抗性。 3)天然聚丙烯酰胺凝膠電泳(N-PAGE)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析確定,N36Fd在口袋區(qū)突變會(huì)造成ADS-J1抑制C34和N36Fd三聚體形成的6-HB的活性降低。 4)圓二色光譜(CD)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析確定,N36Fd在口袋區(qū)突變會(huì)造成ADS-J1干擾C34和N36Fd三聚體作用形成復(fù)合螺旋構(gòu)象的能力降低。 5)等溫滴定量熱技術(shù)(ITC)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析確定,N36Fd在口袋區(qū)突變會(huì)造成ADS-J1與N36Fd三聚體結(jié)合能力減弱。 6) ADS-J1能夠有效抑制T-20耐藥株和HIV-1臨床分離株。 7) ADS-J1與目前臨床應(yīng)用的HIV-1融合抑制劑,逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑,蛋白酶抑制劑,整合酶抑制劑合用都能產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)抑制X4型(IIIB) R5型(Bal) HIV-1毒株。 8)作用于gp41口袋區(qū)的小分子HIV融合抑制劑是一種新型抗HIV藥物,可以利用ADS-J1作為先導(dǎo)化合物來(lái)開(kāi)發(fā)用于治療那些對(duì)當(dāng)前藥物已產(chǎn)生耐受作用的艾滋病病人。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R512.91

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前9條

1 李珉珉;張瑞濤;胡義平;李建軍;姜世勃;李曉娟;劉叔文;;HIV進(jìn)入抑制多肽VIR576可抑制抗原特異性CD4~+T細(xì)胞的體外活化:一種潛在的雙功能殺微生物劑(英文)[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2014年05期

2 GUO DongXing;SHI XuanLing;SONG DingKa;ZHANG LinQi;;Persistence of VRC01-resistant HIV-1 during antiretroviral therapy[J];Science China(Life Sciences);2014年01期

3 盛耀;許文濤;羅云波;;轉(zhuǎn)基因生物產(chǎn)業(yè)化情況[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào);2013年12期

4 李勛;牛德云;康延申;郝彥玲;張其程;何彥平;孫紅巖;邵一鳴;齊智;;HIV-1膜蛋白gp140三聚體的真核表達(dá)、純化、鑒定[J];中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué);2013年10期

5 田仁禮;殷小濤;王偉;高江平;于繼云;;腫瘤基因疫苗的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2013年29期

6 楊勇;周東明;;腺病毒載體疫苗的臨床研究進(jìn)展[J];生命的化學(xué);2014年01期

7 王妮丹;羅振武;郝彥玲;孫紅巖;何彥平;邵一鳴;;HIV-1 CRF07_BC gp41重組抗原在不同體系表達(dá)效率的比較[J];中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué);2014年04期

8 張瑞濤;李珉珉;李潤(rùn)明;張嘉杰;李曉娟;;HIV進(jìn)入抑制多肽VIR576與TCR的相互作用研究[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2013年12期

9 Vladimir Temchura;Matthias Tenbusch;;The two faces of vaccine-induced immune response:protection or increased risk of HIV infection?![J];Virologica Sinica;2014年01期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 凌彥博;新型HIV-1融合抑制劑的研究與基于多肽六股螺旋的人工模擬酶研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2013年

2 孟佳子;人源HIV-1廣譜中和Fab抗體的鑒定[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

3 劉存霞;雞痘病毒282E4株基因組和蛋白質(zhì)組解析、載體構(gòu)建與HIV重組疫苗研究[D];吉林大學(xué);2013年

4 郭東星;中國(guó)HIV-1流行株對(duì)廣譜中和抗體VRC01敏感性的分子機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

5 馬靜;HIV對(duì)逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑2’，3’-雙脫氫-3’-脫氧-4’-乙炔基胸苷（114）耐藥機(jī)制的研究[D];中南大學(xué);2013年

6 劉昕;HIV-1整合酶抑制劑篩選及其活性檢測(cè)方法研究[D];北京工業(yè)大學(xué);2013年

7 王玉芹;以gp120為靶點(diǎn)的HIV進(jìn)入抑制劑的合成及篩選研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

8 文波;基于三種病毒載體的新型HCV疫苗在恒河猴中的免疫學(xué)應(yīng)答分析[D];吉林大學(xué);2013年

9 張麗雙;HIV-1 MPER表位分支肽免疫原免疫原性及其衍生多肽促感染活性的研究[D];吉林大學(xué);2013年

10 劉巖厚;中國(guó)漢族人群及維吾爾族人群HIV-1感染與高分辨率HLA class I基因頻率關(guān)聯(lián)研究[D];南開(kāi)大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前8條

1 張崇騫;基于結(jié)構(gòu)的趨化因子受體CXCR4的藥物設(shè)計(jì)[D];蘇州大學(xué);2013年

2 倪超;HIV-1核心蛋白p24單克隆抗體的制備及其在免疫檢測(cè)中的應(yīng)用[D];華南理工大學(xué);2013年

3 劉秀俠;HIV-1表面抗原的改造和廣譜中和性抗體2F5、4E10的原核表達(dá)[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2013年

4 張?chǎng)?HIV-1兩對(duì)重要蛋白質(zhì)相互作用的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

5 王海波;吡咯并嘧啶-5，，7-二酮及芳基取代苯甲酸類(lèi)化合物的合成及其應(yīng)用研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

6 董佳琦;檢測(cè)成人呼吸道感染患者血清腺病毒IgM抗體與其臨床特征分析[D];大連醫(yī)科大學(xué);2013年

7 李甜;北京市MSM人群HIV-1流行亞型包膜蛋白基因全長(zhǎng)擴(kuò)增方法研究[D];首都醫(yī)科大學(xué);2013年

8 王昆;以HIV-1 gp41為靶點(diǎn)的融合抑制劑活性評(píng)價(jià)和篩選方法研究[D];天津大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2404091