本文關(guān)鍵詞： 結(jié)核分枝桿菌 耐藥 標(biāo)志物 蛋白芯片 Rv0350　出處：《遵義醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:篩選耐藥結(jié)核分枝桿菌血清學(xué)特異分子標(biāo)志物并體外克隆、表達(dá)及純化Rv0350目的蛋白。方法:收集2011年到2015年就診遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院結(jié)核病患者及健康體檢者血清標(biāo)本,與結(jié)核蛋白芯片雜交篩選特異性蛋白;結(jié)合前期試驗(yàn)篩選出的特異性蛋白,組合制作成蛋白小芯片,再收集血清標(biāo)本與小芯片雜交,進(jìn)一步篩選出耐藥結(jié)核病候選標(biāo)志物。設(shè)計(jì)目的基因引物,行PCR擴(kuò)增目的基因,用pET28a與目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒,然后轉(zhuǎn)染至BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞,IPTG體外誘導(dǎo)目的蛋白,利用鎳親和層析獲取純化的重組蛋白。結(jié)果:初次篩選出100個(gè)特異性蛋白,第二次雜交篩選出了8個(gè)與耐藥相關(guān)的抗原,分別為Rv0350、Rv0363c、Rv2396、Rv1100、Rv3509c、Rv3653、Rv0865和Rv2031c,其組合診斷耐藥結(jié)核病的特異度、靈敏度分別為80.4%、80%。我們已經(jīng)申請(qǐng)一項(xiàng)發(fā)明專利(申請(qǐng)?zhí)朇N201610089177.2)。體外成功克隆、表達(dá)和純化Rv0350蛋白。結(jié)論:成功篩選出8個(gè)與耐藥相關(guān)的結(jié)核分枝桿菌特異抗原,其中Rv0350診斷特異性較好。利用分子生物學(xué)技術(shù)可成功獲得純化的結(jié)核分枝桿菌Rv0350抗原,為耐藥結(jié)核病檢測(cè)試劑盒的研發(fā)奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective: to screen the serological specific molecular markers of drug-resistant Mycobacterium tuberculosis and clone them in vitro. Methods: from 2011 to 2015, the serum samples of tuberculosis patients and healthy people in affiliated hospital of Zunyi Medical College were collected. The specific protein was screened by hybridization with tuberculosis protein chip. Combined with the specific protein selected from the previous experiment, the protein microarray was made, and then the serum samples were collected and hybridized with the microchip to further screen the candidate markers of drug-resistant tuberculosis. The target gene primers were designed. The target gene was amplified by PCR and the recombinant plasmid was constructed with pET28a and target gene. The purified recombinant protein was obtained by nickel affinity chromatography. Results: 100 specific proteins were screened for the first time and 8 antigens related to drug resistance were screened by the second hybridization, respectively, which were Rv0350. Rv0363c1, Rv2396, Rv1100, Rv3509cFV, Rv3653, Rv0865 and Rv2031c. the specificity of Rv2396, Rv1100, Rv3653, Rv0865 and Rv2031cin the diagnosis of drug-resistant tuberculosis. The sensitivity is 80.4 and 800.We have applied for an invention patent (application number CN201610089177.2) and cloned successfully in vitro. Conclusion: eight Mycobacterium tuberculosis specific antigens associated with drug resistance were successfully screened. The purified Rv0350 antigen of Mycobacterium tuberculosis can be successfully obtained by molecular biological technique, which lays a foundation for the development of drug-resistant tuberculosis detection kit.
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R52

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本文編號(hào)：1475474