本文關(guān)鍵詞：雙基因NGF-IRES-BMP2真核質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大鼠BMSCs誘導(dǎo)成骨的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的運(yùn)用基因工程的手段將雙基因真核質(zhì)粒載體pCDNA3.1-NGF-IRES-BMP2轉(zhuǎn)染入大鼠BMSCs中,研究其誘導(dǎo)成骨后目的蛋白的表達(dá)情況方法取三月齡SD大鼠,頸椎脫臼處死后,通過全骨髓培養(yǎng)法分離培養(yǎng)大鼠BMSCs并穩(wěn)定傳代。倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞生長形態(tài),運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測大鼠BMSCs表面標(biāo)志物CD31、CD90。取第三代大鼠BMSCs,分為五組,單基因pCDNA3.1-NGF轉(zhuǎn)染組(A組),單基因pCDNA3.1-BMP2轉(zhuǎn)染組(B組),雙基因pCDNA3.1-NGF-IRES-BMP2轉(zhuǎn)染組(C組),空質(zhì)粒組(D組),陰性對(duì)照組(E組)。運(yùn)用Lipofectamine2000介導(dǎo)將各組基因轉(zhuǎn)染入大鼠BMSCs。western-blot檢測目的基因蛋白表達(dá)情況,并用BioRad凝膠圖像分析系統(tǒng)測定各組灰度值。免疫組織化學(xué)染色檢測I型膠原蛋白表達(dá)含量。茜蘇紅染色測定各組BMSCs鈣結(jié)節(jié)并計(jì)數(shù)。數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果顯微鏡觀察BMSCs成功分離培養(yǎng)并穩(wěn)定傳代;流式細(xì)胞儀測定BMSCs表面標(biāo)志物,CD90表達(dá)陽性,CD31表達(dá)陰性;各組基因轉(zhuǎn)染BMSCs后,western-blot、I型膠原免疫組化染色、茜蘇紅染色鈣結(jié)節(jié)及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析均提示雙基因轉(zhuǎn)染組的目的蛋白表達(dá)量、I型膠原蛋白表達(dá)量、鈣結(jié)節(jié)形成數(shù)目均高于單基因轉(zhuǎn)染組、空質(zhì)粒組以及陰性對(duì)照組。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果p0.05,有差異。結(jié)論轉(zhuǎn)染雙基因pCDNA3.1-NGF-IRES-BMP2組BMSCs可同時(shí)表達(dá)兩種目的蛋白,并能誘導(dǎo)BMSCs向成骨細(xì)胞分化,且兩者具有協(xié)同成骨作用。
【關(guān)鍵詞】：BMSCs 轉(zhuǎn)染 NGF BMP2 誘導(dǎo)成骨
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R3416
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 英漢縮略詞對(duì)照表8-9
• 前言9-10
• 1 材料與方法10-20
• 1.1 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器10-11
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑11-13
• 1.3 實(shí)驗(yàn)方法13-20
• 2 結(jié)果20-25
• 2.1 大鼠BMSCs形態(tài)學(xué)觀察20-21
• 2.2 大鼠BMSCs流式細(xì)胞鑒定21-22
• 2.3 western blot檢測NGF與BMP2目的蛋白的表達(dá)22-23
• 2.4 免疫組織化學(xué)染色檢測I型膠原蛋白的表達(dá)23-24
• 2.5 轉(zhuǎn)染后各組大鼠BMSCs培養(yǎng)14天后進(jìn)行茜蘇紅染色并鈣結(jié)節(jié)計(jì)數(shù)24-25
• 3 討論25-30
• 4 結(jié)論30-31
• 5 參考文獻(xiàn)31-35
• 綜述35-51
• 參考文獻(xiàn)45-51
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄51-52
• 致謝52-53

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1 陳寧;雙基因NGF-IRES-BMP2真核質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大鼠BMSCs誘導(dǎo)成骨的實(shí)驗(yàn)研究[D];桂林醫(yī)學(xué)院;2015年

  本文關(guān)鍵詞：雙基因NGF-IRES-BMP2真核質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大鼠BMSCs誘導(dǎo)成骨的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：360129