發(fā)布時間：2018-10-13 09:04

【摘要】：目的使用基于18S rRNA基因的巢式PCR方法對云南省邊境地區(qū)鏡檢為惡性瘧和間日瘧的患者血樣進(jìn)行鑒定,分析該地區(qū)瘧原蟲18S rRNA基因序列之間的差異。方法 2004-2011年在云南省邊境地區(qū)西雙版納勐臘、保山騰沖和德宏盈江,及緬甸那威、南卡江、芒東和拉咱等7個縣(市)收集鏡檢為單一感染惡性瘧原蟲或間日瘧原蟲的全血或濾紙血樣品。采用基于18S rRNA基因的巢式PCR方法對所有血樣進(jìn)行鑒定,陽性PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序。所獲序列進(jìn)行Blastn比對。應(yīng)用MEGA 6.06軟件采用鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。結(jié)果 475份鏡檢為惡性瘧原蟲(256份)和間日瘧原蟲(219份)感染的血樣中,經(jīng)18S rRNA基因檢測為惡性瘧原蟲感染的有242例,間日瘧原蟲感染176例和混合感染57例。鏡檢法和巢式PCR法檢測結(jié)果一致的血樣占81.7%(388/475)。兩法檢測不一致的血樣發(fā)生頻率與其原蟲密度顯著相關(guān)(Spearman’s r=-0.408,P0.05)。多序列比對分析結(jié)果顯示,共計得到11條、10條惡性瘧原蟲、間日瘧原蟲18S rRNA基因同源序列,變異位點分別占2.9%(6/205)和22.5%(27/120)。所獲惡性瘧原蟲18S rRNA基因序列與來自喀麥隆(Gen Bank登錄號KC428742)等基因序列聚在一個大的分支,與來自荷蘭和巴西的3個惡性瘧原蟲S型18S rRNA基因序列(GenBank登錄號U36465、U36466和U36467)的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。所獲間日瘧原蟲序列與來自泰國的間日瘧原蟲A型小亞單位核糖體核糖核酸(SSU r RNA)基因序列(Gen Bank登錄號U07367)等聚在一支,與來自泰國的間日瘧原蟲C型基因序列(Gen Bank登錄號U07368)等參考序列親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。結(jié)論鏡檢為單一感染的血樣中,巢式PCR檢出57例混合感染。云南省邊境地區(qū)7個縣(市)瘧原蟲18S rRNA基因序列之間無明顯差異。
[Abstract]:Objective to identify the blood samples of Plasmodium falciparum malaria and vivax malaria by nested PCR method based on 18s rRNA gene, and to analyze the difference of 18s rRNA gene sequence of Plasmodium falciparum in Yunnan border area. Methods in the border areas of Yunnan Province from 2004 to 2011, Mengla, Baoshan Tengchong and Dehong Yingjiang in Xishuangbanna, Myanmar, Nawei, Nanka River, Myanmar, were used. Whole blood or filter paper blood samples of single infected Plasmodium falciparum or Plasmodium vivax were collected from 7 counties (cities). All blood samples were identified by nested PCR based on 18s rRNA gene and the positive PCR products were sequenced. The sequence was compared with Blastn. MEGA 6.06 software was used to construct phylogenetic tree. Results two hundred and forty-five blood samples were infected with Plasmodium falciparum and Plasmodium vivax under microscope. Among them, 242cases were infected by 18s rRNA gene, 176 cases were infected by Plasmodium vivax and 57 cases were mixed infection. The results of microscopic examination and nested PCR were 81.7% (388 / 475). There was a significant correlation between the frequency of blood samples and the density of protozoa (Spearman's r-0.408). The results of multiple sequence alignment analysis showed that 11, 10 Plasmodium falciparum and Plasmodium vivax 18s rRNA genes were homologous, and the mutation sites were 2.9% (6 / 205) and 22.5% (27 / 120), respectively. The 18s rRNA gene sequence of Plasmodium falciparum and the sequence of (Gen Bank accession number KC428742 from Cameroon are clustered in a large branch. The phylogenetic relationship of 18s rRNA sequences of Plasmodium falciparum S (GenBank accession numbers U36465U36466 and U36467) from the Netherlands and Brazil is far away. The sequence of Plasmodium vivax and the small subunit ribosomal (SSU r RNA) gene sequence of Plasmodium vivax A from Thailand, (Gen Bank accession number U07367, were clustered in the same branch. The relationship was far from the reference sequence of Plasmodium vivax type C gene (Gen Bank accession number U07368) from Thailand. Conclusion among the blood samples with single infection detected by microscope, 57 cases of mixed infection were detected by nested PCR. There was no significant difference between the 18s rRNA gene sequence of Plasmodium falciparum in seven counties (cities) in the border area of Yunnan Province.
【作者單位】： 云南省蟲媒傳染病防控研究重點實驗室 云南省瘧疾研究中心 云南省寄生蟲病防治所;
【基金】：全球基金國家瘧疾策略項目(No.CHN-S10-G13-M 20120103) 云南省科技計劃項目(No.2010CD132)~~
【分類號】：R531.3

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本文編號：2268036