【摘要】：結(jié)核分枝桿菌(M. tuberculosis)是一種細長略帶彎曲的桿菌,生長緩慢,1882年德國細菌學家郭霍(Koch)證實結(jié)核分枝桿菌是結(jié)核病的病原菌,該菌能侵犯全身各器官,以肺為最常見。據(jù)WHO估計,全球每年約有800～1000萬新發(fā)結(jié)核病例,至少有200-300萬人死于結(jié)核病,由于艾滋病、吸毒、酗酒、貧困、免疫抑制劑的使用、人口流動、結(jié)核分枝桿菌耐藥株出現(xiàn)等原因,20世紀末21世紀初,結(jié)核的發(fā)病率又有上升趨勢,并隨著有限的抗結(jié)核藥物使用年數(shù)的增長,結(jié)核菌的耐藥情況日漸嚴重,耐多藥結(jié)核病(MDR-TB)和廣泛耐藥結(jié)核病(XDR-TB)的出現(xiàn)更為結(jié)核病的控制帶來新的挑戰(zhàn)。我國的結(jié)核病疫情始終較為嚴重,是世界上22個結(jié)核病高負擔國家之一,也是27個耐多藥/廣泛耐藥結(jié)核病(MDR/XDR-TB)高負擔國家之一。 結(jié)核發(fā)病是多種因素共同作用的結(jié)果,目前全球雖有近1/3的人群感染結(jié)核分枝桿菌,但僅1/10人口發(fā)病。以往研究認為結(jié)核的發(fā)病原因主要在于細菌因素、環(huán)境因素和社會因素,但越來越多研究表明宿主也是重要因素,目前認為結(jié)核的發(fā)病是宿主、病原體、環(huán)境綜合作用的結(jié)果。已有較多研究表明,結(jié)核易感性的遺傳因素在疾病中起重要作用,導致不同個體對結(jié)核易感性的差異,Khor等人發(fā)現(xiàn)細胞因子可誘導的SRC同源2結(jié)構(gòu)域蛋白(Cytokine-inducible SRC horaology2(SH2) domain protein, CISH)基因的單核苷酸多態(tài)性與結(jié)核等多種感染性疾病的易感性有關,在不同疾病及不同人群中基因的多態(tài)性位點及多態(tài)性頻率都不同。CISH是細胞因子信號抑制因子(SOCS)家族蛋白的一員,調(diào)節(jié)多種細胞因子信號傳導途徑,通過與STAT5競爭細胞因子受體上的結(jié)合位點主要影響IL-2的信號轉(zhuǎn)導。鑒于IL-2在結(jié)核免疫中的關鍵作用,推測CISH有可能在結(jié)核病發(fā)病中起了重要作用 本研究收集上海市肺科醫(yī)院1432株結(jié)核分枝桿菌進行體外藥敏測定,對上海地區(qū)的結(jié)核病耐藥情況進行了分析。并采用病例-對照研究,收集511例初治肺結(jié)核患者及500例健康對照者的資料,分析人群的營養(yǎng)狀況指標和社會環(huán)境影響因素與肺結(jié)核發(fā)病之間的關系。通過對898例結(jié)核病患者血液樣本采用SNaPshot技術進行CISH基因單核苷酸多態(tài)性(SNPs)分型,與825例健康者對照,了解上海地區(qū)漢族人群CISH基因多態(tài)性與結(jié)核易感性的關系,研究CISH基因多態(tài)性在結(jié)核發(fā)病中的作用。 第一部分上海地區(qū)結(jié)核分枝桿菌的耐藥現(xiàn)狀研究 我國作為結(jié)核病高負擔同家之一,耐多藥/廣泛耐藥結(jié)核病亦在不斷增多。我們對收集白上海市肺科醫(yī)院的結(jié)核分枝桿菌菌株進行了耐藥性分析,并比較初治與復治患者結(jié)核分枝菌對抗結(jié)核藥物的耐藥率。上海市肺科醫(yī)院為上海市結(jié)核病定點醫(yī)院,收治幾乎所有的上海市結(jié)核病患者。 2009年1月至2010年12月收集了上海市肺科醫(yī)院住院結(jié)核病患者中分離培養(yǎng)的結(jié)核分枝桿菌菌株1432株,每例患者保留1株菌種。1432個患者的中位年齡為47(12～94)歲,其中男性1001例,女性431例；初治者837例,復治者595例。結(jié)核分枝桿菌的分離培養(yǎng)及藥敏測定方法：①取患者痰液或其他體液、組織標本,經(jīng)前處理后放入BACTEC MGIT960全自動分枝桿菌培養(yǎng)儀培養(yǎng),②培養(yǎng)結(jié)果陽性后進行涂片、染色、鏡檢確定抗酸分枝桿菌并接種至含PNB培養(yǎng)基及TCH培養(yǎng)基的培養(yǎng)管行菌種鑒定,③BACTEC MGIT960全自動分枝桿菌培養(yǎng)儀對結(jié)核分枝桿菌進行鏈霉素、異煙肼、利福平、乙胺丁醇、阿米卡星、卷曲霉素、氧氟沙星的藥敏試驗。 藥敏結(jié)果顯示：①1432株結(jié)核分枝桿菌對抗結(jié)核藥物的耐藥率(對一個或一個以上抗結(jié)核藥物耐藥)為63.5%,對異煙肼的耐藥率最高,為46.4%,對鏈霉素、利福平和氧氟沙星的耐藥率均超過30%,對阿米卡星的耐藥率最低,為16.1%。②復治患者分離的結(jié)核分枝桿菌對抗結(jié)核藥物的耐藥率明顯高于初治患者分離的菌株,初治患者菌株對7種抗菌藥的耐藥率均低于30%,復治者對阿米卡星和卷曲霉素的耐藥率分別為24.2%和29.2%,對其他抗結(jié)核藥的耐藥率均近50%或以上。③所有菌株對一線抗結(jié)核藥物的耐藥率為53.1%,初治者耐藥率為33.8%,復治者為80.2%；④所有菌株對二線抗結(jié)核藥物的耐藥率為45.8%,初治者耐藥率為33.1%,復治者為63.7%,在二線結(jié)核藥物中氧氟沙星的耐藥率最高,為36.2%,阿米卡星的耐藥率最低,為16.1%。⑤所有菌株中MDR菌株占32.2%,XDR菌株占11.3%；在初治患者中MDR菌株占10.5%,復治患者占62.7%,兩者有顯著差異(P0.01)；在初治和復治患者中XDR株的檢出率分別為3.8%和21.8%,兩者有顯著差異(P0.01)。⑥在所有MDR菌株中,XDR菌株占35.1%,初治者MDR菌株中XDR株占36.4%,復治者MDR菌株中XDR株占34.9%,初復治患者XDR/MDR比例無顯著差異(P=0.79)。⑦在所有MDR菌株中,pre-XDR菌株占42.3%,這些菌株90.3%對氧氟沙星耐藥。 結(jié)論：上海地區(qū)結(jié)核分枝桿菌對抗結(jié)核藥物的耐藥性較高,除對阿米卡星的耐藥率在20%以下外,對多數(shù)抗結(jié)核藥的耐藥率超過30%。53.1%的結(jié)核分枝桿菌對一線抗結(jié)核藥物耐藥,其中對異煙肼的耐藥率最高。45.8%的結(jié)核分枝桿菌對二線抗結(jié)核藥物耐藥,其中對氧氟沙星的耐藥率最高。所有菌株中,MDR菌株占32.2%,XDR菌株占11.3%。 第二部分初治肺結(jié)核患者易感因素分析 影響結(jié)核病發(fā)病的因素很多,包括貧窮、精神壓力、營養(yǎng)不良、病毒感染,以及自身免疫力的變化等,各因素之間交互作用,該部分研究分析人群的營養(yǎng)狀況指標和社會環(huán)境影響因素與肺結(jié)核發(fā)病之間的關系,為采取針對性的措施控制肺結(jié)核疫情提供依據(jù)。 我們收集2009.1-2011.1上海市肺科醫(yī)院的511例確診初治肺結(jié)核住院患者的病史資料,其中男性329例,女性182例,中位年齡34(12～79)歲,并收集同期入選的500例健康體檢者資料作對照。收集研究對象的信息包括：①社會環(huán)境影響因素資料：年齡、性別、婚姻、職業(yè)、教育背景、結(jié)核接觸史、粉塵接觸史、吸煙史、飲酒史等,②營養(yǎng)狀況指標：身高、體重、血總蛋白、白蛋白、甘油三酯、膽固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白等。對數(shù)據(jù)進行X2檢驗、單因素分析、多因素Logistic回歸分析,確定初治肺結(jié)核患者的易感因素。 結(jié)果顯示,社會環(huán)境因素中,婚姻狀況(P=0.001)、職業(yè)(P0.001)、文化程度(P0.001)、吸煙史(P0.001)在病例組與對照組之間差異有統(tǒng)計學意義。營養(yǎng)狀況指標中,體重指數(shù)(BMI)(P0.001)、血清總蛋白(P0.001)、白蛋白(P0.001)、總膽固醇(P0.001)、甘油三酯(P0.001)、高密度脂蛋白(P0.001)在病例組與對照組之間差異有統(tǒng)計學意義。另外,多因素Logistic回歸分析顯示：BMI(P0.001)、吸煙史(P0.001)、甘油三酯(P0.001)、高密度脂蛋白(P0.001)、低密度脂蛋白(P=0.003)與肺結(jié)核發(fā)病有顯著性相關性。 結(jié)論：本研究結(jié)果顯示,文化程度低、離異或喪偶、吸煙是肺結(jié)核發(fā)病的危險因素。BMI過低、營養(yǎng)不良是結(jié)核發(fā)病的危險因素,與國外報道相仿。此外,本研究發(fā)現(xiàn),高含量的低密度脂蛋白是肺結(jié)核發(fā)病的危險因素,但血清高含量的甘油三酯和高密度脂蛋白似乎與肺結(jié)核發(fā)病負相關,尚需進一步研究證實。 第三部分CISH基因的單核苷酸多態(tài)性與結(jié)核易感性的關系 已有較多研究表明,多種宿主基因多態(tài)性與結(jié)核易感性相關。2010年,Khor等發(fā)現(xiàn)CISH基因多態(tài)性與結(jié)核等多種感染性疾病易感性相關,且不同人群間多態(tài)性不同,與結(jié)核易感性的關系也不同,近2年尚未見后續(xù)有關該基因與結(jié)核易感性相關的研究報道。本研究目的為了解中國漢族人群CISH基因SNP與結(jié)核易感性的關系。 我們選取上海市肺科醫(yī)院自2009.1-2011.1收治的898例確診結(jié)核病的患者,采用多重SNaPshot SNP分型技術檢測其血液標本C1SH基因5個SNP位點(rs148685070(-639), rs414171(-292), rs6768300(-163), rs2239751(+1320), rs622502(+3415))的多態(tài)性,并與825例健康者對照。采用在線的SHEsis軟件結(jié)合SPSS15.0統(tǒng)計軟件對病例組和對照組SNPs檢測結(jié)果進行統(tǒng)計分析,包括對照組基因型Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗；等位基因頻率及基因型頻率在兩組間的比較；CISH基因SNPs與結(jié)核相關性的單因素及多因素logistic回歸分析；不同位點間連鎖不平衡分析；并在不同SNPs間構(gòu)建單倍型,估算其頻率,分析單倍型與結(jié)核易感性的相關性。 結(jié)果顯示：①所測CISH基因5個SNPs位點中rs148685070只有一種等位基因C及一種基因型CC,無基因多態(tài)性,余4個位點均有基因多態(tài)性。②位點rs414171在結(jié)核病組中等位基因A的頻率(61.6%)高于對照組(57.6%),差異有統(tǒng)計學意義(P=0.016),基因型A/A的頻率(38.8%)高于對照組(31.9%),差異有統(tǒng)計學意義(P=0.011)；位點rs2239751在結(jié)核病組中等位基因A的頻率(67.9%)高于對照組(64.5%),差異有統(tǒng)計學意義(P=0.036),但基因型頻率在兩組中無顯著差異。③SNPs與結(jié)核易感性單因素分析結(jié)果顯示年齡、rs414171TA基因型、rs2239751CC基因型與結(jié)核易感性相關(P值分別為0.017,0.003,0.026,OR值分別為1.007,0.731,0.712)。④SNPs與結(jié)核易感性多因素logistic回歸分析結(jié)果顯示,年齡始終是結(jié)核發(fā)病的獨立危險因素,隨著年齡的增加,結(jié)核病發(fā)病的風險增加(P=0.017,OR=1.008)。在4個多態(tài)性位點中,rs2239751CC基因型及rs414171TA基因型是獨立危險因素(P值分別為0.011,0.002,OR值分別為0.671,0.710)。⑤連鎖不平衡分析結(jié)果顯示rs414171與rs2239751兩個位點間、rs6768300和rs622502兩個位點間存在連鎖不平衡。⑥單倍型分析顯示,共有3種單倍型頻率5%,在病例組和對照組中無顯著差異。 結(jié)論：本研究顯示CISH基因的SNPs與結(jié)核易感性相關,在4個多態(tài)性位點中rs2239751CC基因型及rs414171TA基因型是獨立危險因素。這是首次在中國大陸漢族人群中進行CISH基因單核苷酸多態(tài)性的檢測分型并分析其與結(jié)核病易感性的關系。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：復旦大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R52

【參考文獻】

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1 趙明才,鮑朗,吳悅涵,龍洋,曾獻武,張會東,謝益新;四川地區(qū)結(jié)核分枝桿菌喹諾酮耐藥基因突變研究[J];四川大學學報(醫(yī)學版);2004年03期

2 A.C.Crampin;S.Floyd;B.M.Ngwira;V.Mwinuka;J.N.Mwaungulu;K.Branson;P.E.M.Fine;J.R.Glynn;張曉進;何廣學;;在非洲農(nóng)村將接觸結(jié)核病作為發(fā)生結(jié)核病的一個危險因素的評價與評估[J];國際結(jié)核病與肺部疾病雜志(中文版);2008年04期

3 譚云洪;住院肺結(jié)核病人對氧氟沙星耐藥情況分析[J];實用預防醫(yī)學;2003年05期

4 ;SHEsis,a powerful software platform for analyses of linkage disequilibrium,haplotype construction,and genetic association at polymorphism loci[J];Cell Research;2005年02期

5 Khalid Sadki;Hoda Lamsyah;Blanca Rueda;ELmahfoud Akil;Abderrahim Sadak;Javier Martin;Rajae El Aouad;;Analysis of MIF,FCGR2A and FCGR3A gene polymorphisms with susceptibility to pulmonary tuberculosis in Moroccan population[J];遺傳學報;2010年04期

6 張靜,張金福,高薇,那希寬,胡范彬,馬嶼;住院肺結(jié)核病人對氧氟沙星耐藥的分析[J];中國防癆雜志;1999年01期

7 李斌;王兆芬;劉壽;杜文琪;;中國人群肺結(jié)核發(fā)病危險因素的meta分析[J];中國衛(wèi)生統(tǒng)計;2011年05期

8 ;肺結(jié)核診斷和治療指南[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2001年02期

9 全國結(jié)核病流行病學抽樣調(diào)查技術指導組;第四次全國結(jié)核病流行病學抽樣調(diào)查報告[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2002年01期

10 王國杰,Adrian Sleigh,周剛,Sukhan Jackson,劉禧禮;成年人肺結(jié)核病的非生物危險因素病例對照研究[J];中華流行病學雜志;2005年02期

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本文編號：2398659