發(fā)布時間：2017-08-13 01:14

  本文關(guān)鍵詞：使用交聯(lián)劑DMP消除免疫沉淀非特異性條帶

  更多相關(guān)文章： 免疫沉淀 蛋白質(zhì)相互作用 蛋白質(zhì)磷酸化

【摘要】：目的消除免疫沉淀技術(shù)中免疫印跡檢測到的非特異性條帶,排除非特異性條帶對研究蛋白質(zhì)分子相互作用及磷酸化的干擾。方法檢測蛋白交聯(lián)劑庚二亞氨酸二甲酯(DMP)交聯(lián)抗體和載體基質(zhì)的穩(wěn)定性及交聯(lián)效果;積極尋找和優(yōu)化抗原析出條件,分離出免疫沉淀復(fù)合物中抗原成分;檢測析出抗原特異性條帶及磷酸化水平。結(jié)果 DMP有效地將抗體共價結(jié)合于載體基質(zhì),具有較好的穩(wěn)定性和交聯(lián)效果,其免疫沉淀中未檢測到非特異性蛋白條帶;與Laemmli緩沖液相比,甘氨酸可有效地一次性析出免疫沉淀中大部分抗原;經(jīng)pH值調(diào)整后,析出抗原的濃度及磷酸化水平無明顯變化。結(jié)論交聯(lián)劑DMP能有效地消除傳統(tǒng)免疫沉淀技術(shù)中檢測到的非特異性蛋白條帶,且能應(yīng)用于蛋白質(zhì)磷酸化的檢測。
【作者單位】： 華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬荊州醫(yī)院腎內(nèi)科;華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院腎內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 免疫沉淀 蛋白質(zhì)相互作用 蛋白質(zhì)磷酸化
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(No.30900682)
【分類號】：R392.11
【正文快照】： 免疫沉淀是通過把抗體結(jié)合到某些可沉淀的基質(zhì),如蛋白A/G磁珠,利用抗原抗體特異性反應(yīng)富集待測樣本中目的蛋白的一種方法。這種結(jié)合抗體的基質(zhì)與目的蛋白形成的復(fù)合物在高溫和還原劑的作用下,抗原抗體解離,通過離心收集上清可得到目的蛋白。盡管如此,分離的目的蛋白中仍混有抗

【相似文獻】

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本文編號：664631