發(fā)布時間：2018-03-22 15:09

  本文選題：轉錄介導的擴增技術　切入點：人類免疫缺陷病毒　出處：《中南大學學報(醫(yī)學版)》2017年07期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的:利用轉錄介導的擴增技術(transcription mediated amplification,TMA)擴增HIV RNA,探討TMA技術擴增HIV RNA的敏感性及其與實時熒光定量反轉錄聚合酶鏈反應的比較。方法:利用Taq Man探針、特異性引物、鼠白血病反轉錄酶、T7-RNA聚合酶及PCR底物等建立TMA擴增體系。通過擴增一組10倍梯度稀釋的HIV RNA轉錄標準品,評價TMA體系的靈敏性。收集60例HIV感染患者的血漿,同時采用TMA試劑與Cobas Amplicor HIV-1 Monitor 1.5版試劑進行檢測,比較兩種方法的陽性檢出率,并利用線性回歸和Bland-Altman法分析兩種技術的相關性和一致性。結果:成功建立了TMA擴增體系,這種技術可以檢測低至10 copies/m L的HIV轉錄標準品。60份HIV感染者血漿樣本中,TMA及Cobas均檢測到陽性46份,均陰性12份,TMA檢測陰性而Cobas檢測陽性樣本2份,檢測一致率為96.7%。兩種技術陽性檢出率差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。對其中46份TMA檢測和Cobas檢測均有定量結果的血漿進行線性回歸分析,兩種技術有非常好的相關性(r=0.997,P0.001)。Bland-Altman分析顯示兩種檢測方法定量Lg差值平均值為0.02,44份(95.7%)樣本在95%的一致性界限內。結論:TMA技術具有高靈敏性潛能。TMA與real-time RT-PCR檢測血漿中HIV RNA具有非常好的相關性與一致性。
[Abstract]:Objective: to investigate the sensitivity of TMA to HIV RNA amplification and its comparison with real-time fluorescence quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) using transcription mediated amplification technique (TMA). Methods: Taq Man probes, specific primers were used to amplify HIV RNAs. Mouse leukemia reverse transcriptase T7-RNA polymerase and PCR substrate were used to establish TMA amplification system. The sensitivity of TMA system was evaluated by amplification of a 10-fold gradient diluted HIV RNA transcriptional standard. The plasma samples of 60 patients with HIV infection were collected. At the same time, TMA reagent and Cobas Amplicor HIV-1 Monitor 1.5 reagent were used to compare the positive rate of the two methods, and the correlation and consistency between the two methods were analyzed by linear regression and Bland-Altman. Results: the TMA amplification system was successfully established. This technique can be used to detect as low as 10 copies/m L of HIV transcription standard. Among 60 plasma samples of HIV infected patients, 46 samples were positive for TMA and Cobas, 12 samples were negative for TMA and 2 samples were positive for Cobas. There was no significant difference in positive detection rate between the two techniques (P 0.05). A linear regression analysis was performed on 46 plasma samples with quantitative results of TMA and Cobas. There was a very good correlation between the two methods. Bland-Altman analysis showed that the average value of quantitative LG difference between the two methods was 0.02n.44 samples were within the 95% consistency limit. Conclusion the ratio TMA technique has high sensitivity potential. TMA and real-time RT-PCR can be used to detect HIV in plasma. RNA has very good correlation and consistency.
【作者單位】： 中南大學湘雅醫(yī)院感染病科病毒性肝炎湖南省重點實驗室;傳染病診治國家重點實驗室感染病診治協(xié)同創(chuàng)新中心;中南大學基礎醫(yī)學院微生物學系;
【基金】：湖南省科技廳科技計劃項目(2013SK3025)~~
【分類號】：R512.91

【參考文獻】

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本文編號：1649185