本文選題：載脂蛋白BmRNA　切入點(diǎn)：編輯酶催化多肽3F　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2013年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景 乙型肝炎病毒(HBV)感染是世界范圍的嚴(yán)重公共衛(wèi)生問(wèn)題之一,也是引起慢性肝炎的最常見(jiàn)病毒之一,其造成了廣泛的疾病譜,包括無(wú)癥狀的攜帶者,潛伏性肝炎、急性肝炎、慢性肝炎、爆發(fā)性肝炎,甚至肝硬化、原發(fā)性肝細(xì)胞癌。慢性乙型肝炎是我國(guó)最常見(jiàn)的傳染病,據(jù)估計(jì)中國(guó)人群中大約有1.3-2.0億人,即約10%-15%的人口為慢性HBV攜帶者,其中大約2300多萬(wàn)人為慢性活動(dòng)性肝炎,而且每年慢性乙型肝炎患者中發(fā)生肝硬化和原發(fā)性肝癌者分別占2%和1%,對(duì)人群健康造成了巨大的威脅,給患者帶來(lái)了很大的精神負(fù)擔(dān)及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。長(zhǎng)期以來(lái)學(xué)者們對(duì)其進(jìn)行了大量的研究和探索,取得了相應(yīng)進(jìn)展,對(duì)慢性乙型肝炎的發(fā)病機(jī)理、治療和預(yù)防均有了較深刻的理解,但是對(duì)其詳細(xì)發(fā)病機(jī)理仍然有爭(zhēng)議。 HBV感染造成廣泛的疾病譜,以及不同的疾病過(guò)程和臨床結(jié)果,其原因與這些方面的因素有關(guān)：環(huán)境因素,如暴露人群的整體衛(wèi)生狀況、疫苗接種狀況等；病毒因素,包括病毒載量、病毒基因型、以及病毒本身變異等；宿主因素,即感染者的年齡,性別,是否合并HCV、HDV、HIV等其他病毒感染,以及宿主的遺傳易感性等多個(gè)方面。近年來(lái),宿主的遺傳易感性受到越來(lái)越多的研究者關(guān)注。 在人類遺傳因素中,主要有以下因素參與HBV感染過(guò)程：介導(dǎo)病毒進(jìn)入肝細(xì)胞過(guò)程的基因,包括參與病毒與靶細(xì)胞膜吸附、融合和運(yùn)輸?shù)幕�；調(diào)節(jié)或控制對(duì)HBV感染免疫應(yīng)答的基因；參與慢性HBV感染導(dǎo)致的肝硬化和肝細(xì)胞癌發(fā)生的基因,包括HBV的母嬰傳播；參與肝組織病理改變的基因；與抗病毒治療抵抗或易感有關(guān)的基因等。大多數(shù)與HBV感染有關(guān)的人類基因的報(bào)道目前主要集中在人類白細(xì)胞抗原(HLA)、干擾素(INF)、腫瘤壞死因子TNF(TNF)、白細(xì)胞介素(IL)等基因。在以往病毒學(xué)和免疫學(xué)研究的基礎(chǔ)上,一些研究者著手從乙肝病毒感染遺傳易感性方面開(kāi)展研究,大量疾病的相關(guān)基因不斷被發(fā)現(xiàn)和遺傳易感性機(jī)制被闡明,國(guó)內(nèi)外對(duì)乙型病毒性肝炎宿主遺傳易感性的研究成果也不斷被報(bào)道。其中與HBV感染有關(guān)的候選基因主要有HLA-Ⅱ類的HLA-DQ和HLA-DR、TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-10、IL-18、IL-1、巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)、殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體(KIR)KIR2DS、雌激素受體(ER)α、甘露糖結(jié)合蛋白(MBP)、維生素D受體(VDR)等。 HBV并不直接損傷肝細(xì)胞,而是通過(guò)免疫應(yīng)答在清除病毒時(shí)導(dǎo)致感染肝細(xì)胞的損傷。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)人類載脂蛋白B mRNA編輯酶催化多肽樣3(APOBEC3)是一類介導(dǎo)天然免疫的新型宿主細(xì)胞因子,在機(jī)體抵御病毒感染的過(guò)程中發(fā)揮獨(dú)特抗病毒功能。它通過(guò)使逆轉(zhuǎn)錄病毒合成的單鏈RNA發(fā)生C-U突變等機(jī)制,導(dǎo)致新合成的DNA降解或產(chǎn)生致死性的大量G-A突變,形成一種對(duì)抗病毒感染的天然免疫屏障。研究已發(fā)現(xiàn)人群中APOBEC3G存在微小變異,對(duì)不同人群中HIV感染過(guò)程和AIDS疾病進(jìn)程發(fā)揮了不同影響。雖然與HIV不一樣,HBV作為DNA病毒,在復(fù)制過(guò)程中不以DNA為模板,而是將DNA轉(zhuǎn)錄RNA中間體,再逆轉(zhuǎn)錄成DNA進(jìn)行復(fù)制,與逆轉(zhuǎn)錄病毒的復(fù)制過(guò)程類似。而有研究也證實(shí)了APOBEC3G基因中rs8177832位點(diǎn)的多態(tài)性與HBV的復(fù)制有關(guān)。APOBEC3F與APOBEC3G蛋白序列相似,同樣也具有相似的功能,本實(shí)驗(yàn)擬探討APOBEC3F基因在人群中的多態(tài)性,分析其與HBV感染易感性的關(guān)系,選擇擴(kuò)增尚無(wú)中國(guó)人群多態(tài)性分布資料,片段適中易擴(kuò)增的第4外顯子區(qū)進(jìn)行分析。 研究方法 采用病例對(duì)照研究方法。病例組選自2011年-2012年在南方醫(yī)院肝病中心確診的慢性HBV感染者179例,其中男119(64.2%)例,女60(35.8%)例,平均年齡(31.60±9.487)歲,根據(jù)HBV血清學(xué)標(biāo)志物(HBV-M)分為HBeAg陽(yáng)性慢性乙肝組和HBeAg陰性慢性乙肝組,其中HBeAg陽(yáng)性組96(53.6%)例,HBeAg陰性組83(46.4%)例。對(duì)照組為南方醫(yī)院肝病中心無(wú)近親血緣關(guān)系的漢族非乙肝患者224例,其中男123(56.3%)例,女101(43.7%)例,平均年齡(32.64±13.829)歲。 收集每一例受檢者(包括病例組和對(duì)照組)基本情況及臨床資料,無(wú)菌條件下EDTA抗凝采血管收集每一例受檢者的靜脈全血樣本。取抗凝血200μL,用全血DNA提取試劑盒(康為世紀(jì))進(jìn)行全血DNA提取,提取的DNA保存于-20℃?zhèn)溆�。自行設(shè)計(jì)引物,PCR擴(kuò)增APOBEC3F第四外顯子基因片段,測(cè)序并檢測(cè)其基因多態(tài)性。PCR產(chǎn)物送往北京六合華大基因科技股份有限公司進(jìn)行測(cè)序。純化、測(cè)序過(guò)程均由該公司完成。 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用Mann-Whitney U-t檢驗(yàn)比較病例組與對(duì)照組之間年齡分布的差異,以χ2檢驗(yàn)驗(yàn)證基因型頻率是否符合Hardy-Weinberg平衡定律。多態(tài)性與HBV感染風(fēng)險(xiǎn)之間的相關(guān)性用χ2檢驗(yàn),以比值比(OR值)及其95%置信區(qū)間(confidence intervals, CI)表示,所有的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均為雙側(cè)概率檢驗(yàn),a0.05,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用SPSS16.0軟件。 結(jié)果 1、用Mann-Whitney U-t檢驗(yàn)比較病例組與對(duì)照組之間年齡分布,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-0.858,P=0.391)；用χ2檢驗(yàn)比較病例組與對(duì)照組之間性別分布,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2.646,P=0.104)；兩組均衡可比。 2、PCR產(chǎn)物經(jīng)Sanger測(cè)序結(jié)果顯示-498位點(diǎn)、-532位點(diǎn)、-552位點(diǎn)在檢測(cè)的403例樣本中沒(méi)有多態(tài)性存在。 3、在179例HBV感染者中,等位基因T、C的頻率分別為264(71.7%)、94(28.3%)；在對(duì)照組中224例個(gè)體等位基因T、C的頻率分別為410(91.5%)、38(8.5%)。兩組等位基因頻率分布(χ2=45.906, OR=0.260,95%CI(0.173,0.391), P=0.0000.05)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4、將年齡、性別進(jìn)行分層分析,結(jié)果顯示各年齡組間和男女各組之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 5、HBeAg陽(yáng)性慢性乙肝組與HBeAg陰性慢性乙肝組之間的基因型頻率分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.001,P=0.979),提示-536等位基因頻率的分布與HBeAg是否陽(yáng)性無(wú)關(guān)；HBeAg陽(yáng)性慢性乙肝組和對(duì)照組之間的基因型頻率分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=22.695, P=0.000), HBeAg陽(yáng)性慢性乙肝組中C基因高于對(duì)照組；HBeAg陰性慢性乙肝組和對(duì)照組之間的基因型頻率分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=35.685,P=0.000), HBeAg陰性慢性乙肝組中C基因也高于對(duì)照組。 結(jié)論 1、APOBEC3F基因第4外顯子-536位點(diǎn)T-C突變與HBV感染易感性有關(guān),攜帶C可能使HBV感染的風(fēng)險(xiǎn)增加。 2、APOBEC3F基因第4外顯子-536位點(diǎn)基因頻率在HBeAg陰性慢性乙肝組的分布與HBeAg陽(yáng)性慢性乙肝組一致,提示-536位點(diǎn)T-C突變的HBV感染后慢性化進(jìn)展無(wú)關(guān)。 3、中國(guó)南方漢族人群中APOBEC3F基因第4外顯子-498位點(diǎn)、-532位點(diǎn)、-552位點(diǎn)與現(xiàn)有其他地區(qū)研究中的基因頻率分布一致。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R512.62

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1576814