【摘要】：目的：以分枝桿菌常用的分子菌種鑒定靶標(biāo)設(shè)計引物及探針，建立7種常見致病非結(jié)核分枝桿菌（NTM）的RNA恒溫擴增實時快速檢測方法（SAT），評價其體系的靈敏度及特異度；同時采用該鑒定體系初步評估其檢測臨床分離株和痰標(biāo)本的應(yīng)用效果。 方法：分別以鳥、胞內(nèi)、偶發(fā)、蟾蜍、瘰疬分枝桿菌的16S rRNA特異序列，，堪薩斯、海分枝桿菌的23S rRNA特異序列為靶標(biāo)設(shè)計各自的RNA探針和帶有T7啟動子的逆轉(zhuǎn)錄擴增引物，42℃恒溫擴增實時檢測7種常見致病NTM。SAT對22種分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株、5種非分枝桿菌和259株分枝桿菌臨床分離株進行鑒別檢測，同時以PCR測序結(jié)果為參考對照，分析SAT與PCR測序法檢測臨床分離株中7種NTM的符合率。SAT和羅氏培養(yǎng)+PCR測序法同時對369份痰標(biāo)本進行檢測，兩種檢測方法結(jié)果不符的樣本，重復(fù)SAT檢測和羅氏培養(yǎng)，分析SAT與羅氏培養(yǎng)+PCR測序檢測痰標(biāo)本中7種NTM的符合率。 結(jié)果：SAT能夠?qū)ⅧB、胞內(nèi)、堪薩斯、偶發(fā)、蟾蜍、瘰疬分枝桿菌從22種分枝桿菌和5種非分枝桿菌中鑒定出來，特異度為100%；在鑒定海分枝桿菌時，瘰疬分枝桿菌有弱陽性，陽性樣本需再進行瘰疬分枝桿菌檢測以排除假陽性。SAT檢測其靈敏度分別30CFU/ml、20CFU/ml、30CFU/ml、60CFU/ml、20CFU/ml、240CFU/ml、110CFU/ml。以PCR測序法為參考方法，檢測臨床分離株中鳥、胞內(nèi)、堪薩斯、偶發(fā)、蟾蜍、瘰疬、海分枝桿菌的符合率分別為100%（259/259）、100%（259/259）、99.61%（258/259）、99.61%（258/259）、100%（259/259）、100%（259/259）、98.07%（254/259）。以羅氏培養(yǎng)+PCR測序為參考方法，檢測痰標(biāo)本中鳥分枝桿菌的符合率為100%（369/369），胞內(nèi)分枝桿菌的符合率為99.19%（366/369），堪薩斯分枝桿菌的符合率為99.73%（368/369），偶發(fā)、蟾蜍、瘰疬、海分枝桿菌的符合率均為100%（369/369）。 結(jié)論：SAT鑒定檢測鳥、胞內(nèi)、堪薩斯、偶發(fā)、蟾蜍、瘰疬、海分枝桿菌具有較高的靈敏度和特異度，可為7種常見致病NTM快速鑒定提供一種新方法。
[Abstract]:Objective: to design primers and probes to identify the common molecular species of Mycobacterium, and to establish a real-time and rapid method of RNA constant temperature amplification for the detection of 7 common pathogenic non-tuberculous mycobacteria (NTM) by using (SAT), to evaluate the sensitivity and specificity of the system. At the same time, this identification system was used to evaluate the application effect of clinical isolates and sputum specimens. Methods: the 16s rRNA specific sequences of bird, intracellular, incidental, toad, scrofula, Mycobacterium scrofulla and 23s rRNA specific sequences of Mycobacterium kansans and Mycobacterium kansans were used as targets to design their RNA probes and reverse transcription primers with T7 promoter, respectively. 22 standard strains of mycobacterium, 5 non-mycobacteria and 259 clinical isolates of mycobacteria were identified by real-time detection of 7 common pathogenic NTM.SAT strains by 42 鈩

本文編號：2337196