【摘要】：5-(1H-吲哚-3-基甲基)-3-甲基-2-硫酮-4-咪唑烷酮(Necrostatin-1,Nec-1)是一種能夠特異的、有效抑制細(xì)胞程序性凋亡的小分子物質(zhì)。為了探討Nec-1對卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)誘導(dǎo)的小鼠(Mus musculus)巨噬細(xì)胞RAW264.7凋亡的調(diào)控作用,本研究采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽(3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT)比色法檢測細(xì)胞存活率,Annexin V和碘化丙啶(propidine iodide,PI)雙染法檢測細(xì)胞凋亡率,JC-1染色法檢測細(xì)胞線粒體膜電位水平,采用分光光度法檢測細(xì)胞內(nèi)Caspase-3的酶活性,q RT-PCR和Western blot法檢測凋亡相關(guān)基因的m RNA和蛋白表達水平。結(jié)果表明,Nec-1可提高被BCG感染巨噬細(xì)胞的存活率,降低其凋亡率,通過降低線粒體膜電位水平、上調(diào)抑凋亡基因Bcl-2的表達同時下調(diào)RIP1、RIP3和BAX基因的表達水平,從而有效降低了Caspase-3的蛋白表達量及酶活性。本研究表明Nec-1可通過提高線粒體膜電位水平、并下調(diào)促凋亡蛋白的表達量,從而抑制被BCG感染后巨噬細(xì)胞的凋亡,這將有助于進一步研究結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)與巨噬細(xì)胞間的相互作用,對于揭示結(jié)核病的致病機理具有重要意義。
[Abstract]:5- (1H-indole-3-methylmethyl) -3-methyl-2-thione-4-imidazolone (Necrostatin-1,Nec-1) is a small molecule that can specifically inhibit programmed cell apoptosis. To investigate the effect of Nec-1 on RAW264.7 apoptosis induced by Bacillus Calmette-Gu 茅 rin,BCG in mouse (Mus musculus) macrophages. In this study, the cell survival rate of, Annexin V and (propidine iodide, were determined by 3- (4- (4-) -dimethylthiazole-2) -2- diphenyltetrazolium bromide (3- (4t5)-dimethylthiahiazo (- z-y1) -3- di-phenytetrazoliumromide) colorimetric assay. The cell apoptosis rate was detected by PI, the mitochondrial membrane potential level was detected by JC-1 staining, and the enzyme activity of Caspase-3 was detected by spectrophotometry. The expression levels of m RNA and protein of apoptosis-related genes were detected by Q RT-PCR and Western blot methods. The results showed that Nec-1 could increase the survival rate and decrease the apoptosis rate of macrophages infected with BCG, and down-regulate the expression of RIP1,RIP3 and BAX genes by decreasing the level of mitochondrial membrane potential and up-regulating the expression of Bcl-2 gene. Thus, the protein expression and enzyme activity of Caspase-3 were reduced effectively. This study suggests that Nec-1 can inhibit the apoptosis of macrophages after BCG infection by increasing the level of mitochondrial membrane potential and down-regulating the expression of pro-apoptotic protein. This will be helpful to further study the interaction between (Mycobacterium tuberculosis) and macrophages of Mycobacterium tuberculosis, and it is of great significance to reveal the pathogenesis of tuberculosis.
【作者單位】： 西部特色生物資源保護與利用教育部重點實驗室;寧夏大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.31560322;No.31460301) 寧夏高等學(xué)�？茖W(xué)研究項目(No.NGY2015029)
【分類號】：R52

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本文編號：2337277