本文選題：乙型肝炎病毒　切入點(diǎn)：滋養(yǎng)細(xì)胞　出處：《現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展》2015年01期

【摘要】：目的:從體外實(shí)驗(yàn)研究HBV在胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞的感染和復(fù)制,初步探討HBV經(jīng)胎盤(pán)傳播的機(jī)制。方法:收集HBV攜帶孕婦足月胎盤(pán)12例,采用密度梯度離心法聯(lián)合反復(fù)貼壁法分離、純化滋養(yǎng)細(xì)胞,提取滋養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)滋養(yǎng)細(xì)胞中CK-7表達(dá),進(jìn)行細(xì)胞純度鑒定;免疫雙標(biāo)法結(jié)合激光掃描共聚焦顯微鏡技術(shù)檢測(cè)滋養(yǎng)細(xì)胞CK-7及間質(zhì)Vimentin的表達(dá),進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)鑒定。PCR-熒光探針?lè)z測(cè)體外培養(yǎng)24、48、72h滋養(yǎng)細(xì)胞上清HBV DNA的表達(dá);微粒子酶免疫分析技術(shù)檢測(cè)體外培養(yǎng)24、48、72h滋養(yǎng)細(xì)胞上清HBs Ag和HBeAg的表達(dá)。流式細(xì)胞分選技術(shù)分選出純度98%以上的滋養(yǎng)細(xì)胞,熒光定量PCR檢測(cè)滋養(yǎng)細(xì)胞中HBV ccc DNA的表達(dá)。結(jié)果:12例HBV攜帶孕婦胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞體外培養(yǎng)24、48、72h,上清均可檢測(cè)到HBV DNA和HBsAg、HBeAg的陽(yáng)性表達(dá)。HBV-M滴度在24h表達(dá)量最高,隨著時(shí)間的推移,HBV DNA滴度逐漸下降,而HBs Ag和HBe Ag滴度呈先下降后上升的趨勢(shì),但3個(gè)時(shí)間點(diǎn)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);3個(gè)時(shí)間點(diǎn)上清HBs Ag和HBe Ag的表達(dá)量有良好的相關(guān)性(P0.05)。12例HBV胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞標(biāo)本中,4例檢測(cè)出HBV cccDNA陽(yáng)性,陽(yáng)性率為33.3%,表達(dá)量(copies/ml)分別為5.67×103、2.12×104、1.72×104、4.90×104。Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示,母血HBV DNA滴度和滋養(yǎng)細(xì)胞HBV cccDNA滴度呈良好的正相關(guān)(r=0.977,P=0.023)。結(jié)論:HBV可感染胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞并在滋養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)繁殖復(fù)制。
[Abstract]:Aim: to investigate the infection and replication of HBV in placental trophoblast in vitro and to explore the mechanism of HBV transmission through placenta.Methods: twelve pregnant women with HBV carrying placenta were collected and separated by density gradient centrifugation combined with repeated adherent method. Trophoblast cells were purified and cultured.The expression of CK-7 in trophoblast cells was detected by flow cytometry, and the expression of CK-7 and interstitial Vimentin in trophoblast cells was detected by double immunostaining combined with laser scanning confocal microscopy.The expression of HBV DNA in the supernatant of trophoblastic cells cultured in vitro was detected by microparticle enzyme immunoassay, and the expression of HBs Ag and HBeAg in the supernatant of cultured trophoblastic cells was detected by microparticle enzyme immunoassay.More than 98% of the trophoblastic cells were isolated by flow cytometry, and the expression of HBV ccc DNA in trophoblast cells was detected by fluorescence quantitative PCR.Results the positive expression of HBV DNA and HBV-M was detected in the supernatant of 12 cases of HBV carrying pregnant women placental trophoblastic cells for 24 h and 48 h for 72 h. The titer of HBV-M was the highest in 24 h, and the titer of HBV-M decreased gradually with the passage of time.However, the titers of HBs Ag and HBe Ag decreased first and then increased, but there was no significant difference among the three time points, and the expression of HBs Ag and HBe Ag in the supernatant at 3 time points was positively correlated with that of HBV placental trophoblastic cells in 4 out of 12 HBV placental trophoblastic specimens.The positive rate was 33.3.The positive correlation analysis showed that the positive correlation between maternal HBV DNA titer and trophoblastic HBV cccDNA titer was 0.977P0.0233.The positive correlation was 5.67 脳 10 3 / ml (2.12 脳 10 4) and 1.72 脳 10 4 (4.90 脳 10 4) 脳 104.Pearson, respectively.Conclusion\\\% HBV can infect placental trophoblast and reproduce in trophoblast.
【作者單位】： 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院婦產(chǎn)科;暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科;陜西省人民醫(yī)院婦產(chǎn)科;廣東省計(jì)劃生育科學(xué)技術(shù)研究所;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No:C30973214) 高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專(zhuān)項(xiàng)科研基金(No:20070559006)
【分類(lèi)號(hào)】：R512.62

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本文編號(hào)：1701037