本文關鍵詞： 丙型肝炎病毒 轉染 肝細胞 NF-κB 凋亡 自噬 LC3 Beclin-1　出處：《濟南大學》2014年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的 構建丙型肝炎病毒（HCV）核心蛋白真核表達載體pIRES-core,轉染至體外培養(yǎng)的人源性肝細胞QSG7701,研究丙型肝炎病毒核心蛋白對QSG7701細胞凋亡及自噬的影響。初步探討丙型肝炎病毒核心蛋白在丙型肝炎和肝細胞癌中的致病機制。 方法 體外培養(yǎng)人源性肝細胞QSG7701，將細胞分為QSG7701組（未轉染組）、QSG7701/pcDNA3.1組（轉染空質粒組）及QSG7701/core組（轉染pIRES/core組）。然后通過脂質體轉染法將HCV核心蛋白真核表達載體pIRES-core轉染至QSG7701細胞中。AnnexinⅤ-FITC/PI雙染倒置熒光顯微鏡下觀察凋亡細胞的細胞核變化；流式細胞儀檢測細胞凋亡率；Western blotting印記法檢測HCV核心蛋白及轉錄因子NF-κB的表達；采用小分子干擾RNA(siRNA)技術抑制肝細胞NF-κB表達，流式細胞儀再次檢測三組細胞凋亡率。Western blotting印記法檢測自噬體標記分子LC3及自噬相關基因Beclin-1的表達。 結果 AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法倒置熒光顯微鏡下觀察凋亡細胞的細胞核變化，可見PI將凋亡細胞的細胞核染成紅色，，細胞核大小不等，出現(xiàn)核固縮、核碎裂、核溶解等細胞凋亡的特異性表現(xiàn)；流式細胞儀檢測顯示QSG7701/core組細胞凋亡率為(1.34±0.07)%，低于QSG7701組（未轉染組）(2.35±0.11)%和QSG7701/pcDNA3.1組（轉染空質粒組）(2.58±0.13)%，三組比較差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）；Western blotting印記法檢測轉錄因子NF-κB在QSG7701/core組表達上調；將QSG7701細胞分為正常對照組（不作處理）、陰性對照組（轉染陰性siRNA組）及siRNA組（轉染NF-κB siRNA組），小分子干擾RNA(siRNA)技術抑制肝細胞NF-κB表達,流式細胞儀再次觀察凋亡率，siRNA組凋亡率為（2.38±0.17）%，高于正常對照組(1.20±0.11)%和陰性對照組(1.29±0.09)%，三組比較差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。Western blotting法檢測自噬泡標記分子LC3及自噬相關基因Beclin-1在QSG7701/core組表達上調。 結論 HCV核心蛋白能夠抑制人源性肝細胞QSG7701的細胞凋亡，其主要機制可能是轉錄因子NF-κB表達上調。HCV核心蛋白可提高QSG7701的細胞自噬水平，其主要機制可能是自噬相關基因Beclin-1表達上調。
[Abstract]:Purpose The eukaryotic expression vector pIRES-coreof the core protein of hepatitis C virus (HCV) was constructed and transfected into human hepatocytes QSG7701 in vitro. To study the effect of hepatitis C virus core protein on apoptosis and autophagy of QSG7701 cells, and to explore the pathogenetic mechanism of hepatitis C virus core protein in hepatitis C and hepatocellular carcinoma. Method Human hepatocytes QSG7701 were cultured in vitro and divided into QSG7701 group (untransfected group). QSG7701/pcDNA3.1 group (empty plasmid group) and QSG7701/core group (pIRES/core group). ... Then transfect HCV core protein eukaryotic expression vector pIRES-core into QSG7701 cells by liposome transfection. Annexin 鈪

本文編號：1455017