本文選題：登革熱　切入點：重癥登革熱　出處：《廣州醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：登革熱(DF)是由登革病毒(DENV)經(jīng)蚊媒傳播的一種急性傳染病,DENV依抗原性不同可分為四種血清型(DENV-1~DENV-4),每個血清型都可引起從無癥狀感染到致死性疾病的一系列廣泛的臨床表現(xiàn)譜。2009年世界衛(wèi)生組織將有癥狀的DENV感染簡單分為DF和重癥登革熱(SD),DF為疾病的輕癥形式,表現(xiàn)為一種發(fā)熱性自限性疾病,主要癥狀有高熱、頭痛、乏力、皮疹等,病程持續(xù)一周左右,而SD特征為在熱退后出現(xiàn)以嚴(yán)重出血、血漿滲漏和器官損傷為特征的重癥表現(xiàn),病死率較高,但SD的發(fā)病機制尚未闡明,目前認(rèn)為主要與二次異型DENV感染、病毒毒力和免疫病理等因素有關(guān)。廣東省尤其是廣州市是我國登革熱的高發(fā)區(qū),每年都有登革病例報告,3至5年出現(xiàn)一個發(fā)病高峰,以DENV-1為主。近幾年來流行趨勢加重,2013-2014年連續(xù)兩年爆發(fā)流行,尤其是2014年,為廣州史上最嚴(yán)重的登革熱疫情,出現(xiàn)較多的重癥病例,DENV流行的本地化問題一直沒有得到解決,且我國DF患者的臨床及實驗室特征與東南亞等流行區(qū)不同。在東南亞及南美洲等國家和地區(qū),DF通常被認(rèn)為是一個兒科疾病,較少侵襲成人,重癥也主要發(fā)生在兒童和青少年病例,目前對SD發(fā)病機制的理解基本都來源于東南亞兒童SD的研究;而我國DF病例以成人為主,SD發(fā)生機制可能與流行區(qū)不同,但目前尚無相關(guān)研究報道。因此,研究我國成人DF患者病原特點和免疫反應(yīng)規(guī)律,闡明SD的發(fā)病機制,尋求SD預(yù)警指征從而對SD進(jìn)行早期診斷、預(yù)防和治療以降低SD的病死率是亟待解決的問題。目的:分析2013-2014年廣州流行的DENV-1分子特征,探討DENV本地流行的分子學(xué)證據(jù);分析DENV基因變異、病毒載量和機體固有免疫與DF嚴(yán)重程度的相關(guān)性,探討我國SD患者的發(fā)病機制,從而為SD的臨床救治提供科學(xué)依據(jù)。方法:應(yīng)用Ion Torrent深度測序法對廣州2013-2014年流行的DENV-1進(jìn)行全基因組測序,與Genbank中報道的有全基因序列的DENV-1毒株進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析,探討此次DENV爆發(fā)和流行的分子學(xué)依據(jù);對DF和SD患者來源的DENV-1全基因序列進(jìn)行基因位點多態(tài)性、基因表達(dá)差異和遺傳多樣性比較,分析DENV基因序列變異對疾病嚴(yán)重程度的影響。應(yīng)用DENV IgM和IgG抗體捕獲ELISA試劑盒檢測住院患者IgM和IgG抗體水平了解我國患者初次感染及二次感染分布情況,比較DF和SD患者之間的二次感染百分率差異以分析其與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性,探討二次異型DENV感染機制在我國SD發(fā)生中的作用。應(yīng)用熒光定量RT-PCR對患者發(fā)病第1-10天的血清進(jìn)行DENV血清型分型和載量檢測,觀察病毒載量在疾病過程中的動態(tài)變化規(guī)律、比較DF和SD患者病毒載量差異,以了解疾病進(jìn)程中DENV與機體的相互作用,探討其與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性。應(yīng)用Luminex多因子檢測技術(shù)檢測DF和SD患者疾病進(jìn)程中不同時間點的外周血中炎癥介質(zhì)和粘附分子水平探討機體炎癥反應(yīng)與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性。應(yīng)用PCR array檢測患者病程中外周血單個核細(xì)胞中模式識別受體及其信號通路相關(guān)基因的表達(dá)水平,分析其與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性,探討固有免疫分子機制在DF尤其是SD發(fā)病中的作用。結(jié)果:(1)2013-2014年廣州流行的DENV-1有兩種基因型,即基因I型和III型,其中基因III型DENV-1在2013年首次出現(xiàn),其特征是在3’-UTR末端高變區(qū)發(fā)生21個核苷酸的缺失,遺傳進(jìn)化分析推測其可能是在2013年由新加坡傳入廣州并造成2014年廣州登革大流行。(2)基因I型DENV-1序列遺傳多樣性在DF和SD患者中存在差異,但基因III型DENV-1序列沒有表現(xiàn)出明顯的差異。(3)登革患者IgM抗體水平隨著病程進(jìn)展迅速升高,至第6天時陽性百分率即達(dá)95%以上;IgG抗體水平較IgM上升相對緩慢,陽性百分率也相對較低;我國登革患者以初次感染為主,DF和SD患者二次感染百分率差異無統(tǒng)計學(xué)意義。(4)DENV載量在發(fā)病起始時達(dá)到峰值,隨疾病恢復(fù)快速下降,SD患者病毒載量在發(fā)熱期與DF患者并無明顯差異,但極期時顯著高于DF患者;初次感染患者較二次感染者有更高的病毒載量。(5)與健康對照相比,登革患者炎癥介質(zhì)和血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子水平顯著升高,但DF和SD患者表現(xiàn)出不同的動力學(xué)變化特征,DF患者隨病情恢復(fù)水平逐漸下降,但SD患者高水平炎癥介質(zhì)持續(xù)時間較長。(6)登革熱患者基因表達(dá)水平較健康對照顯著升高,隨病情恢復(fù),表達(dá)水平逐漸下降,與病程進(jìn)展有明顯的相關(guān)性;機體主要通過TLR7/8、RIG-I和MDA5受體識別病毒來源分子,激活相應(yīng)的信號通路,引起IFN-I和炎癥介質(zhì)產(chǎn)生以抵抗病毒感染;SD患者基因表達(dá)水平低于DF患者。結(jié)論:廣州DENV流行可能已經(jīng)從單一輸入模式轉(zhuǎn)變?yōu)檩斎牒捅镜亓餍泄泊娴哪Ｊ?病毒基因變異和二次異型DENV感染不是我國SD發(fā)病的最主要因素;但機體固有免疫反應(yīng)與疾病嚴(yán)重程度有明顯相關(guān)性,在SD發(fā)病中起重要作用。
[Abstract]:In recent years , the prevalence of DENV infection in China has not been addressed . In order to investigate the relationship between the disease severity and the degree of disease severity , it was found that there were two genotypes , i.e . , genotype I and type III , in peripheral blood mononuclear cells in patients with DF and SD , and compared with the severity of disease . ( 6 ) The level of gene expression in dengue fever patients was significantly higher than that in healthy controls . The level of expression of IFN - I and MDA5 was significantly correlated with the progression of disease . Conclusion : The epidemic of DENV in Guangzhou may have been changed from single input mode to the mode of input and local popular coexistence ; the virus gene mutation and secondary abnormal DENV infection are not the most important factors in the pathogenesis of SD ; however , the innate immune response of the organism has a significant correlation with the severity of the disease , and plays an important role in the pathogenesis of SD .

【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R512.8

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本文編號：1708639