本文關(guān)鍵詞： 多重PCR 巢式PCR 卵形瘧原蟲(chóng)wallikeri亞種　出處：《中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志》2015年02期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的應(yīng)用新建的多重PCR體系檢測(cè)4種人體瘧原蟲(chóng)。方法應(yīng)用DNAman軟件比較分析4種人體瘧原蟲(chóng)的18S r DNA基因序列,采用Oligo 6.0軟件,在其第5和第6保守區(qū)間的變異區(qū)設(shè)計(jì)4條下游引物序列,并以含4種瘧原蟲(chóng)18S r DNA部分序列的質(zhì)粒DNA為模板,檢測(cè)多重PCR體系的特異性和敏感性。此外,將新建的多重PCR體系與NP-1993體系的第1輪屬特異引物組合,形成新的巢式PCR擴(kuò)增體系(M-Nest體系),并用該體系和新建的多重PCR體系對(duì)不同稀釋倍數(shù)的惡性瘧和間日瘧患者血樣DNA進(jìn)行擴(kuò)增,檢測(cè)這兩種體系的敏感性。應(yīng)用M-Nest體系和NP-1993體系檢測(cè)廣西2013年自加納瘧疾高流行區(qū)返鄉(xiāng)人員的307份血樣,比較兩者的檢測(cè)結(jié)果是否一致。最后,應(yīng)用M-Nest和NP-2002體系對(duì)廣西2014年1~5月份報(bào)告的66份鏡檢以卵形瘧原蟲(chóng)感染為主的血樣進(jìn)行復(fù)核,比較兩者的檢測(cè)結(jié)果是否一致。結(jié)果應(yīng)用新建的多重PCR體系得到的惡性瘧原蟲(chóng)、三日瘧原蟲(chóng)、卵形瘧原蟲(chóng)和間日瘧原蟲(chóng)的擴(kuò)增片段大小分別為268、446、394和323 bp,且不同原蟲(chóng)的擴(kuò)增條帶恰好位于50 bp DNA標(biāo)志物條帶之間,更易于區(qū)分,但不同瘧原蟲(chóng)的Tm值較為接近,不易區(qū)分和鑒別蟲(chóng)種。新建體系對(duì)4種瘧原蟲(chóng)18S r DNA基因的最低檢出濃度分別為:惡性瘧原蟲(chóng)5.58×102拷貝/μl,三日瘧原蟲(chóng)1.56×103拷貝/μl,卵形瘧原蟲(chóng)1.66×103拷貝/μl,間日瘧原蟲(chóng)1.80×102拷貝/μl。新建體系對(duì)惡性瘧原蟲(chóng)血樣的最低檢測(cè)濃度為1.43×102~8.84×103拷貝/μl或5.10×10~4.92×102個(gè)原蟲(chóng)/μl,高于間日瘧原蟲(chóng)的17.4~69.1拷貝/μl和13.5~83.2個(gè)原蟲(chóng)/μl。與單獨(dú)的多重PCR體系相比,應(yīng)用M-Nest檢測(cè)體系將對(duì)瘧原蟲(chóng)的最低檢測(cè)濃度降低了10~100倍。M-Nest體系和NP-1993體系對(duì)從加納返鄉(xiāng)的307份血樣的檢測(cè)結(jié)果不一致,并且M-Nest體系還檢測(cè)到2例卵形瘧原蟲(chóng)感染,而NP-1993體系則未能檢測(cè)到該感染。此外,M-Nest體系和NP-2002體系對(duì)66份鏡檢以卵形瘧原蟲(chóng)感染為主的血樣的復(fù)核結(jié)果一致。結(jié)論新建的多重PCR檢測(cè)體系可同時(shí)檢測(cè)4種人體瘧原蟲(chóng),具有良好的現(xiàn)場(chǎng)適用性。
[Abstract]:Objective to detect the application of multiplex PCR for the new 4 species of human Plasmodium. Comparative analysis of 18S R DNA gene sequences of 4 species of human Plasmodium method using DNAman software, using Oligo 6 software, the design of 4 downstream primer sequences in the fifth and sixth conserved mutation interval, and the plasmid DNA containing 4 18S R DNA of Plasmodium sequence as a template, a multiplex PCR system for detection of specificity and sensitivity. In addition, the multiplex PCR system and NP-1993 system in the new round of first specific primer combinations, the formation of new nested PCR amplification system (M-Nest system), and the different dilution of Plasmodium falciparum and Plasmodium vivax DNA system and the blood samples of patients the new multiplex PCR amplification, detection sensitivity of these two systems. 307 blood samples by M-Nest system and NP-1993 system for the detection of the 2013 Guangxi home Garner malaria epidemic area personnel, comparison of the two The detection results are consistent. Finally, the application of M-Nest and NP-2002 system of Guangxi 1~5 in 2014 reported 66 microscopic examination of blood samples to Plasmodium falciparum infections mainly review, compare the results is consistent with the test results. The multiple application of PCR system of the new three Plasmodium falciparum malaria parasite, Plasmodium falciparum and amplified fragment size Plasmodium vivax were 268446394 and 323 BP, and different protozoa amplified bands located just 50 BP DNA markers between bands, more easy to distinguish, but different Plasmodium Tm value is close, not easy to distinguish and identify species. The new system of 4 species of Plasmodium 18S R DNA gene of the minimum detectable concentration respectively: 5.58 * 102 copies of Plasmodium falciparum / L, three, 1.56 * 103 copies / Plasmodium L, p.ovale 1.66 * 103 copies / L, 1.80 * 102 copies of Plasmodium vivax / L. new system for malignant The parasite samples the lowest detection concentration of 1.43 * 102~8.84 * 103 copies / L or 5.10 * 10~4.92 * 102 / L is higher than that of protozoa, Plasmodium vivax copies of 17.4~69.1 / L and 13.5~83.2 / L. protozoa and multiplex PCR system alone compared to the application of M-Nest detection system will be the lowest detection concentration of Plasmodium reduce the 10~100 times of.M-Nest system and NP-1993 system of Garner from returning 307 blood samples. The detection results are not consistent, and the M-Nest system is detected 2 cases of Plasmodium falciparum infection, while the NP-1993 system failed to detect the infection. In addition, M-Nest system and NP-2002 system to review the blood samples of 66 microscopic examination to Plasmodium falciparum infection the results are consistent. Conclusion the new multiplex PCR detection system for simultaneous detection of 4 species of human Plasmodium, has good applicability.

【作者單位】： 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心寄生蟲(chóng)病預(yù)防控制所衛(wèi)生部寄生蟲(chóng)病原與媒介生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室世界衛(wèi)生組織瘧疾血吸蟲(chóng)病和絲蟲(chóng)病合作中心;
【基金】：國(guó)家質(zhì)檢總局公益性行業(yè)科研專項(xiàng)(No.201210056)~~
【分類號(hào)】：R531.3

【參考文獻(xiàn)】

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1 蔡賢錚;區(qū)采瑩;王香鳳;華德;陳歷昌;;瘧疾雙重PCR檢測(cè)方法的建立和初步應(yīng)用研究[J];中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué);2001年01期

2 汪圣強(qiáng);周華云;李宗;劉耀寶;傅旭峰;朱京京;曹俊;高琪;;SYBR GreenⅠ染料法定量PCR用于人體瘧原蟲(chóng)定量檢測(cè)及蟲(chóng)種鑒別的研究[J];中國(guó)血吸蟲(chóng)病防治雜志;2011年06期

3 姚立農(nóng);張玲玲;阮衛(wèi);陳華良;陸巧繹;楊婷婷;;浙江省5例輸入性瘧疾誤診病例的病原學(xué)診斷分析[J];中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志;2013年03期

4 李美;夏志貴;湯林華;;卵形瘧原蟲(chóng)wallikeri亞種及其基因檢測(cè)體系的研究進(jìn)展[J];中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志;2014年01期

5 張麗;豐俊;夏志貴;;2013年全國(guó)瘧疾疫情分析[J];中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志;2014年06期

【共引文獻(xiàn)】

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1 方筠;韓曉輝;賈哲甫;葉魏;章琪;張曉航;王健;陸曄;;國(guó)境口岸瘧疾快速聯(lián)合檢測(cè)方法應(yīng)用評(píng)估[J];中國(guó)國(guó)境衛(wèi)生檢疫雜志;2012年01期

2 王飛;楊秀娟;鄒明強(qiáng);劉翌;;國(guó)境口岸輸入性惡性瘧的現(xiàn)狀與預(yù)防控制[J];中國(guó)國(guó)境衛(wèi)生檢疫雜志;2012年04期

3 李歡;王曉春;;分子技術(shù)在快速檢測(cè)瘧疾中的應(yīng)用進(jìn)展[J];廣東醫(yī)學(xué);2013年16期

4 張軒;阮衛(wèi);余可根;陳華良;姚立農(nóng);;2010-2013年浙江省瘧疾流行情況分析[J];疾病監(jiān)測(cè);2014年12期

5 王微;史雙青;吳曉麗;張巍巍;;青蒿素研究的文獻(xiàn)計(jì)量學(xué)分析[J];科技導(dǎo)報(bào);2015年20期

6 蔡賢錚;PCR檢測(cè)食蟹猴瘧原蟲(chóng)的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué);2002年01期

7 金玉明,王善青,蒙鋒,卓開(kāi)仁,華德,林澄,符華清,黃永堅(jiān);五指山市居民和上山過(guò)夜人群瘧疾調(diào)查[J];中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué);2003年06期

8 華德;林世干;邢奇芬;;雙重PCR用于高瘧區(qū)疑似瘧疾病人診斷效果評(píng)價(jià)[J];中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué);2011年08期

9 萬(wàn)向陽(yáng);孫菲;李歡;;熒光定量PCR技術(shù)在瘧疾診斷中的應(yīng)用[J];實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué);2014年01期

10 周光榮;汪峰;耿燕;余希;任蘭香;徐建軍;;貴州省2013年瘧疾疫情流行病學(xué)分析[J];中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué);2015年01期

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1 劉燕;西藏林芝地區(qū)瘧原蟲(chóng)蟲(chóng)種分子生物學(xué)鑒定[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2008年

2 李歡;SYBR Green實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)惡性瘧原蟲(chóng)與間日瘧原蟲(chóng)方法的建立[D];中南大學(xué);2014年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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1 蔡賢錚,王香鳳,華德,符式剛,何建文,管惟濱,陳歷昌;聚合酶鏈反應(yīng)用于惡性瘧疾診斷初步研究[J];海南醫(yī)學(xué);1996年02期

2 區(qū)采瑩,王香鳳;聚合鏈酶反應(yīng)對(duì)海南瘧區(qū)兒童帶瘧原蟲(chóng)的調(diào)查[J];海南醫(yī)學(xué);1998年02期

3 華德,柳堅(jiān),蒙鋒;聚合酶鏈反應(yīng)與鏡檢法對(duì)瘧區(qū)人群調(diào)查結(jié)果的比較[J];海南醫(yī)學(xué);1999年04期

4 李玉民,劉巖,張洪花;國(guó)內(nèi)PCR技術(shù)檢測(cè)瘧原蟲(chóng)的研究概況[J];實(shí)用寄生蟲(chóng)病雜志;2000年03期

5 歐陽(yáng)松應(yīng),楊冬,歐陽(yáng)紅生,馬鶴雯;實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)及其應(yīng)用[J];生命的化學(xué);2004年01期

6 李鳳舞,牛春,葉炳輝;套式PCR檢測(cè)蚊體內(nèi)間日瘧原蟲(chóng)子孢子(英文)[J];Chinese Medical Journal;2001年06期

7 張傳祿,張權(quán)義,段績(jī)輝,張解軍,劉勇;湖南省桂陽(yáng)縣三日瘧調(diào)查分析(附1例報(bào)告)[J];中國(guó)寄生蟲(chóng)病防治雜志;2004年02期

8 何建文,蔡賢錚,張永生,王香鳳,華德,王賽梅;應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)在海南檢測(cè)間日瘧原蟲(chóng)的效果[J];中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志;1999年06期

9 師永霞;黃吉城;蘇錦坤;李小波;幸蘆琴;鄭夔;洪燁;郭波旋;;1例國(guó)內(nèi)罕見(jiàn)的輸入性卵形瘧的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2011年10期

10 夏志貴;楊曼尼;周水森;;2011年全國(guó)瘧疾疫情分析[J];中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志;2012年06期

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2 吳嵐曉;人體的多種瘧原蟲(chóng)混合感染[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(寄生蟲(chóng)病分冊(cè));2000年02期

3 師永霞;黃吉城;蘇錦坤;洪燁;李小波;鄭夔;幸蘆琴;郭波旋;;巢式PCR法在瘧疾檢測(cè)及蟲(chóng)種鑒別中的應(yīng)用[J];中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志;2011年04期

4 易海華;祝長(zhǎng)青;孫慧宇;吳萍蘭;徐波;房超;宋陽(yáng)威;王云飛;徐政;趙金偉;徐繼承;;應(yīng)用LAMP技術(shù)對(duì)4種瘧原蟲(chóng)進(jìn)行屬種鑒定的初步研究[J];中國(guó)媒介生物學(xué)及控制雜志;2011年04期

5 鄭挺;李進(jìn);周思;;兩種染色方法瘧原蟲(chóng)鏡檢效果比較[J];安徽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2012年06期

6 ;瘧疾[J];中國(guó)地方病防治雜志;2012年01期

7 陸欽淹;瘧疾免疫診斷中的種特異抗體[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)參考資料(寄生蟲(chóng)病分冊(cè));1975年05期

8 安桂珍;瘧疾[J];開(kāi)卷有益(求醫(yī)問(wèn)藥);1999年08期

9 ;[J];;年期

，

本文編號(hào)：1554598