本文選題：鼠傷寒沙門氏菌 + TRAF6�。� 參考：《天津商業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella enterica serovar Typhimurium,S.Typhimurium)能夠通過Ⅲ型分泌系統(tǒng)(Type III secretion systems,T3SSs)將效應(yīng)蛋白注入宿主細(xì)胞,這些效應(yīng)蛋白按照一定的時(shí)序性誘導(dǎo)宿主細(xì)胞基因表達(dá)模式發(fā)生改變,將細(xì)胞代謝調(diào)整到有利于沙門氏菌病原體在胞內(nèi)存活并繁殖的代謝模式。前人研究表明,沙門氏菌感染過程中利用Salmonella pathogenicity island-1(SPI-1)T3SS效應(yīng)蛋白SopB、SopE和SopE2激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子3(Signal Transducer and Activator of Transcription3,STAT3)的磷酸化,但是對(duì)于該STAT3磷酸化激活的分子機(jī)制還不清楚。本課題在實(shí)驗(yàn)室前期研究工作的基礎(chǔ)上,利用免疫印跡(Western bolt)分析技術(shù)發(fā)現(xiàn)與志賀氏菌、金黃色葡萄球菌和單增李斯特菌不同,沙門氏菌感染特異性的誘導(dǎo)TRAF6蛋白發(fā)生修飾。進(jìn)一步利用免疫共沉淀技術(shù)(IP)分析發(fā)現(xiàn)該TRAF6修飾為自泛素化修飾。通過構(gòu)建ΔinvA、ΔsopB、ΔsopE2以及ΔsopB/sopE2突變體發(fā)現(xiàn),SPI-1 T3SS效應(yīng)蛋白SopB和SopE2特異性地誘導(dǎo)TRAF6的自泛素化修飾。已知,MAPKs、NF-κB和STAT3是宿主細(xì)胞三條主要的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)信號(hào)通路,通過檢測(cè)TRAF6對(duì)三條信號(hào)通路的影響,利用沙門氏菌分別感染Traf6+/+MEF細(xì)胞和Traf6-/-MEF細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)與Traf6+/+MEF細(xì)胞相比,Traf6-/-MEF細(xì)胞中TRAF6的缺失不同程度的抑制了沙門氏菌感染早期ERK、p38的磷酸化激活以及NF-κB的激活。區(qū)別較大的是到感染后期(感染8-16小時(shí)),TRAF6的缺失顯著影響STAT3的磷酸化激活。從時(shí)間效應(yīng)上發(fā)現(xiàn),STAT3 pY705磷酸化激活的時(shí)間與SPI-1 T3SS效應(yīng)蛋白SopB和SopE2引起的TRAF6的泛素化時(shí)間恰好吻合,暗示TRAF6和STAT3 Y705位磷酸化之間存在潛在的聯(lián)系。為了進(jìn)一步探索TRAF6泛素化與STAT3磷酸化之間可能存在的關(guān)聯(lián),我們將TRAF6第70位半胱氨酸(Cys)和第124位賴氨酸(Lys)分別突變?yōu)楸彼?Ala),并在Traf6-/-MEF細(xì)胞中表達(dá)野生型TRAF6、TRAF6(C70A)和TRAF6(K124A)突變體,隨后用沙門氏菌進(jìn)行感染,發(fā)現(xiàn)與表達(dá)野生型TRAF6的細(xì)胞相比,在Traf6-/-MEF細(xì)胞中表達(dá)C70A和K124A突變體不僅顯著減少了TRAF6的自泛素化,同時(shí)也顯著減少了STAT3磷酸化。表明,SPI-1 T3SS效應(yīng)蛋白SopB/SopE2引起的TRAF6的泛素化參與了STAT3的磷酸化激活。本研究揭示了沙門氏菌感染機(jī)制中的一種新策略,即T3SS效應(yīng)蛋白通過將宿主蛋白進(jìn)行泛素化修飾并介導(dǎo)了宿主蛋白的磷酸化激活,引起宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄重編程,使宿主細(xì)胞內(nèi)的環(huán)境轉(zhuǎn)變?yōu)橛欣谏抽T氏菌生存和繁殖的模式。這一發(fā)現(xiàn)將為設(shè)計(jì)和篩選競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑或分子結(jié)構(gòu)類似物,尋找潛在的用于沙門氏菌感染治療并提高預(yù)后治療效果的小分子藥物開發(fā)提供重要靶點(diǎn)和理論依據(jù)。
[Abstract]:Salmonella enterica serovar Typhimurium S.Typhimurium could inject effector proteins into host cells through type 鈪，

本文編號(hào)：1788411