發(fā)布時間：2018-11-11 07:54

【摘要】：目的 1.以四種特異性多肽抗原HIV Gp41、Gp120、Gp36和p24蛋白為主要原料，調(diào)整各多肽抗原比例合適比例，以ELISA原理為基礎，制備成檢測HIV抗體試劑盒。 2.對自制試劑盒進行相關的性能驗證。 3.研究CD4C868T單核苷酸多態(tài)性在廣西HIV Ⅰ型感染人群中的分布狀況，并分析廣西人群CD4C868T單核苷酸多態(tài)性與HIV Ⅰ型易感性的相關性，為預防廣西HIV Ⅰ型感染以及治療提供理論基礎。 方法 采用改良過碘酸鈉氧化法制備酶標抗原，用包被緩沖液配制不同濃度的混合多肽抗原液，包被聚苯乙烯板孔，采用棋盤滴定法選擇合適的抗原包被濃度及酶標抗原工作濃度，對檢測系統(tǒng)進行固相抗原與抗體結(jié)合時間，酶結(jié)合物作用時間及顯色時間進行優(yōu)化，用優(yōu)化后的方案對試劑盒進行相關的性能驗證。選取HIV高發(fā)區(qū)廣西的101例HIV Ⅰ型患者（艾滋病組）和102例健康體檢者（對照組），采用聚合酶鏈反應（PCR）方法及DNA測序法，檢測CD4基因C868T位點（rs28919570C/T）多態(tài)性，用χ2檢驗比較基因型和等位基因型分布頻率在艾滋病組和對照組間的差異，logstic回歸分析計算比值比（Oddsratios，OR）和95%可信區(qū)間（Confidence Intervals，CI），并以性別和年齡進行校正，對rs28919570C/T基因多態(tài)性和HIV Ⅰ患者的易感性進行關聯(lián)分析。以上統(tǒng)計均采用SPSS16.0軟件進行分析�；痦椖浚簭V西科學研究與技術開發(fā)計劃項目（桂科攻1140003A 1） 結(jié)果 1.經(jīng)過棋盤滴定法選擇，混合抗原的包被濃度為5ug/ml，酶標抗原最佳工作濃度為1:160。 2.經(jīng)過對檢測系統(tǒng)進行優(yōu)化，，得出固相抗原與抗體結(jié)合作用時間為60min，酶結(jié)合物作用時間為45min，顯色時間為15min；試劑盒的敏感性為97.2%，特異性為98.6%；試劑盒的主要活性成分在25℃室溫放置一周及4℃條件下放置一個月或者三個月之后，質(zhì)量未發(fā)生明顯改變，試劑盒的穩(wěn)定性良好。 3.艾滋病組和對照組在性別和年齡組成上的差異無統(tǒng)計學意義（P0.05），具有可比性。艾滋病組和對照組rs28919570C/T位點基因型符合Hardy weinberg平衡，所檢測的樣本具有代表性和可比性。 4.本研究觀察到rs28919570C/T位點共有CC、CT、TT三種基因型，三個基因型在廣西人群HIV 1感染組和對照組中分布頻率的差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。與CC基因型相比，CT基因型和HIV 1感染風險無相關性（P＞0.05），TT基因型和HIV 1感染風險無相關性（P＞0.05），尚不能認為CD4rs28919570C/T位點的基因多態(tài)性與廣西人群HIV 1感染易感性有關。 5. rs28919570C/T位點三個基因頻率在對照組中的分布與北京漢人、日本東京人和美國德克薩斯州休斯敦印第安人群的研究結(jié)果較類似，與美國西南部非洲人、尼日利亞伊巴丹的約魯巴人的研究結(jié)果差異較大。 6.無論是在男性人群中還是在女性人群中，CD4rs28919570C/T位點的基因多態(tài)性與HIV 1感染風險無相關性（P＞0.05）。 結(jié)論 以人工合成多肽抗原混合包被聚苯乙烯板孔，檢測HIV感染的方法具有可行性，對檢測方案進行一系列優(yōu)化后，試劑盒具有較高的檢測敏感性和特異性。尚未發(fā)現(xiàn)CD4rs28919570C/T位點基因多態(tài)性與廣西人群HIV 1感染風險具有相關性。
[Abstract]:Purpose 1. Using four specific polypeptide antigens, such as HIV Gp41, Gp120, Gp36 and p24 as the main raw materials, the appropriate proportion of each polypeptide antigen was adjusted, based on the ELISA principle, and prepared to test the HIV antibody test. reagent box. 2. Related to self-made kit 鐨勬

本文編號：2324237