【摘要】：乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是一個嚴(yán)重公共衛(wèi)生問題，對人類健康造成了極大的威脅。我國是原發(fā)性肝癌的高發(fā)國家，與歐洲國家引起肝癌的主要危險因素不同，我國原發(fā)性肝癌主要是由慢性HBV感染引起，HCC患者中約70%以上有HBV感染。同時，在HBV慢性感染者當(dāng)中，重型乙型肝炎、肝硬化、肝癌的發(fā)病率呈現(xiàn)顯著的性別差異，男女性別比約5-10:1。男性重型肝炎、肝硬化、肝癌患者的預(yù)后較差、死亡率較高，女性肝癌患者無論是自然生存率還是切除術(shù)后生存率均高于男性。造成肝癌性別差異的因素一直以來被認(rèn)為是揭示肝癌發(fā)病機制的關(guān)鍵。流行病學(xué)和實驗證據(jù)表明，除了經(jīng)典的乳腺癌和前列腺癌之外，肝癌也是性激素影響極其顯著的腫瘤之一。 大量的研究提示，雌激素與肝癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。雌激素是通過與特異性的受體(雌激素受體)相結(jié)合而發(fā)揮作用的，雌激素受體(estrogen receptor，ER)主要有和β兩種亞型。我們前期研究發(fā)現(xiàn)ER基因的29C-IVS1-401C單倍型不僅能夠增加HBV感染清除還能降低HBV相關(guān)的肝硬化、肝癌的易感性，，提示ER與HBV感染疾病的進程有關(guān)。2012年臺灣學(xué)者Wang等研究發(fā)現(xiàn)，ER可以通過與肝細胞核因子-4(hepatocyte nuclear factor-4，HNF-4)交互作用來抑制HBV基因的轉(zhuǎn)錄，進一步解釋了HBV相關(guān)HCC男性多于女性的原因。 1998年Villa等首次報道：ER第5外顯子缺失而產(chǎn)生的變異體(ER5)在HCC中也有表達，且ER5的表達與肝癌患者的預(yù)后相關(guān)。國內(nèi)關(guān)于這方面的研究較少，特別是ER5蛋白在HCC組織中的表達情況目前尚無報道。因此，本研究擬采用免疫組織化學(xué)、RT-PCR及Western blot的方法來檢測HBV相關(guān)肝病患者肝組織中ER及其變異體的mRNA和蛋白的表達及規(guī)律，以探討ER及變異體在HBV相關(guān)肝病發(fā)生發(fā)展中的作用，以望對HBV相關(guān)肝病的內(nèi)分泌治療及預(yù)后判斷提供依據(jù)。 本研究分為三部分：第一部分以HBV相關(guān)HCC為研究對象，采用免疫組化及Western blot的方法研究野生型ER和ERβ在HBV相關(guān)HCC組織中的表達及規(guī)律，并分析ER、ERβ的表達與HCC患者臨床病理特征的關(guān)系。第二部分以HBV相關(guān)HCC、癌旁及慢性乙型肝炎為研究對象，采用RT-PCR、TA克隆測序的方法研究ER及變異體在HBV相關(guān)HCC、癌旁及慢性乙型肝炎中的表達及規(guī)律，并確定變異體類型。第三部分在第二部分確定變異體類型的基礎(chǔ)上，制作變異體特異性抗體，并以HBV相關(guān)肝癌、癌旁及慢性乙型肝炎為研究對象，采用組織芯片免疫組化及Western blot的方法研究變異體ER5在HBV相關(guān)肝癌、癌旁及慢性乙型肝炎中的表達規(guī)律，并分析ER5的表達與HBV相關(guān)HCC患者臨床病理特征的關(guān)系。 結(jié)果： 1.ER在HBV相關(guān)肝癌肝組織中主要表達定位于細胞漿，陽性表達率為35.7%。在腫瘤直徑≤5cm和TNM分期中Ⅰ～Ⅱ期患者的ER表達明顯高于腫瘤直徑＞5cm和TNM分期Ⅲ～Ⅳ期的患者(P值分別為0.006和0.011)，其表達與患者性別、年齡、血清中AFP水平、腫瘤分化程度及腫瘤結(jié)節(jié)多少差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 2.ERβ在HBV相關(guān)肝癌肝組織中主要表達定位于細胞漿，其表達與患者性別、年齡、腫瘤大小、TNM分期、腫瘤分化程度、結(jié)節(jié)多少及血清AFP水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。 3.野生型ER mRNA在乙肝相關(guān)肝癌、癌旁及慢性乙型肝炎肝組織中的表達率分別為100%、88.2%和77.8%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 4.在乙肝相關(guān)肝癌、癌旁及慢性乙型肝炎肝組織中有ER第五外顯子缺失變異體ER5mRNA的表達，其表達率分別為76.5%、76.5%和38.9%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=7.169，P=0.025)。 5.組織芯片免疫組化提示ER5在肝癌、癌旁及正常肝組織中均定位于細胞漿，陽性表達率分別為67.2%、50%和25%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=7.308，P=0.026)。 6.Western blot檢測發(fā)現(xiàn)ER5蛋白在肝癌、癌旁及慢性乙型肝炎組織陽性表達率分別為88.2%、76.5%和61.1%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=3.460，P=0.177)。 結(jié)論： 1. ER和ERβ在慢性乙型肝炎、乙肝相關(guān)肝癌及癌旁組織中均有表達，且主要定位于細胞漿。 2. ER在HBV相關(guān)HCC中存在差異表達，在腫瘤直徑≤5cm和TNM分期中Ⅰ～Ⅱ期患者的ER表達明顯高于腫瘤直徑＞5cm和TNM分期Ⅲ～Ⅳ期的患者，提示ER表達隨著肝癌的進展逐漸減弱。 3.在慢性乙型肝炎、HBV相關(guān)肝癌及癌旁組織中均有ER5的表達，也定位于細胞漿，且ER5mRNA及蛋白在HCC中的表達明顯高于在慢性乙型肝炎或正常肝組織的表達，提示ER5可能與HBV相關(guān)肝癌的發(fā)生有關(guān)。
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【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R512.62

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 邢寶才,王家宏,王怡,郝純毅,黃信孚,王kH;雌激素受體在原發(fā)性肝癌中的表達與變異[J];北京大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2004年06期

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本文編號：2370169