本文關鍵詞： 綿羊無形體 自然疫源地 HL-60細胞 人類感染　出處：《中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：一、研究背景無形體(Anaplasma)是一種胞內寄生菌,常寄生于血細胞引起無形體病。病原體可由多種蜱通過叮咬傳播給人或動物,在家畜中廣泛存在,也是一類人畜共患的蜱傳疾病。無形體屬包括,嗜吞噬細胞無形體(Anaplasma phagocytophilum)、山羊無形體(A.capra)、綿羊無形體(A.ovis)、邊緣無形體(A.marginale)、中央無形體(A.centrale)、血小板無形體(A.platys)、牛無形體(A.bovis)。目前已測得全序的包括A.marginale、A.centrale、A.phagocytophilum。六種無形體中只有A.phagocytophilum,A.marginale,A.capra可以在體外分離到,其中A.phagocytophilum可以在HL60(人早幼粒白血病細胞)、ISE6(肩突硬蜱細胞)、IDE8(肩突硬蜱細胞)中生長,A.marginale可以在IDE8和BME26中生長,A.capra可以在HL60細胞中生長。目前,沒有關于A.ovis體外分離培養(yǎng)的相關報道。目前,經報道可以引起人無形體病的有以下三種,A.phagocytophilum、A.capra、A.ovis變種。A.phagocytophilum于1994年首次被美國人報道可感染人,并于1996年分離到人來源的無形體。隨后,人粒細胞無形體病在美國大量報道,歐洲多國和中國也均有報道。并可在人與人間傳播。表現為發(fā)熱、頭痛、不適、肌痛、白細胞減少、血小板減少、轉氨酶升高等。2015年首次報道了28例A.cpara感染人的病例,同時分離到人來源的病原體。臨床表現為發(fā)熱、頭痛、乏力、眩暈等。體內靶細胞尚不明確。而關于A.ovis感染人一直存在爭議,到目前為止僅有2007年發(fā)生在塞浦路斯的A.ovis變種感染人的一例報道。尚無關于病原體分離的報道。黑龍江省牡丹江地區(qū)和云南橫斷山區(qū)是我國兩大重要的蜱媒病自然疫源地。以往的調查發(fā)現兩地蜱和宿主動物攜帶多種蜱媒病原體,因此是監(jiān)測的重點區(qū)域。綿羊無形體由于感染癥狀輕,長期以來缺乏系統(tǒng)研究,尤其是病原體的確認、分離鑒定的研究更是匱乏。二、研究目的調查媒介蜱和家畜中A.ovis的流行特征,并以此為依據評估當地綿羊無形體病對人群的威脅。從家畜中分離綿羊無形體,為后續(xù)綿羊無形體病血清學檢測提供條件。開展基于哨點醫(yī)院的人感染綿羊無形體的監(jiān)測,旨在發(fā)現蜱傳綿羊無形體病例,鑒定其病原學特征及描述病例臨床表現特點。三、研究方法2014年至2016年,每年4月至8月采集黑龍江牡丹江地區(qū)及云南橫斷山區(qū)的蜱和宿主動物樣本,通過聚合酶鏈式反應(PCR)擴增樣本中綿羊無形體特異的基因片段,進行針對綿羊無形體的宿主動物調查。使用HL-60細胞從牡丹江地區(qū)感染的山羊和綿羊血液中分離培養(yǎng)A.ovis,并通過PCR、瑞士吉姆薩染色IFA、FISH、掃描電鏡等進行鑒定。開展基于哨點醫(yī)院的綿羊無形體的主動監(jiān)測,納入兩個月內有蜱叮咬史的病人,并通過調查問卷的形式來獲得病人流行病學信息,住院病人信息則通過病案記錄進行登記存檔。本研究實驗室檢測以PCR對病人進行初篩,并結合IFA輔助綿羊無形體病的診斷。四、研究結果在牡丹江地區(qū)和橫斷山區(qū)開展綿羊無形體自然疫源地調查發(fā)現,游離蜱中A.ovis感染率為0.36%(6/1657),其中森林革蜱4只(4/275),全溝硬蜱1只(1/990),嗜群血蜱1只(1/239)。家畜中A.ovis感染率22.39%(150/670),牡丹江地區(qū)家畜綿羊無形體陽性率為12.10%(53/438),橫斷山區(qū)家畜綿羊無形體陽性率為41.81%(97/232)。使用HL-60細胞成功從家畜血液中分離培養(yǎng)A.ovis,并通過PCR、瑞士吉姆薩染色IFA、FISH、掃描電鏡等手段對分離物進行了鑒定。2014-2016年共收集到蜱咬病人血樣1631份,2010-2016年共收集386例蜱咬病人雙份血清。針對2014-2016年主動監(jiān)測PCR初篩陽性的蜱咬病人雙份血清進行IFA檢測。針對2010-2016所有蜱咬病人雙份血清采用IFA方法進行回顧性調查。在主動監(jiān)測和回顧性調查中各發(fā)現1例A.ovis感染患者。五、研究結論經過有針對性的對A.ovis媒介蜱和宿主動物調查,我們發(fā)現森林革蜱是牡丹江地區(qū)A.ovis的主要媒介蜱,綿羊、山羊和牛均是A.ovis的宿主動物。蜱及家畜中A.ovis的發(fā)現證實牡丹江地區(qū)為A.ovis的自然疫源地。通過HL-60細胞首次實現了A.ovis的分離培養(yǎng)并進行了鑒定�；谥鲃颖O(jiān)測和回顧性調查中各發(fā)現了1例A.ovis感染病例,補充了A.ovis人的直接證據。也反映了A.ovis很難引起人無形體病。六、意義與創(chuàng)新性由于感染癥狀較輕,我們常常忽視綿羊無形體病,本研究顯示綿羊無形體病在家畜中廣泛存在,對人類有潛在威脅應予以足夠的重視。首次實現了動物源A.ovis的分離培養(yǎng),盡管A.ovis在HL-60細胞中的培養(yǎng)僅能維持四個月,但可以用來制作抗原片用于A.ovis感染的檢測。臨床感染病例的發(fā)現,為進一步研究綿羊無形體病的致病性和臨床表現譜提供了重要依據。
[Abstract]:This paper reports about 28 cases of A . ovis infection in China . The results showed that the positive rate of non - body of sheep in Mudanjiang area and Hengduan Mountain area was 12.10 % ( 53 / 438 ) . The results showed that the positive rate of non - body of sheep in Mudanjiang area was 12.10 % ( 53 / 438 ) .

【學位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R535;R181.3

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 亞紅祥;沈姝;蘇正元;鄧菲;張云智;;滇西橫斷山區(qū)家畜體表蜱類調查及鑒定[J];中國人獸共患病學報;2016年10期

2 呂鳳亭;;我國首次發(fā)現絨山羊無漿體病及傳播本病的鈍緣蜱[J];遼寧畜牧獸醫(yī);1986年06期

，

本文編號：1475491