本文選題：登革熱　切入點(diǎn)：尿液　出處：《廣州醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：登革熱是由登革病毒（DENV）引起的一種急性傳染病，是全球熱帶及亞熱帶地區(qū)主要的公共衛(wèi)生問題，對人類健康和公共衛(wèi)生安全構(gòu)成了重要威脅。登革熱需要借助實(shí)驗(yàn)室診斷才能確診，通過RT-PCR方法檢測DENV-RNA，是一種快速、敏感、特異的實(shí)驗(yàn)室診斷方法，其常用的檢測標(biāo)本為血標(biāo)本，但存在病毒血癥期短，采集血標(biāo)本有創(chuàng)、不方便等缺點(diǎn)，尿液較血標(biāo)本有經(jīng)濟(jì)、方便、安全無創(chuàng)等優(yōu)點(diǎn)，尿液中DENV-RNA檢測能否用于登革熱的確診？國外研究很少，國內(nèi)尚無研究。因此，明確尿液中DENV-RNA檢測對登革熱確診的價(jià)值，對于提高登革熱的診治水平有重要意義。 一、研究目的 本研究擬建立一種通過尿液檢測DENV-RNA的實(shí)驗(yàn)室方法，并探討其臨床意義。 二、對象 1.實(shí)驗(yàn)組：2013年8-11月廣州市第八人民醫(yī)院收治的57例登革熱住院病人，其中登革熱（DF）42例，重癥登革熱（SDF）15例。采集病人73份血漿和病程早中晚期的158份系列尿液標(biāo)本開展實(shí)驗(yàn)研究。 1.157例登革熱病人平均年齡為37.5歲（7-74歲）。男性有35例，女性有22例。 1.273份血漿對應(yīng)51例登革熱病人（人均1-2份），在病程早期（發(fā)病1-5天）、病程中期（發(fā)病6-9天）和病程晚期（發(fā)病10-14天）分別有35份，33份，5份血漿；還有6例病人未采集到血漿。 1.3158份尿液對應(yīng)57例登革熱病人（人均2-3份），在病程早期、中期和晚期分別有56份、76份和26份尿液。 2.對照組：包括非登革熱病人組和健康人組各10例，每人各有1份尿液標(biāo)本，共20份。非登革熱病人組包括艾滋病病人組5例，乙肝病人組5例。 三、方法 1.確診登革熱患者 查閱病歷資料，對57例登革熱病人的臨床表現(xiàn)及病原學(xué)檢測結(jié)果進(jìn)行匯總，依據(jù)2009年WHO頒布的《登革熱診斷、治療以及防控指南》，可判斷57例登革熱病人均達(dá)到實(shí)驗(yàn)室確診標(biāo)準(zhǔn)，并可區(qū)分DF患者和SDF患者。 2.標(biāo)本的收集與保存 2.1.采集尿液，每份留取5-10ml，在2h內(nèi)以2000轉(zhuǎn)/分離心10min，取上清液分裝至1.5ml微量離心管中，-80℃冰箱中保存，避免反復(fù)凍融； 2.2.采集新鮮抗凝血5ml，迅速分離血漿，分裝至1.5ml微量離心管中，-80℃冰箱中保存。 3.采用ELISA檢測血漿中抗DENV-IgM和IgG抗體 使用澳大利亞PanBio公司生產(chǎn)的PANBIO DENGUE IgM CAPTUREELISA試劑盒和PANBIO DENGUE IgG CAPTURE ELISA試劑盒，分別檢測登革熱病人急性期血漿中的抗DENV-IgM和IgG抗體。 3.登革熱病人初次感染和二次感染的判斷 若抗DENV-IgM陽性同時(shí)抗DENV-IgG陰性，可判斷為初次感染；若抗DENV-IgG陽性，且標(biāo)本采集的時(shí)間處于發(fā)熱期，無論抗DENV-IgM結(jié)果如何，可判斷為二次感染。 5.采用RT-PCR方法檢測尿液和血漿中DENV-RNA 將一管尿液標(biāo)本從-80℃冰箱取出，室溫溶解后混勻，用1ml移液器取出200ul尿液標(biāo)本至無菌微量離心管中，依照達(dá)安核酸提取試劑盒和達(dá)安RT-PCR試劑盒操作步驟，制備RT-PCR反應(yīng)體系，再用7500Fast Real-time PCR system（美國ABI公司）擴(kuò)增登革病毒核酸特異片段，依據(jù)擴(kuò)增曲線和CT值，判定出陰陽性結(jié)果。血漿中DENV-RNA檢測需要標(biāo)本量、試劑盒及操作步驟，與尿液中DENV-RNA檢測相同。 6.腎損害的評估方法 通過國內(nèi)公認(rèn)的結(jié)合患者的性別、年齡、血肌酐、白蛋白、血尿素氮等幾個(gè)指標(biāo)，并根據(jù)中國人的飲食校正專用軟件，計(jì)算內(nèi)生肌酐清除率，當(dāng)內(nèi)生肌酐清除率小于或等于70ml/min，可判斷存在腎損害。 7.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 SPSS13.0軟件，Pearson卡方檢驗(yàn)，連續(xù)性校正法，F(xiàn)isher確切概率法。P值小于0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 四、結(jié)果 1.血漿中抗DENV-IgM和抗DENV-IgG檢測結(jié)果 抗DENV-IgM陽性的有51例，抗DENV-IgG陽性的有8例。 2.初次感染和二次感染的判斷結(jié)果 初次感染病人有43例，二次感染病人有8例。余6例病人沒有收集到血漿，無法判斷初次感染和二次感染。 3.尿液中DENV-RNA檢測結(jié)果 3.1.尿液中DENV-RNA檢測陽性率 57例登革熱病人行尿液DENV-RNA檢測，40例病人出現(xiàn)陽性，陽性率為70.2%。對照組20份尿液中DENV-RNA檢測結(jié)果均為陰性。 3.2.不同發(fā)病天數(shù)尿液中DENV-RNA檢測結(jié)果 發(fā)病第1天，尿液中DENV-RNA檢測陽性率為0（N=0/0）；發(fā)病第2天，尿液中DENV-RNA檢測陽性率為0（N=0/0）；發(fā)病第3天，尿液中DENV-RNA檢測陽性率為60%（N=3/5）；發(fā)病第4天，尿液中DENV-RNA檢測陽性率為56%（N=10/18）；發(fā)病第5天，尿液中DENV-RNA檢測陽性率為61%（N=19/31）；發(fā)病第6天，尿液中DENV-RNA檢測陽性率為50%（N=12/24）；發(fā)病第7天，尿液中DENV-RNA檢測陽性率為80%（N=16/20）；發(fā)病第8天，尿液中DENV-RNA檢測陽性率為67%（N=14/21）；發(fā)病第9天，尿液中DENV-RNA檢測陽性率為45%（N=5/11）；發(fā)病第10天，尿液中DENV-RNA檢測陽性率為67%（N=6/9）；發(fā)病第11天，尿液中DENV-RNA檢測陽性率為29%（N=2/7）；發(fā)病第12天，尿液中DENV-RNA檢測陽性率為67%（N=4/6）；發(fā)病第13天，尿液中DENV-RNA檢測陽性率為0（N=0/2）；發(fā)病第14天，尿液中DENV-RNA檢測陽性率為50%（N=1/2）。結(jié)果顯示，最早在發(fā)病第3天能檢測到病毒核酸，最長發(fā)病第14天能檢測到。除了發(fā)病第9天、第11天和第13天外，尿液中DENV-RNA檢測陽性率均高于50%。其中在發(fā)病第7-8天尿液中DENV-RNA檢測陽性率最高，為73.2%（N=30/41）。 3.3.病程早中晚期尿液中DENV-RNA檢測結(jié)果 在病程早期、中期和晚期，尿液中DENV-RNA檢測陽性率分別為57.1%、61.8%和50%。結(jié)果顯示在病程中期尿液中DENV-RNA檢測陽性率較高。 4.尿液與血漿中DENV-RNA檢測結(jié)果對比 4.1.尿液與血漿中DENV-RNA檢測陽性率比較 血漿中DENV-RNA檢測陽性率為96.1%（N=49/51），尿液中DENV-RNA檢測陽性率為70.2%（N=40/57），P值等于0.000（Pearson卡方檢驗(yàn)），統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著差異，結(jié)果顯示尿液中DENV-RNA檢測陽性率較血漿低。還有6例未采集到血漿標(biāo)本的病人，尿液中DENV-RNA檢測均為陽性，結(jié)果顯示尿液中DENV-RNA檢測可以作為一種實(shí)驗(yàn)室診斷方法的補(bǔ)充。 4.2.不同時(shí)段尿液與血漿中DENV-RNA檢測結(jié)果比較 4.2.1.血漿與尿液中最長分別在發(fā)病第12天、第14天檢測出DENV-RNA。 4.2.2.在病程早期，血漿中DENV-RNA檢測陽性率（100%）高于尿液（57.1%），兩者比較，P值等于0.000（Pearson卡方檢驗(yàn)），有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在病程中期，發(fā)病第7天尿液中DENV-RNA檢測陽性率高于血漿。在病程晚期，未收集到血漿標(biāo)本的前提下，尿液中DENV-RNA檢測可作為確診的手段。 4.3.血漿陰性病人尿液中可檢測到DENV-RNA 有1例血漿中DENV-RNA檢測陰性的病人，尿液中DENV-RNA檢測陽性。有1例病人在發(fā)病第12天，血漿中DENV-RNA檢測陰性，而尿液中DENV-RNA檢測陽性。 5.分析尿液中DENV-RNA檢測陽性率的相關(guān)因素 5.1.DF和SDF與尿液中DENV-RNA檢測陽性率關(guān)系 DF和SDF患者，尿液中DENV-RNA陽性率分別為76.2%和53.3%，兩者比較，P值等于0.183，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果顯示尿液中DENV-RNA檢測陽性率與DF和SDF無關(guān)。 5.2.初次感染和二次感染與尿液中DENV-RNA檢測陽性率的關(guān)系 初次感染和二次感染的登革熱患者，尿液中DENV-RNA檢測陽性率分別為67.4%，75%，兩者比較，P值等于0.994，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果顯示尿液中DENV-RNA檢測陽性率與初次感染和二次感染無關(guān)。 5.3.腎損害與尿液中DENV-RNA檢測陽性率的關(guān)系 有腎損害的病人只有42.9%出現(xiàn)尿液中DENV-RNA檢測陽性，而尿液中DENV-RNA檢測陽性的病人只有22.2%存在腎損害。結(jié)果顯示尿液中DENV-RNA檢測陽性率與腎損害無關(guān)。 五、結(jié)論 1.登革熱患者尿液中可檢測出DENV-RNA，在病程中期檢測陽性率最高。 2.用RT-PCR方法檢測登革熱病人尿液中DENV-RNA，是一種方便、經(jīng)濟(jì)、安全的實(shí)驗(yàn)室診斷方法。
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【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R512.8

【參考文獻(xiàn)】

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1 何劍峰;;登革熱流行趨勢及防控策略[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2011年19期

2 郭汝寧;何劍峰;梁文佳;鐘豪杰;楊芬;;廣東省2005-2010年登革熱流行特征分析[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2011年19期

3 羅雅艷;江麗芳;;登革病毒疫苗研究進(jìn)展[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2011年19期

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本文編號(hào)：1674850