本文關(guān)鍵詞： 新生隱球菌 CD 單核細(xì)胞 血腦屏障 遷移　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)》2015年04期 　論文類(lèi)型：期刊論文

【摘要】：目的新生隱球菌(Cryptococcus neoformans,Cn)莢膜主要毒力因子透明質(zhì)酸由CPS1基因編碼,能與宿主細(xì)胞受體CD44結(jié)合介導(dǎo)真菌侵襲。本文目的明確CD44分子在Cn體外感染血腦屏障模型中對(duì)單核細(xì)胞黏附人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HBMEC)并遷移穿越血腦屏障的影響。方法用單層HBMEC鋪趨化小槽構(gòu)建體外血腦屏障模型,利用Cn野生株B4500FO2、CPS1基因缺失株TYCC645#32和CPS1基因回補(bǔ)株P(guān)CIP,分別感染模型中的HBMEC,然后在上槽液中加入人白血病單核細(xì)胞(THP-1),計(jì)數(shù)從上槽液中遷移到下槽液中的單核細(xì)胞數(shù)量,觀察Cn感染與單核細(xì)胞遷移時(shí)間和劑量關(guān)系;用抗CD44單克隆抗體和CD44抑制劑Bikunin分別作用于模型中單層HBMEC,通過(guò)趨化實(shí)驗(yàn)檢查抗CD44單克隆抗體和Bikunin對(duì)Cn感染模型中單核細(xì)胞遷移的抑制效應(yīng)。結(jié)果黏附和趨化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,Cn感染HBMEC后,相比PBS對(duì)照組,THP-1黏附率和趨化效應(yīng)均明顯增加(P0.01),且黏附率和遷移率隨Cn感染量和感染時(shí)間的增加而顯著上升(P0.05)。通過(guò)抗CD44單克隆抗體和CD44阻斷劑Bikunin分別作用于Cn感染后的HBMEC,結(jié)果發(fā)現(xiàn)THP-1黏附率和遷移率均顯著降低(P0.01),且在一定范圍內(nèi)分別隨抗體(0~1μg)和抑制劑(0~20 nmol/L)劑量的增加而減低。不同Cn菌株莢膜透明質(zhì)酸的表達(dá)差異對(duì)THP-1細(xì)胞黏附和遷移有一定影響:與野生株相比,TYCC645#32感染組的THP-1黏附率和遷移率均明顯降低(P0.01,P0.05),而回補(bǔ)株P(guān)CIP的THP-1黏附率和遷移率有所增加。結(jié)論體外血腦屏障模型中人腦微血管細(xì)胞表達(dá)CD44分子可能對(duì)單核細(xì)胞黏附內(nèi)皮細(xì)胞和遷移通過(guò)血腦屏障起重要作用;莢膜透明質(zhì)酸能介導(dǎo)Cn誘導(dǎo)的單核細(xì)胞黏附和遷移。
[Abstract]:The purpose of Cryptococcus neoformans (Cryptococcus neoformans Cn) the main virulence factor of capsular hyaluronic acid mediated by CPS1 gene encoding, can bind with host cell receptor CD44 mediated fungal invasion. The purpose of this paper is clear CD44 molecules in Cn infection in vitro BBB model on monocyte adhesion of human brain microvascular endothelial cells (HBMEC) and the effect of migration cross the blood-brain barrier. Using the method of single shop HBMEC chemotaxis slot in vitro BBB model was constructed, using Cn B4500FO2 TYCC645#32 and wild-type CPS1 gene, CPS1 gene deletion strain complemented strain PCIP, were infected in the HBMEC model, then add the human monocytic leukemia cell in bath (THP-1). Count on migration from the bath to bath in the number of mononuclear cells, observe the relationship between Cn infection and monocyte migration time and dose; model for single separately with anti CD44 monoclonal antibody and CD44 inhibitor Bikunin HBMEC, through chemotaxis experiments to examine the anti CD44 monoclonal antibody and Bikunin inhibitory effect on Cn infection of monocyte migration in the model. The experimental results show that the adhesion and chemotaxis, Cn infection after HBMEC, compared with PBS control group, THP-1 adhesion and chemotaxis effect were significantly increased (P0.01), and the adhesion rate and the migration rate increases with the amount and duration of infection of Cn infection increased significantly (P0.05). The anti CD44 monoclonal antibody and CD44 inhibitor Bikunin were added to Cn infection after HBMEC, the results showed that THP-1 adhesion and migration rates were significantly decreased (P0.01), and in a certain range respectively with antibody (0~1 G (0~20 nmol/L)) and the inhibitor dose decreases. Different strains of Cn capsular hyaluronic acid expression has a certain effect on the adhesion and migration of THP-1 cells: compared with wild-type, TYCC645#32 infection group THP-1 adhesion and migration rate were significantly decreased (P 0.01, P0.05), while covering the line PCIP THP-1 adhesion rate and migration rate increased. Conclusion the in vitro blood-brain barrier model in human brain microvascular cells expressing CD44 molecules may on cells and monocytes adhesion to endothelial migration plays an important role through the blood-brain barrier; capsular hyaluronic acid can mediate Cn induced monocytes cell adhesion and migration.

【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)院//廣東省熱帶病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 微生物學(xué)系;南方醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院;美國(guó)南加州大學(xué)洛杉磯兒童醫(yī)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81171644) 2013年度廣東省級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(1212113033)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R519
【正文快照】： 新生隱球菌(Cryptococcus neoformans,Cn)是一種具有多糖莢膜的嗜中樞神經(jīng)系統(tǒng)的病原真菌,能引起隱球菌腦膜炎,死亡率極高。新生隱球菌CPS1基因編碼真菌透明質(zhì)酸合成酶,能合成莢膜成分透明質(zhì)酸(hyaluronic,HA),后者與Cn黏附侵襲腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(brain microvascular endothel

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1450697