本文關(guān)鍵詞：玉竹多糖對(duì)H7N9流感病毒裂解疫苗粘膜免疫的佐劑效力研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：流感病毒(influenza virus)一直困擾著人類,它每年造成季節(jié)性流感,新亞型的出現(xiàn)還可能引起爆發(fā)性全球大流行。自1997年香港首次發(fā)現(xiàn)H5N1禽流感病毒直接感染人類以來,已陸續(xù)發(fā)現(xiàn)有多個(gè)亞型禽流感病毒感染人類。2013年3月在我國首次出現(xiàn)H7N9禽流感病毒感染人,到2016年1月,中國共有698人感染,281人死亡,致死率達(dá)到40.3%約為2009年甲流的60倍。接種疫苗是預(yù)防和控制流感最有效的方法。流感裂解疫苗通常采取肌肉注射的方法接種,然而這種策略主要提供系統(tǒng)性免疫應(yīng)答。粘膜免疫不僅能誘導(dǎo)系統(tǒng)性免疫應(yīng)答還能誘導(dǎo)局部粘膜免疫應(yīng)答。然而,由于“異己”物質(zhì)極易在粘膜腔道被降解或排除,疫苗的免疫原性會(huì)大大降低。添加佐劑可以改善粘膜免疫應(yīng)答的效果。目前尚沒有安全有效的粘膜佐劑應(yīng)用于臨床。在本研究中,我們探討了玉竹多糖(Polygonatum odoratun polysaccharide,POP)作為粘膜佐劑對(duì)H7N9流感病毒裂解疫苗的免疫增強(qiáng)效果。以6-8周齡Balb/c小鼠為動(dòng)物模型,采用單次滴鼻免疫的方法接種小鼠。首先探討不同劑量(0.1、0.33、1和3μg)的H7N9流感裂解疫苗單獨(dú)免疫(即不添加佐劑)對(duì)小鼠的粘膜免疫保護(hù)效果。根據(jù)該實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們選擇0.33μg疫苗劑量來考察POP的佐劑效果。將0.33μg裂解疫苗單獨(dú)或添加不同劑量(400、600、800、1000和1200μg)的POP免疫小鼠,不免疫組和POP單獨(dú)免疫組(采用最大劑量)小鼠作為對(duì)照。免疫3周后取小鼠血清和鼻洗液,用ELISA方法檢測(cè)小鼠血清中的疫苗特異性IgG、Ig G抗體亞類IgG1和IgG2a、鼻洗液中sIgA抗體滴度;用血凝抑制試驗(yàn)(HI)檢測(cè)HI抗體滴度。免疫3周后(在取血后的第二天),用致死量(5LD50)同源病毒攻擊小鼠,在攻毒后21內(nèi)連續(xù)觀察并記錄小鼠的體重以及存活情況,并在攻毒3天后每組取3只小鼠,檢測(cè)其肺洗液中的病毒滴度。通過上述指標(biāo)評(píng)價(jià)POP對(duì)H7N9流感裂解疫苗經(jīng)粘膜免疫的免疫增強(qiáng)效果。結(jié)果表明,抗體滴度(能檢測(cè)到的)隨佐劑劑量的增加有加強(qiáng)的趨勢(shì),但達(dá)到1200μg時(shí),抗體滴度反而下降。當(dāng)POP劑量為1000μg時(shí),產(chǎn)生的各類抗體水平達(dá)到最大值,與未加佐劑的單獨(dú)疫苗組比較有顯著差異。IgG抗體亞類檢測(cè)表明,與未添加佐劑組相比,添加佐劑組的IgG1抗體滴度均有增加,而IgG2a抗體滴度顯著下降或只略有升高,1000μg劑量組的IgG1/IgG2a比值明顯大于未添加佐劑組,說明POP是一種TH2型佐劑,誘導(dǎo)偏向Th2型的免疫應(yīng)答。在保護(hù)效果方面,當(dāng)POP劑量達(dá)到1000μg時(shí)保護(hù)效果最好,小鼠存活率達(dá)到75%,與疫苗單獨(dú)免疫組和對(duì)照組(存活率均為0%)相比有顯著差異。本研究結(jié)果表明,POP能夠增強(qiáng)H7N9流感裂解疫苗粘膜免疫的免疫保護(hù)效果,可以考慮作為粘膜佐劑做進(jìn)一步的研究。
【關(guān)鍵詞】：H7N9 粘膜免疫 疫苗 玉竹多糖
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R392-33
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 第一章 前言12-18
• 1 流感病毒12-14
• 1.1 流感病毒的生物學(xué)特性12-13
• 1.2 感染人的H7N9禽流感病毒13-14
• 2 流感滅活疫苗粘膜免疫14-15
• 2.1 流感病毒滅活疫苗14
• 2.2 粘膜免疫途徑14-15
• 3 疫苗佐劑15-17
• 3.1 疫苗佐劑的作用機(jī)制和種類15-16
• 3.2 流感疫苗粘膜佐劑的研究16
• 3.3 天然多糖作為疫苗佐劑16-17
• 4 本研究的內(nèi)容和意義17-18
• 第二章 玉竹多糖對(duì)H7N9流感病毒裂解疫苗粘膜免疫的佐劑效應(yīng)的研究18-40
• 1 引言18-19
• 2 實(shí)驗(yàn)材料及方法19-28
• 2.1 病毒株、疫苗以及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物19
• 2.2 主要試劑及溶液配方19-22
• 2.2.1 病毒傳代以及攻毒實(shí)驗(yàn)所需試劑及溶液19-20
• 2.2.2 動(dòng)物免疫所需試劑及溶液20
• 2.2.3 酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)（ELISA）檢測(cè)抗體所需試劑及溶液20-21
• 2.2.4 HI（血凝抑制）實(shí)驗(yàn)所需試劑及溶液21
• 2.2.5 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)所需試劑及溶液21-22
• 2.3 實(shí)驗(yàn)用到的儀器22-23
• 2.4 實(shí)驗(yàn)方法23-28
• 2.4.1 NIBRG-267(H7N9)病毒株在小鼠體內(nèi)的傳代擴(kuò)增23-24
• 2.4.2 NIBRG-267（H7N9）對(duì)SPF級(jí)BALB/c小鼠LD50的測(cè)定24
• 2.4.3 動(dòng)物免疫24-25
• 2.4.4 樣本的采集25-26
• 2.4.5 攻毒實(shí)驗(yàn)26
• 2.4.6 抗體的檢測(cè)26-27
• 2.4.7 肺病毒滴度的測(cè)定27-28
• 2.4.8 統(tǒng)計(jì)分析28
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-36
• 3.1 NIBRG-267（H7N9）重組病毒株對(duì)SPF級(jí)BALB/c小鼠半數(shù)致死量（LD50）的測(cè)定28-29
• 3.2 H7N9流感病毒裂解疫苗經(jīng)粘膜免疫對(duì)小鼠的保護(hù)效果29-30
• 3.3 玉竹多糖對(duì)H7N9流感病毒裂解疫苗粘膜免疫佐劑效力的研究30-36
• 4 討論36-40
• 結(jié)語40-42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 縮寫表46-47
• 讀研期間文章發(fā)表和錄用情況47-48
• 致謝48

  本文關(guān)鍵詞：玉竹多糖對(duì)H7N9流感病毒裂解疫苗粘膜免疫的佐劑效力研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：476710