發(fā)布時(shí)間：2018-03-14 04:10

  本文選題：埃博拉病毒扎伊爾亞型　切入點(diǎn)：多引物自配引發(fā)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)　出處：《病毒學(xué)報(bào)》2016年01期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：鑒于目前埃博拉疫情在西非流行和輸入國(guó)內(nèi)的潛在風(fēng)險(xiǎn),開發(fā)快速準(zhǔn)確易普及的檢測(cè)埃博拉病毒的方法對(duì)埃博拉防控具有重大意義。本文擬建立一種基于顏色判定簡(jiǎn)單、快速和靈敏的方法,即多引物自配引發(fā)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(isothermal multiple self-matching initiated amplification,IMSA)應(yīng)用于埃博拉病毒扎伊爾亞型的檢測(cè)。該技術(shù)設(shè)計(jì)了分別對(duì)應(yīng)于埃博拉病毒扎伊爾型核蛋白(nuclear protein,NP)基因的7個(gè)區(qū)段的6條特異引物,在等溫(63℃)條件下進(jìn)行核酸擴(kuò)增反應(yīng)1小時(shí),在擴(kuò)增前加入HNB染料(羥基萘酚藍(lán))作為反應(yīng)指示劑,以HNB染料顏色變化作為結(jié)果判定的標(biāo)準(zhǔn)。文中利用這種技術(shù)與RT-qPCR分別對(duì)含有目的片段的假病毒的系列稀釋物以及模擬臨床樣本進(jìn)行靈敏度分析,同時(shí)對(duì)30例健康人血漿以及登革病毒、日本腦炎病毒樣本進(jìn)行特異性分析。在塞拉利昂完成了81例埃博拉疑似病例血液樣本的檢測(cè)。結(jié)果顯示RT-IMSA方法檢測(cè)靈敏度與RT-qPCR方法的靈敏度相當(dāng),30例健康人血漿樣本檢測(cè)均為陰性,并且與登革病毒及日本腦炎病毒無(wú)交叉反應(yīng)。與獲得批準(zhǔn)的熒光定量PCR試劑盒比較,RT-IMSA檢測(cè)81例臨床樣本的結(jié)果為53例陽(yáng)性,23例陰性,5例假陰性。靈敏度和特異性分別為91.4%和100%。因此,相較于RT-qPCR的高成本和復(fù)雜操作,RT-IMSA方法具有快速、簡(jiǎn)單的檢測(cè)優(yōu)勢(shì)。
[Abstract]:In view of the potential risk of Ebola epidemic in West Africa and its import into China, it is of great significance to develop a rapid, accurate and easily popularized method for Ebola virus detection and control. Rapid and sensitive methods, That is to say, isothermal multiple self-matching initiated amplification technique was used to detect the Zairian subtype of Ebola virus, and six specific primers corresponding to seven regions of Ebola virus Zairian nucleoprotein nuclear protein (NPP) gene were designed. Nucleic acid amplification reaction was carried out at 63 鈩，

本文編號(hào)：1609541