本文選題：鼠傷寒沙門氏菌 + TRAF6　； 參考：《天津商業(yè)大學》2017年碩士論文

【摘要】：鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella enterica serovar Typhimurium,S.Typhimurium)能夠通過Ⅲ型分泌系統(tǒng)(Type III secretion systems,T3SSs)將效應蛋白注入宿主細胞,這些效應蛋白按照一定的時序性誘導宿主細胞基因表達模式發(fā)生改變,將細胞代謝調整到有利于沙門氏菌病原體在胞內存活并繁殖的代謝模式。前人研究表明,沙門氏菌感染過程中利用Salmonella pathogenicity island-1(SPI-1)T3SS效應蛋白SopB、SopE和SopE2激活信號轉導和轉錄活化因子3(Signal Transducer and Activator of Transcription3,STAT3)的磷酸化,但是對于該STAT3磷酸化激活的分子機制還不清楚。本課題在實驗室前期研究工作的基礎上,利用免疫印跡(Western bolt)分析技術發(fā)現(xiàn)與志賀氏菌、金黃色葡萄球菌和單增李斯特菌不同,沙門氏菌感染特異性的誘導TRAF6蛋白發(fā)生修飾。進一步利用免疫共沉淀技術(IP)分析發(fā)現(xiàn)該TRAF6修飾為自泛素化修飾。通過構建ΔinvA、ΔsopB、ΔsopE2以及ΔsopB/sopE2突變體發(fā)現(xiàn),SPI-1 T3SS效應蛋白SopB和SopE2特異性地誘導TRAF6的自泛素化修飾。已知,MAPKs、NF-κB和STAT3是宿主細胞三條主要的轉錄調節(jié)信號通路,通過檢測TRAF6對三條信號通路的影響,利用沙門氏菌分別感染Traf6+/+MEF細胞和Traf6-/-MEF細胞,發(fā)現(xiàn)與Traf6+/+MEF細胞相比,Traf6-/-MEF細胞中TRAF6的缺失不同程度的抑制了沙門氏菌感染早期ERK、p38的磷酸化激活以及NF-κB的激活。區(qū)別較大的是到感染后期(感染8-16小時),TRAF6的缺失顯著影響STAT3的磷酸化激活。從時間效應上發(fā)現(xiàn),STAT3 pY705磷酸化激活的時間與SPI-1 T3SS效應蛋白SopB和SopE2引起的TRAF6的泛素化時間恰好吻合,暗示TRAF6和STAT3 Y705位磷酸化之間存在潛在的聯(lián)系。為了進一步探索TRAF6泛素化與STAT3磷酸化之間可能存在的關聯(lián),我們將TRAF6第70位半胱氨酸(Cys)和第124位賴氨酸(Lys)分別突變?yōu)楸彼?Ala),并在Traf6-/-MEF細胞中表達野生型TRAF6、TRAF6(C70A)和TRAF6(K124A)突變體,隨后用沙門氏菌進行感染,發(fā)現(xiàn)與表達野生型TRAF6的細胞相比,在Traf6-/-MEF細胞中表達C70A和K124A突變體不僅顯著減少了TRAF6的自泛素化,同時也顯著減少了STAT3磷酸化。表明,SPI-1 T3SS效應蛋白SopB/SopE2引起的TRAF6的泛素化參與了STAT3的磷酸化激活。本研究揭示了沙門氏菌感染機制中的一種新策略,即T3SS效應蛋白通過將宿主蛋白進行泛素化修飾并介導了宿主蛋白的磷酸化激活,引起宿主細胞的轉錄重編程,使宿主細胞內的環(huán)境轉變?yōu)橛欣谏抽T氏菌生存和繁殖的模式。這一發(fā)現(xiàn)將為設計和篩選競爭性抑制劑或分子結構類似物,尋找潛在的用于沙門氏菌感染治療并提高預后治療效果的小分子藥物開發(fā)提供重要靶點和理論依據(jù)。
[Abstract]:Salmonella enterica serovar Typhimurium S.Typhimurium could inject effector proteins into host cells through type 鈪，

本文編號：1788411