本文選題：乙型肝炎病毒 + 前S區(qū)　； 參考：《桂林醫(yī)學(xué)院》2014年碩士論文

【摘要】：目的：分析乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus, HBV）前S缺失突變在慢性乙型肝炎輕中度、慢性乙型肝炎重度和慢加急性肝衰竭患者中的檢出率；分析前S1缺失突變病毒株體外復(fù)制力、HBsAg分泌、RNA水平、前S1抗原表達及其對表面抗原啟動子Ⅱ（Surface antigen promoter Ⅱ, SPⅡ）轉(zhuǎn)錄活性的影響。方法：研究對象為119例于2005年8月-2008年5月在解放軍第三0二醫(yī)院診療的住院患者，包括38例慢性乙型肝炎（以下簡稱慢乙肝）輕中度、40例慢乙肝重度和41例慢加急性肝衰竭患者。從患者血清中提取HBVDNA，PCR擴增獲得HBV全長基因組序列，統(tǒng)計前S缺失突變的發(fā)生率。挑選有代表性的前S1缺失突變株及其相應(yīng)對照的野生型HBV全長序列克隆至pGEM-Teasy載體中。用BspQⅠ/ScaⅠ雙酶切1.0倍HBV基因組，72小時后檢測體外病毒復(fù)制力及HBsAg表達水平，同樣的方法轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，72小時后提取HBV RNA，用相對熒光定量法檢測RNA水平。構(gòu)建1.1倍pTriEX-HBV（C）表達載體，轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，72小時后，酶聯(lián)免疫法測前S1抗原的表達。用PCR分別擴增含有前S1缺失突變型和野生型的HBVSPⅡ啟動子片段，構(gòu)建pGL3-SPⅡ雙熒光素酶真核報告表達載體，轉(zhuǎn)染細(xì)胞48小時后檢測相對熒光素酶活性，分析前S1區(qū)缺失突變對重疊的SP Ⅱ啟動子區(qū)熒光素酶活性表達的影響。結(jié)果：①HBV基因組前S缺失突變檢出率在慢乙肝輕中度、慢乙肝重度和慢加急性肝衰竭三組中逐漸遞增，分別為5.3%、12.5%和24.4%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。②與未缺失野生株相比，前S1缺失突變病毒株的體外復(fù)制力和分泌的HBsAg水平分別降低了69%和23.7%；前S1缺失株的3.5kb前基因組RNA、2.4kb mRNA和2.1kb mRNA水平分別降低了87.67%、91.40%和85.94%。③與未缺失野生株相比，前S1區(qū)缺失導(dǎo)致前S1抗原表達消失。④與未缺失野生型相比，前S1缺失突變使重疊的SP Ⅱ啟動子的轉(zhuǎn)錄活性降低了36%。結(jié)論：HBV前S缺失突變發(fā)生率隨乙肝病程進展而逐漸升高，前S1缺失突變株病毒的體外復(fù)制力水平、HBsAg的分泌及RNA水平均不同程度降低，，并導(dǎo)致前S1抗原表達消失；同時前S1缺失突變導(dǎo)致重疊的SPⅡ啟動子轉(zhuǎn)錄活性降低。結(jié)果有助于闡明HBV前S1區(qū)缺失突變的臨床和病毒生物學(xué)意義。
[Abstract]:Objective: to analyze the detection rate of hepatitis B virus (HBV) pre-S deletion mutation in patients with chronic hepatitis B (CHB), severe chronic hepatitis B (CHB) and chronic and acute hepatic failure (AHF). The expression of preS1 antigen and its effect on the transcriptional activity of surface antigen promoter 鈪

本文編號：1923060