目的建立一種具有靈敏性高,特異性強(qiáng)的巢式聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）方法檢測(cè)血液標(biāo)本中布魯氏菌核酸DNA。方法使用細(xì)菌基因組提取試劑盒提取純菌核酸DNA;使用血液等組織基因組核酸DNA提取試劑盒提取血液標(biāo)本核酸DNA,對(duì)提取的核酸DNA先行常規(guī)PCR預(yù)擴(kuò)增,以擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物為模板進(jìn)行熒光定量PCR第二次擴(kuò)增（即巢式PCR）。對(duì)純菌提取的核酸DNA進(jìn)行靈敏度和和特異性測(cè)試,構(gòu)建巢式PCR的Ct值與核酸DNA拷貝數(shù)之關(guān)系曲線;檢測(cè)臨床血液標(biāo)本核酸DNA,同時(shí)比較常規(guī)兩種PCR方法檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果常規(guī)PCR檢測(cè)的靈敏度為512個(gè)核酸DNA拷貝數(shù);巢氏PCR檢測(cè)有效范圍為921.6 ng/μl～6.8 fg/μl,對(duì)應(yīng)的Ct值為12.04～37.50,其指數(shù)關(guān)系為:y=(e^-0.695x)×10¹²;R²=0.998 6,巢式PCR擴(kuò)增效率為2.28×10⁹倍,檢測(cè)限為2個(gè)布魯氏核酸DNA拷貝數(shù)。巢式PCR的靈敏度為91.67%,特異度為93.10%,陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為91.67%,陰性預(yù)測(cè)值為93.10%。對(duì)一起羊... 

【文章來(lái)源】：疾病監(jiān)測(cè). 2020,35(03)

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【部分圖文】：

熒光定量PCR測(cè)得Ct值與DNA拷貝數(shù)之指數(shù)關(guān)系曲線Figure1IndexrelationshipcurveofDNAcopynumbersandCtvaluebythefluorescencequantitativePCR

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3443358