本文選題：微環(huán)載體　切入點(diǎn)：shRNA　出處：《解放軍醫(yī)學(xué)雜志》2017年11期

【摘要】：目的探討微環(huán)DNA載體介導(dǎo)的shRNA對(duì)HBV轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)乙肝病毒復(fù)制及表達(dá)的抑制效應(yīng)。方法采用分子克隆技術(shù)制備靶向HBV基因的shRNA通用質(zhì)粒p U6-shRNA HBV和微環(huán)shRNA質(zhì)粒p MC-U6-shRNA HBV。將HBV轉(zhuǎn)基因小鼠隨機(jī)分為微環(huán)shRNA組、通用質(zhì)粒shRNA組和無(wú)關(guān)質(zhì)粒對(duì)照組,利用水動(dòng)力轉(zhuǎn)染技術(shù)分別導(dǎo)入p MCU6-shRNA HBV、p U6-shRNA HBV及對(duì)照載體p U6-control。于轉(zhuǎn)染后第1、7、14、21、28、35天,分別采用Real-time PCR及化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法(CMIA)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因小鼠血清HBV DNA及HBs Ag水平,免疫組化染色觀察轉(zhuǎn)基因小鼠肝臟HBc Ag的表達(dá)。結(jié)果質(zhì)粒注射后第7~21天,p U6-shRNA HBV及p MC-U6-shRNA HBV對(duì)轉(zhuǎn)基因小鼠血清HBs Ag的表達(dá)及HBV DNA的復(fù)制均有明顯抑制作用,與p U6-control相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);21d后p U6-shRNA HBV組血清HBs Ag及HBV DNA均有所回升,至第35天基本回復(fù)至對(duì)照水平;至注射后35d,p MC-U6-shRNA HBV依然保持較強(qiáng)的體內(nèi)抑制作用,與其他兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。免疫組化結(jié)果顯示,與p U6-shRNA HBV組相比,p MC-U6-shRNA HBV組小鼠肝組織內(nèi)HBc Ag陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯減少。結(jié)論與p U6-shRNA HBV質(zhì)粒相比,微環(huán)shRNA質(zhì)粒p MC-U6-shRNA HBV對(duì)HBV轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)乙肝病毒的抑制作用持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)久。采用微環(huán)DNA作為shRNA的體內(nèi)遞送載體與普通的質(zhì)粒載體相比具有一定優(yōu)勢(shì)。
[Abstract]:Objective to investigate the inhibitory effect of microloop DNA vector mediated shRNA on HBV replication and expression in HBV transgenic mice.Methods the shRNA general plasmid p U6-shRNA HBV targeting HBV gene and the microloop shRNA plasmid p MC-U6-shRNA HBV were prepared by molecular cloning technique.HBV transgenic mice were randomly divided into three groups: microloop shRNA group, general plasmid shRNA group and unrelated plasmid control group. Hydrodynamic transfection technique was used to introduce p MCU6-shRNA HBV HBV and control vector pU6-control. respectively.Real-time PCR and chemiluminescence microparticle immunoassay were used to detect the levels of HBV DNA and HBs Ag in serum of transgenic mice. The expression of HBc Ag in liver of transgenic mice was observed by immunohistochemical staining.Results the expression of HBs Ag in serum and the replication of HBV DNA in transgenic mice were significantly inhibited by p#en10# HBV and p MC-U6-shRNA HBV on the 7th day after injection. The serum HBs Ag and HBV DNA in p U6-shRNA HBV group increased significantly after 21 days compared with p U6-control.At the 35th day, the control level was basically restored to the control level, and the inhibitory effect of MC-U6-shRNA HBV was still strong at 35d after injection, which was significantly different from that of the other two groups (P 0.05).The results of immunohistochemistry showed that compared with p U6-shRNA HBV group, the number of HBc Ag positive cells in liver tissue of mice in p U6-shRNA HBV group was significantly lower than that in p U6-shRNA HBV group.Conclusion compared with p U6-shRNA HBV plasmid, the inhibitory effect of microloop shRNA plasmid p MC-U6-shRNA HBV on hepatitis B virus in HBV transgenic mice is longer than that of p U6-shRNA HBV plasmid.Using microloop DNA as the delivery vector of shRNA in vivo has some advantages compared with the ordinary plasmid vector.
【作者單位】： 解放軍第458醫(yī)院全軍肝病中心、全軍轉(zhuǎn)基因動(dòng)物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2014A020212639) 廣州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(201510010004,201604046020)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R512.62

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本文編號(hào)：1690813