本文選題：清道夫受體A + 鉤端螺旋體��； 參考：《上海交通大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：致病性鉤端螺旋體所致的鉤體病是一種世界范圍傳播的動物源性疾病。機(jī)體的固有免疫在清除鉤體的過程中發(fā)揮了重要作用。但是,除了巨噬細(xì)胞的補(bǔ)體受體以外,尚未發(fā)現(xiàn)鉤體的其它吞噬受體。清道夫受體A(SR A)等巨噬細(xì)胞表面的模式識別受體參與機(jī)體抗外來微生物的感染,結(jié)合前期SR A參與鉤體吞噬的工作基礎(chǔ),我們提出巨噬細(xì)胞可通過SR A識別并吞噬鉤體、參與固有免疫和調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的假說。本研究發(fā)現(xiàn),通過流式細(xì)胞術(shù)和激光共聚焦顯微鏡等方法,用特異性化學(xué)抑制劑Poly I和SR A單克隆抗體封閉巨噬細(xì)胞SR A,在缺乏血清補(bǔ)體調(diào)理的情況下,兩者均能有效抑制小鼠巨噬細(xì)胞對鉤體的吞噬。慢病毒轉(zhuǎn)染SR A的HEK293T細(xì)胞與空載細(xì)胞相比,顯著增強(qiáng)了對鉤體的粘附作用。SR A基因敲除(SR A / )小鼠的巨噬細(xì)胞也表現(xiàn)出顯著降低的吞噬能力。將抽提純化的鉤體LPS包被1μm小珠,發(fā)現(xiàn)WT巨噬細(xì)胞吞噬鉤體LPS包被珠子的能力顯著高于對對照珠子的吞噬,SR A / 小鼠的巨噬細(xì)胞對LPS包被珠子的吞噬則明顯低于WT細(xì)胞。同樣地,表達(dá)SR A的HEK293T細(xì)胞對LPS包被珠子的粘附顯著高于空載細(xì)胞。同時,在鉤體刺激下,SR A可與TLR4共定位,發(fā)生共受體作用,具有免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)�？偟膩碚f,這些結(jié)果表明在鉤體感染過程中,巨噬細(xì)胞可通過SR A識別鉤體LPS并吞噬鉤體,能與TLR4發(fā)生共受體作用參與機(jī)體的固有免疫和調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)等過程。尿道致病性大腸埃希菌是尿路感染的首要致病菌。它的流行病學(xué)數(shù)據(jù)對臨床治療具有指導(dǎo)意義。本研究以2008年在上海收集的198株分離自尿路感染患者的大腸埃希菌為對象,通過藥敏實(shí)驗(yàn)研究耐藥表型,并基于PCR方法在分子水平檢測耐藥和毒力基因。采用脈沖場凝膠電泳(PFGE)和系統(tǒng)發(fā)育群分析菌株的同源性,并研究基因在各群體間的分布與相關(guān)性。藥敏實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)這些細(xì)菌具有極高的多重耐藥(MDR)率(153/198),以及高達(dá)48.5%(96/198)的超廣譜β內(nèi)酰胺酶(ESBLs)陽性率,并且對青霉素、氟喹諾酮、磺胺類和第一、二代頭孢菌素等高度耐藥。分子水平的結(jié)果顯示這些細(xì)菌以CTX-M-9群(70/96)耐藥基因最為常見,其次為CTX-M-1群(27/96)。系統(tǒng)發(fā)育群D細(xì)菌占總數(shù)的42.4%(84/198),并在各系統(tǒng)發(fā)育群中擁有最高的ESBL率(50/84)和MDR率(75/84)。各毒力基因在系統(tǒng)發(fā)育群B2細(xì)菌中的比例顯著偏高,但afa BC基因除外。對產(chǎn)ESBL的菌株進(jìn)行PFGE分析,在67%的相似度下可被聚類為6個組。研究發(fā)現(xiàn)afa BC基因特定出現(xiàn)在系統(tǒng)發(fā)育群D和PFGE組I中。與其他報道不同,本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)afa BC與CTX-M-9群相關(guān)�？傊�,這些對細(xì)菌耐藥與毒力因子的理解有助于臨床開展針對尿路感染的經(jīng)驗(yàn)治療。
[Abstract]:Leptospirosis caused by pathogenic leptospirosis is a worldwide spread of animal disease.Innate immunity plays an important role in the clearance of leptospirosis.However, no other phagocytic receptors of Leptospira have been found except for the complement receptors of macrophages.The pattern recognition receptors on the surface of macrophages, such as scavenger receptor (A(SR), are involved in the prevention of infection by foreign microbes. In combination with the work basis of earlier stage of leptospira phagocytosis, we propose that macrophages can recognize and swallow leptospira by SR A.Hypotheses involved in innate immunity and regulation of inflammation.In this study, we found that Monoclonal antibodies (McAbs) of specific chemical inhibitors Poly I and SR A were used to block macrophage SR A by flow cytometry and laser confocal microscopy, without serum complement conditioning.Both of them could effectively inhibit the phagocytosis of Leptospira by mouse macrophages.HEK293T cells transfected with lentivirus significantly enhanced the adhesion to Leptospira. The macrophages of SR A knockout mice also showed significantly decreased phagocytosis.The purified Leptospira LPS was coated with 1 渭 m beads. It was found that the phagocytic ability of WT macrophages to LPS coated beads was significantly higher than that of WT cells to LPS coated beads.Similarly, the adhesion of HEK293T cells expressing SR A to LPS coated beads was significantly higher than that of unloaded cells.At the same time, under the stimulation of Leptospira, sarcoreceptor A could co-locate with TLR4, and had immunomodulatory effect.In general, these results suggest that macrophages can recognize LPS and phagocytosis of leptospirosis through SR A during the infection of Leptospira, and can co-receptor with TLR4 to participate in the process of innate immunity and regulation of inflammation.Urethral pathogenic Escherichia coli is the leading pathogen of urinary tract infection.Its epidemiological data have guiding significance for clinical treatment.In this study, 198 strains of Escherichia coli isolated from patients with urinary tract infection were collected in Shanghai in 2008. Drug resistance and virulence genes were detected at molecular level based on PCR method.The homology of the strains was analyzed by pulsed field gel electrophoresis (PFGE) and phylogenetic analysis, and the distribution and correlation of genes among different populations were studied.Drug sensitivity tests showed that these bacteria had a very high MDR rate of 153 / 198, and a high positive rate of Extended-spectrum 尾 -lactamases (ESBLs) up to 48.5 / 96 / 198), and were highly resistant to penicillin, fluoroquinolones, sulfanilamides and first and second generation cephalosporins.Results at the molecular level showed that the CTX-M-9 group 70 / 96)-resistant gene was the most common, followed by CTX-M-1 group 27 / 96.Phylogenetic group D accounted for 42.4% of the total, and had the highest ESBL rate of 50 / 84 and MDR rate of 75 / 84% among the phylogenetic groups.The proportion of virulence genes in B 2 bacteria was significantly higher, except for afa BC gene.The ESBL producing strains could be clustered into 6 groups under 67% similarity by PFGE analysis.It was found that afa BC gene was specific in group D and group I of PFGE.Different from other reports, we found that afa BC was associated with CTX-M-9 group.All in all, these understanding of bacterial resistance and virulence factors are helpful for clinical experience therapy for urinary tract infection.
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R514.4

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本文編號：1737120