本文關(guān)鍵詞：登革熱病毒分型及患者細(xì)胞因子mRNA水平研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的利用高分辨率熔解曲線(HRM)分析技術(shù),對(duì)四型登革熱病毒(DEV)進(jìn)行快速準(zhǔn)確分型鑒定,彌補(bǔ)現(xiàn)有分型方法的不足;利用定量PCR方法,檢測(cè)登革熱患者體內(nèi)白細(xì)胞介素12(IL-12)、白細(xì)胞介素10(IL-10)、白細(xì)胞介素6(IL-6)、干擾素γ(IFN-γ)、腫瘤壞死因子α(TNF-α) mRNA的表達(dá)水平,闡明人體在登革熱病毒感染期,體內(nèi)固有免疫和適應(yīng)性免疫的情況。方法1.根據(jù)NCBI公布的序列,設(shè)計(jì)HRM分型引物,對(duì)不同型別登革熱進(jìn)行分型鑒定,并進(jìn)行靈敏度和特異性試驗(yàn),同時(shí)采用測(cè)序、熒光PCR和普通PCR方法,對(duì)HRM分型結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。2.對(duì)21例登革熱患者和21例健康對(duì)照者采集靜脈血,用比較CT值法(2-ΔΔCT),檢測(cè)IL-12、IL-10、IL-6、IFN-γ、TNF-α mRNA的表達(dá)水平,分析登革熱患者相關(guān)細(xì)胞因子mRNA變化情況及其與健康對(duì)照組之間的差異。結(jié)果1.應(yīng)用HRM分析技術(shù),可對(duì)四型登革熱病毒進(jìn)行準(zhǔn)確分型,靈敏度高,特異性強(qiáng),HRM分型結(jié)果與測(cè)序、熒光PCR和普通PCR分型結(jié)果無異。2.登革熱患者體內(nèi)IL-12、IL-10、IFN-γ、TNF-α mRNA的表達(dá)水平較健康對(duì)照組顯著升高,有顯著性差異(P0.01,0.05,0.01,0.05)；IL-6 mRNA的表達(dá)水平較健康對(duì)照組有所降低,但無顯著性差異(P0.05)。結(jié)論1.本研究建立了登革熱病毒PCR-HRM分型檢測(cè)方法,與測(cè)序、熒光PCR和普通PCR相比,該方法為登革熱分子診斷提供了一種更為快速、準(zhǔn)確、廉價(jià)的檢測(cè)方法。2.登革熱病毒(DEV)感染可以導(dǎo)致患者體內(nèi)IL-12、IL-10、IL-6、IFN-γ、 TNF-a五種細(xì)胞因子mRNA表達(dá)水平的變化,這些細(xì)胞因子可能在登革熱的發(fā)病機(jī)制和免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮作用。3. Th1/Th2細(xì)胞因子失衡,在登革熱患者感染過程和疾病轉(zhuǎn)化中可能發(fā)揮重要作用。登革熱患者IL-12 mRNA升高可以促進(jìn)Th1類細(xì)胞因子分泌并抑制Th2類細(xì)胞因子分泌,發(fā)揮Th1免疫應(yīng)答優(yōu)勢(shì)。
【關(guān)鍵詞】：登革熱病毒 HRM 分型 細(xì)胞因子 mRNA
【學(xué)位授予單位】：安徽理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R512.8;R440
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-15
• 注釋說明清單15-16
• 引言16-18
• 1 HRM分析技術(shù)在登革熱病毒分型中的研究和應(yīng)用18-41
• 1.1 前言18-19
• 1.2 材料與方法19-23
• 1.2.1 細(xì)胞株19
• 1.2.2 病毒株19
• 1.2.3 主要儀器19-20
• 1.2.4 主要試劑20-21
• 1.2.5 主要溶液的配制21-22
• 1.2.6 引物設(shè)計(jì)與合成22-23
• 1.3 實(shí)驗(yàn)方法23-29
• 1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)23
• 1.3.2 病毒培養(yǎng)23
• 1.3.3 病毒RNA提取23-24
• 1.3.4 RNA質(zhì)量檢測(cè)24
• 1.3.5 cDNA合成24-25
• 1.3.6 特異性試驗(yàn)25
• 1.3.7 PCR擴(kuò)增及HRM分析25-26
• 1.3.8 靈敏度試驗(yàn)26
• 1.3.9 測(cè)序驗(yàn)證26-27
• 1.3.10 熒光PCR驗(yàn)證27-28
• 1.3.11 普通PCR驗(yàn)證28-29
• 1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-37
• 1.4.1 正常C6/36細(xì)胞29
• 1.4.2 病毒在C6/36細(xì)胞中增殖29-30
• 1.4.3 病毒RNA提取結(jié)果30
• 1.4.4 引物特異性30-31
• 1.4.5 PCR-HRM分析結(jié)果31-32
• 1.4.6 PCR-HRM靈敏度32-33
• 1.4.7 臨床樣本檢測(cè)結(jié)果33-34
• 1.4.8 測(cè)序結(jié)果34-35
• 1.4.9 熒光PCR結(jié)果35-36
• 1.4.10 普通PCR結(jié)果36-37
• 1.5 討論37-41
• 2 登革熱患者體內(nèi)細(xì)胞因子mRNA表達(dá)水平及意義41-56
• 2.1 前言41
• 2.2 材料與方法41-46
• 2.2.1 病例篩選41
• 2.2.2 健康對(duì)照41
• 2.2.3 主要儀器41-42
• 2.2.4 主要試劑42-43
• 2.2.5 主要溶液的配制43-44
• 2.2.6 引物設(shè)計(jì)與合成44
• 2.2.7 比較CT值法(2~(-ΔΔCT))公式推導(dǎo)44-46
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法46-49
• 2.3.1 總RNA提取46-47
• 2.3.2 RNA質(zhì)量檢測(cè)47
• 2.3.3 cDNA合成47-48
• 2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備48
• 2.3.5 RT-PCR檢測(cè)mRNA表達(dá)水平48-49
• 2.3.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析49
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果49-54
• 2.4.1 總RNA提取結(jié)果49
• 2.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備結(jié)果49-50
• 2.4.3 RT-PCR檢測(cè)結(jié)果50-52
• 2.4.4 數(shù)據(jù)分析52-54
• 2.5 討論54-56
• 結(jié)論56-57
• 參考文獻(xiàn)57-62
• 附錄A 雙脫氧終止法測(cè)序結(jié)果62-66
• 后記或致謝66-67
• 作者簡介及讀研期間主要科研成果67

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1 陳澤燕;118例登革熱個(gè)案調(diào)查分析[J];廣東衛(wèi)生防疫;2001年01期

2 ;臺(tái)灣地區(qū)登革熱的流行情況與防治[J];海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2001年02期

3 謝敏,王彤,譚秀蓮,余濤,徐改鳳;登革熱147例臨床特點(diǎn)分析[J];嶺南急診醫(yī)學(xué)雜志;2003年01期

4 陳如花,徐瑩,王玉;登革熱83例臨床分析[J];福建醫(yī)藥雜志;2005年05期

5 陳建軍;2001～2004年美國旅行引起的登革熱感染[J];疾病監(jiān)測(cè);2005年09期

6 徐建榮;登革熱及其防治的研究進(jìn)展[J];上海預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2005年04期

7 袁榮寶,王海明;登革熱的研究進(jìn)展[J];上海預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2005年05期

8 Domingues R.B.;Kuster G.W.;Onuki De Castro F.L. ;劉凱;;登革熱病毒感染患者的頭痛特征[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(神經(jīng)病學(xué)分冊(cè));2006年10期

9 赫兢;趙敏;;登革熱防治研究進(jìn)展[J];國際病毒學(xué)雜志;2006年06期

10 葉建杰;胡利明;褚邵杰;胡向前;;登革熱流行病學(xué)概況[J];中國預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2007年04期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 董紅軍;;登革熱防治研究進(jìn)展[A];2005年浙江省醫(yī)學(xué)病毒學(xué)、醫(yī)學(xué)微生物與免疫學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

2 洪文昕;張復(fù)春;陳燕清;王建;;廣州市三種血清型登革熱患者的臨床特點(diǎn)對(duì)比分析[A];第七次全國腎綜合征出血熱學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

3 鮑曉偉;黃勇;李乙江;洪雪花;張泉鵬;王意銀;杜強(qiáng);王偉;李剛山;邱薇;鄭穎;張富強(qiáng);范泉水;李作生;;登革熱病毒的實(shí)驗(yàn)室診斷研究進(jìn)展[A];第二屆全國人畜共患病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

4 丁壯;;登革熱研究進(jìn)展[A];人畜共患傳染病防治研究新成果匯編[C];2004年

5 蔣麗亞;;盧灣區(qū)2001～2002年危害登革熱傳入危險(xiǎn)程度現(xiàn)狀監(jiān)測(cè)[A];上海市預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)第二屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

6 羅會(huì)明;何劍峰;梁文佳;鄭夔;劉禮平;;登革熱流行病學(xué)與控制[A];第七次全國腎綜合征出血熱學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

7 王彤;謝敏;譚秀蓮;吳海東;施旖旎;;2002年廣州市登革熱流行的臨床特征分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)急診醫(yī)學(xué)分會(huì)第十次全國復(fù)蘇中毒學(xué)術(shù)論文交流會(huì)論文匯編[C];2004年

8 劉健毅;董紅軍;張姝;;兩種檢測(cè)方法在登革熱疫情中的應(yīng)用研究[A];2005年浙江省醫(yī)學(xué)病毒學(xué)、醫(yī)學(xué)微生物與免疫學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

9 魏新榮;;傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)辨治登革熱[A];中國中醫(yī)藥學(xué)會(huì)建會(huì)20周年學(xué)術(shù)年會(huì)專輯(下)[C];1999年

10 張明江;陸永昌;張家祝;丁永健;陸永貴;;登革熱流行現(xiàn)狀及防治對(duì)策[A];全國EID研討班資料匯編[C];2004年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 本報(bào)駐伊斯蘭堡記者　 周戎;巴基斯坦研究抗擊登革熱[N];光明日?qǐng)?bào);2006年

2 記者 劉海英;抗體會(huì)助長登革熱病毒感染更多細(xì)胞[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

3 記者 王昭;瑞士成功分離出登革熱病毒抗體[N];人民日?qǐng)?bào);2010年

4 記者 張奇鋒 通訊員 黃愛成 劉李云;中大將利用新方法防控登革熱[N];廣東科技報(bào);2011年

5 劉國信;登革熱，又到流行季[N];21世紀(jì)藥店;2013年

6 戴欣 本報(bào)記者 羅朝淑;預(yù)防登革熱：防蚊控蚊是關(guān)鍵[N];科技日?qǐng)?bào);2014年

7 無錫市人民醫(yī)院主任藥師 陸基宗;出游謹(jǐn)防染上“登革熱”[N];中國醫(yī)藥報(bào);2014年

8 記者 柴玉;發(fā)揮中醫(yī)藥防控登革熱優(yōu)勢(shì)[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2014年

9 中山大學(xué)藥學(xué)院新藥研究與開發(fā)中心常務(wù)副主任 秦衛(wèi)華;圍剿登革熱并非觸不可及[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2014年

10 天津市衛(wèi)生防病中心 主任醫(yī)師 于長水;病人→←蚊媒：登革熱的惡性循環(huán)[N];健康報(bào);2001年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 沈紀(jì)川;媒介和氣象因素對(duì)廣州登革熱流行的影響及其預(yù)測(cè)模型的建立[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

2 張浩;登革病毒全基因序列的時(shí)空特點(diǎn)和登革熱以及重癥登革的病原學(xué)診斷、臨床特點(diǎn)和預(yù)后預(yù)測(cè)分析[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

3 桑少偉;廣州登革熱溯源、預(yù)警模型及決策支持系統(tǒng)框架研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2015年

4 胡永新;LE-PolyICLC在小鼠感染模型抗登革熱Ⅱ型病毒的研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

5 黃新偉;登革熱病毒抗體依賴增強(qiáng)感染分子機(jī)制的體外模型研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

6 林立豐;新型登革熱傳播媒介監(jiān)測(cè)誘蚊誘卵器開發(fā)應(yīng)用研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2006年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳騰飛;基于“正氣”理論對(duì)134例普通登革熱患者的臨床研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2015年

2 李建;大青葉對(duì)登革熱病毒抑制活性篩選及其活性組分的分離[D];福建農(nóng)林大學(xué);2013年

3 寧文艷;2004-2013年中國登革熱時(shí)空分布特征及風(fēng)險(xiǎn)制圖[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2015年

4 何江;登革熱病毒分型及患者細(xì)胞因子mRNA水平研究[D];安徽理工大學(xué);2016年

5 謝暉;云南中緬邊境孟連和瀾滄縣登革熱流行狀況調(diào)查[D];大理學(xué)院;2011年

6 易彬樘;地理信息系統(tǒng)及衛(wèi)星遙感圖像在廣東省登革熱監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用[D];中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué);2003年

7 譚俊;云南省邊境地區(qū)西雙版納州關(guān)累口岸登革熱流行的潛在風(fēng)險(xiǎn)因素調(diào)查[D];大理學(xué)院;2012年

8 陳瑞;登革熱的臨床特征與中醫(yī)證候特點(diǎn)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2015年

9 岳耀斐;登革熱抗體依賴性感染增強(qiáng)（ADE）的機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

10 趙丹;基于影響因素的登革熱預(yù)警技術(shù)研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2012年

  本文關(guān)鍵詞：登革熱病毒分型及患者細(xì)胞因子mRNA水平研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：366502