目的制備肺炎鏈球菌脂蛋白SPD₁609的小鼠多克隆抗體。方法通過(guò)PCR擴(kuò)增肺炎鏈球菌D39菌株中的spd₁609基因,連接到原核表達(dá)載體pGEX-4T-1上,構(gòu)建重組質(zhì)粒pGEX-4T-1609。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),用異丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達(dá)谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶-SPD₁609(GST-1609)融合蛋白。利用GST親和層析柱純化GST-1609融合蛋白,純化后的融合蛋白用凝血酶(thrombin)外切酶切掉GST標(biāo)簽,進(jìn)一步通過(guò)GST親和層析得到SPD₁609蛋白。用純化的不含GST標(biāo)簽的SPD₁609蛋白免疫小鼠,制備多克隆抗體,用ELISA檢測(cè)抗體的效價(jià), Western blot法檢測(cè)抗體的特異性。結(jié)果成功構(gòu)建了原核表達(dá)載體pGEX-4T-1609,經(jīng)GST親和層析柱分離純化后可得到相對(duì)分子質(zhì)量(M_r)35 000的SPD₁609蛋白,蛋白純度在95%以上。ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示純化后...

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 目的基因spd₁609的擴(kuò)增
        1.2.2 原核表達(dá)載體的構(gòu)建和鑒定
        1.2.3 目的蛋白SPD₁609的誘導(dǎo)表達(dá)和純化
        1.2.4 SPD₁609蛋白鼠多克隆抗體的制備
        1.2.5 ELISA檢測(cè)多克隆抗體的效價(jià)
        1.2.6 Western blot法檢測(cè)多克隆抗體的特異性
2 結(jié)果
    2.1 PCR擴(kuò)增spd₁609基因
    2.2 重組質(zhì)粒pGEX-4T-1609的鑒定
    2.3 融合蛋白GST-1609的誘導(dǎo)表達(dá)
    2.4 SPD₁609蛋白的純化
    2.5 SPD₁609蛋白小鼠多克隆抗體具有較高的效價(jià)和較好的特異性
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