【摘要】：背景與目的 胞穿梭素4(Exportin4, XP04)是β核轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族中的一員,負(fù)責(zé)多種蛋白質(zhì)和因子在胞漿和胞核之間的運(yùn)輸。XP04做為一種新近確定的抑癌基因已被確定與原發(fā)性肝癌(primary liver cancer, PLC)的發(fā)病有關(guān),并有研究證實(shí)XP04的表達(dá)下降與原發(fā)性肝癌患者的預(yù)后不良相關(guān)。然而,XP04在慢性乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus, HBV)感染的相關(guān)疾病進(jìn)展中的表達(dá)情況尚不明確。因此,本研究的目的是探討慢性HBV感染患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中XP04的mRNA表達(dá)水平和DNA啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)的臨床特點(diǎn)。 方法 我們選取了慢性乙型病毒性肝炎(chronic hepatitis B, CHB)患者、肝硬化(liver cirrhosis, LC)患者、原發(fā)性肝癌患者及健康對(duì)照者來(lái)作為慢性乙型肝炎病毒感染的一個(gè)橫斷面,以代表慢性乙型肝炎病毒感染的疾病進(jìn)展過(guò)程。2011年8月至2012年7月期間于山東大學(xué)齊魯醫(yī)院肝病科收集CHB患者34例、LC患者38例及原發(fā)性肝癌患者44例。CHB患者及LC患者均符合美國(guó)肝臟疾病研究學(xué)會(huì)(American Association for the Study of Liver Diseases, AASLD)關(guān)于慢性乙型肝炎管理實(shí)踐指南(2009年更新版)中的診斷標(biāo)準(zhǔn),其中肝硬化患者根據(jù)Child-Pugh分級(jí)系統(tǒng),可分為A級(jí)9例,B級(jí)13例,C級(jí)16例。原發(fā)性肝癌患者符合AASLD關(guān)于肝癌管理實(shí)踐指南(2010年更新版)中的診斷標(biāo)準(zhǔn)。17例健康體檢者作為正常對(duì)照組。 收集以上病例及健康對(duì)照組的臨床資料：一般資料包括年齡、性別,實(shí)驗(yàn)室檢查包括肝功能檢測(cè)、凝血功能檢測(cè)、乙肝五項(xiàng)定量／定性檢測(cè)、乙肝病毒DNA定量檢測(cè)、甲胎蛋白(α-feto protein, AFP)定量檢測(cè),影像學(xué)檢查包括B型超聲檢查(B-ultrasound,B超)、CT(computed tomography)MRI(Magnetic Resonance Imaging)等。 手工法提取患者及正常對(duì)照者外周血單個(gè)核細(xì)胞中的總RNA及DNA。反轉(zhuǎn)錄RNA為cDNA后通過(guò)實(shí)時(shí)定量熒光PCR測(cè)定PBMCs中XPO4mRNA的水平,以反映XP04的表達(dá)情況。DNA通過(guò)重亞硫酸鹽處理后進(jìn)行甲基化修飾,應(yīng)用M3thPrimer軟件設(shè)計(jì)甲基化特異性引物,后進(jìn)行甲基化特異性PCR(methylat ion specific polymerase chainreaction, MSP),以確定患者XP04啟動(dòng)了區(qū)域甲基化的情況。 結(jié)果 1.XP04的mRNA水平隨HBV感染的進(jìn)展而降低。XPO4mRNA的表達(dá)水平在四組中有明顯差異(原發(fā)性肝癌患者vs.肝硬化患者,P=0.003；原發(fā)性肝癌vs.慢性乙型肝炎患者,P=0.001；原發(fā)性肝癌患者vs.健康對(duì)照,P=0.000；肝硬化患者vs.健康對(duì)照,P=0.004；慢性乙型肝炎患者vs.健康對(duì)照,P=0.011；肝硬化患者vs.慢性乙型肝炎患者,P=0.943),且與年齡呈明顯負(fù)相關(guān)(R=-0.377,P＜0.0001)。 2.XP04啟動(dòng)子區(qū)的甲基化率隨著HBV感染的進(jìn)展而升高,并與mRNA表達(dá)水平的下降有關(guān)。XP04啟動(dòng)子的甲基化率在肝癌患者與CHB患者、正常對(duì)照之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(原發(fā)性肝癌患者63.6%vs.肝硬化患者47.4%,P=0.182；原發(fā)性肝癌患者63.6%vs.慢性乙型肝炎患者26.5%,P=0.01；原發(fā)性肝癌患者63.6%vs.健康對(duì)照17.6%。P=0.02),在肝硬化患者與正常對(duì)照之間也有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(肝硬化患者,17.4%vs.健康對(duì)照17.6%,P=0.042；肝硬化患者47.4%vs.慢性乙型肝炎患者26.5%,P=0.089；慢性乙型肝炎患者26.5%vs.健康對(duì)照17.6%,P=0.728)。相關(guān)性分析表明,在慢性HBV感染的疾病進(jìn)展過(guò)程中,DNA甲基化在抑制中XP04的轉(zhuǎn)錄中發(fā)揮著作用(P=0.000)。 3.XP04啟動(dòng)子區(qū)發(fā)生甲基化的肝癌患者與未發(fā)生甲基化的肝癌患者相比,前者血清AFP水平明顯升高((8702±15635)ng/ml vs.(1052±5370)ng/ml,P＜0.05)。將XP04啟動(dòng)子甲基化情況的檢測(cè)與AFP檢測(cè)相結(jié)合可以提高對(duì)肝癌的檢出率和特異性。 結(jié)論 我們的結(jié)果表明,隨著慢性HBV感染疾病的進(jìn)展,外周血單個(gè)核細(xì)胞中XP04mRNA水平逐漸下降,而XP04啟動(dòng)子的甲基化率逐漸增加。此外,將XP04啟動(dòng)子甲基化情況的檢測(cè)與AFP檢測(cè)相結(jié)合可以提高對(duì)肝癌的檢出率和特異性,這預(yù)示著外周血單個(gè)核細(xì)胞的XP04啟動(dòng)子的甲基化狀態(tài)有可能可以作為一種非侵入性的生物標(biāo)志物來(lái)預(yù)測(cè)肝癌與HBV感染的進(jìn)展。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R512.62

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;應(yīng)用檢測(cè)血清中胎兒甲種球蛋白診斷原發(fā)性肝癌[J];廣州醫(yī)藥;1973年01期

2 林淵;;幼兒型原發(fā)性肝癌——附手術(shù)切除成功1例[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1978年03期

3 傅佳林;楊仲達(dá);莫榮樞;楊馥玲;蔣佩青;;原發(fā)性肝癌合并低血糖昏迷(附15例報(bào)告)[J];江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1978年Z1期

4 陳積圣;何貴義;;同種原位肝移植與原發(fā)性肝癌(綜述)[J];瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1981年04期

5 王淑楷;陳玉麗;倪秀珠;黃寶玉;羅周榮;;59例原發(fā)性肝癌的特殊臨床表現(xiàn)[J];福建醫(yī)藥雜志;1984年05期

6 崔生達(dá);妊娠期巨大原發(fā)性肝癌一例報(bào)告[J];第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1987年Z1期

7 裘進(jìn)富;梁浩;;“柏——查二氏綜合征”合并原發(fā)性肝癌骨轉(zhuǎn)移一例報(bào)告[J];吉林醫(yī)學(xué);1987年03期

8 趙德鈞;陳志斌;趙華山;劉萍;張祥惠;余大厚;;甲胎蛋白陰性原發(fā)性肝癌酶譜檢測(cè)的臨床意義[J];腫瘤防治研究;1987年01期

9 孟廣典,李會(huì)榮,沙永慧;放射治療原發(fā)性肝癌20例初步體會(huì)[J];中華放射腫瘤學(xué)雜志;1989年04期

10 劉蕾;;口服避孕藥與原發(fā)性肝癌[J];國(guó)際腫瘤學(xué)雜志;1989年04期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 李惠;劉付玉榮;;原發(fā)性肝癌手術(shù)治療142例護(hù)理體會(huì)[A];中華護(hù)理學(xué)會(huì)2009全國(guó)外科護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專(zhuān)題講座會(huì)議論文匯編[C];2009年

2 吳春燕;郭曉鐘;崔忠敏;李宏宇;趙佳鈞;王迪;任麗楠;;AFU、AFP、GGT、ALP和AST聯(lián)合診斷原發(fā)性肝癌[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下冊(cè)）[C];2007年

3 邵夢(mèng)揚(yáng);楊學(xué)峰;;ve積消膠囊治療原發(fā)性肝癌的臨床研究[A];第八屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2000年

4 王洪;張波;;乙型肝炎后肝硬化患者并發(fā)肝癌的危險(xiǎn)因素研究[A];第五屆全國(guó)肝臟疾病臨床暨中華肝臟病雜志成立十周年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

5 羅小平;;原發(fā)性肝癌動(dòng)-靜脈瘺的介入治療及臨床價(jià)值:附38例報(bào)告[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三屆全國(guó)放射學(xué)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2006年

6 陳耀庭;許林鋒;任強(qiáng);馬海清;張靖;周經(jīng)興;駱江紅;陸佩霞;譚綺云;;CT引導(dǎo)經(jīng)皮微波凝固肝動(dòng)脈化療栓塞后原發(fā)性肝癌的臨床應(yīng)用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三屆全國(guó)放射學(xué)大會(huì)論文匯編（下冊(cè)）[C];2006年

7 彭志英;黃亨建;郭丹;李一松;呂瑞雪;安振梅;;Cystatin C在原發(fā)性肝癌組織中表達(dá)的初步研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床檢驗(yàn)管理專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第六屆全國(guó)臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

8 耿堅(jiān);姚明榮;詹松華;王輝;;中藥辨證介入治療原發(fā)性肝癌近期療效觀(guān)察[A];第十二屆全國(guó)肝癌學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

9 范衛(wèi)君;張亮;歐陽(yáng)育樹(shù);王立剛;;磁共振擴(kuò)散加權(quán)成像評(píng)價(jià)原發(fā)性肝癌經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈化療栓塞術(shù)療效的隨訪(fǎng)研究[A];中國(guó)(第七屆)腫瘤微創(chuàng)治療學(xué)術(shù)大會(huì)暨世界影像導(dǎo)引下腫瘤微創(chuàng)治療學(xué)會(huì)成立籌備大會(huì)論文匯編[C];2011年

10 包劍鋒;;原發(fā)性肝癌的中醫(yī)藥治療進(jìn)展[A];浙江省中醫(yī)藥學(xué)會(huì)肝病專(zhuān)業(yè)委員會(huì)2009年學(xué)術(shù)年會(huì)暨肝病新進(jìn)展繼續(xù)教育學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 駐京記者 王丹;《原發(fā)性肝癌規(guī)范化診治專(zhuān)家共識(shí)》發(fā)布[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2009年

2 胡繼雄;隱匿殺手原發(fā)性肝癌[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2003年

3 馮大夫;原發(fā)性肝癌的特點(diǎn)及診治[N];人民日?qǐng)?bào)海外版;2000年

4 日升;拜耳支持原發(fā)性肝癌規(guī)范化診療推廣項(xiàng)目[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2010年

5 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院急診科 教授 羅學(xué)宏;以肝破裂為首發(fā)癥狀的原發(fā)性肝癌[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2009年

6 忠文;治原發(fā)性肝癌驗(yàn)方[N];民族醫(yī)藥報(bào);2001年

7 王建中;中醫(yī)對(duì)原發(fā)性肝癌的認(rèn)識(shí)與治療[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2004年

8 市第三人民醫(yī)院肝膽外科主任醫(yī)師 李宏欣;原發(fā)性肝癌的微波原位滅活治療[N];鎮(zhèn)江日?qǐng)?bào);2008年

9 曾運(yùn)紅　譚衛(wèi)仙;原發(fā)性肝癌的主要危險(xiǎn)因素[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2004年

10 徐光星;何任治療原發(fā)性肝癌學(xué)術(shù)思想探究[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 盧彥達(dá);原發(fā)性肝癌三維適形放療乙型肝炎病毒再激活[D];天津醫(yī)科大學(xué);2010年

2 高姍;上海市區(qū)原發(fā)性肝癌的流行病學(xué)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

3 文潔;終末期肝病模型與原發(fā)性肝癌患者肝臟儲(chǔ)備功能及中醫(yī)證候的相關(guān)性研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

4 梁嶸;高爾基體糖蛋白73對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷價(jià)值研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2012年

5 田麗媛;原發(fā)性肝癌實(shí)驗(yàn)檢測(cè)及相關(guān)輔助診斷技術(shù)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2011年

6 許飛;原發(fā)性肝癌肝動(dòng)脈化療栓塞術(shù)及聯(lián)合調(diào)強(qiáng)放療的臨床研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

7 李玉春;MicroRNA相關(guān)單核苷酸多態(tài)性與原發(fā)性肝癌遺傳易感性研究[D];鄭州大學(xué);2012年

8 王娜;江蘇省海門(mén)市原發(fā)性肝癌時(shí)間趨勢(shì)及相關(guān)危險(xiǎn)因素隊(duì)列研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

9 隋國(guó)德;原發(fā)性肝癌發(fā)生與ras基因突變及法呢基轉(zhuǎn)移酶過(guò)量表達(dá)的關(guān)系研究[D];山東大學(xué);2012年

10 郭卉;p57下調(diào)對(duì)原發(fā)性肝癌生長(zhǎng)和侵襲的影響及其分子機(jī)制[D];西安交通大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 江小杰;原發(fā)性肝癌RUNX3的表達(dá)及啟動(dòng)子異常甲基化研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

2 于里涵;原發(fā)性肝癌腫瘤位置對(duì)手術(shù)切除的影響及手術(shù)方式的臨床分析[D];吉林大學(xué);2011年

3 徐海燕;原發(fā)性肝癌自發(fā)性破裂出血治療分析[D];中南大學(xué);2010年

4 李業(yè)飛;大體腫瘤體積評(píng)估原發(fā)性肝癌放射治療預(yù)后的價(jià)值[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2011年

5 丁海;基質(zhì)金屬蛋白酶-2和抑癌基因nm23在原發(fā)性肝癌中的表達(dá)及其臨床意義[D];蘇州大學(xué);2001年

6 吳鳳萍;原發(fā)性肝癌患者的耳穴規(guī)律探討[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2010年

7 何穎;177例40歲以下原發(fā)性肝癌合并乙肝肝硬化患者臨床分析[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2011年

8 張鳳;慢性乙型肝炎病毒感染患者胞穿梭素4啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)的研究[D];山東大學(xué);2013年

9 李清春;（125）~I放射性粒子植入術(shù)治療原發(fā)性肝癌的臨床研究[D];吉林大學(xué);2011年

10 趙翔宇;射頻消融治療原發(fā)性肝癌的臨床應(yīng)用研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2011年

，

本文編號(hào)：2268603