目的建立大鼠脊柱功能單位（functional spine unit, FSU）體外培養(yǎng)體系模型。方法選取8～12月齡雄性大鼠,用CO₂安樂處死后,解剖大鼠脊柱胸椎和腰椎。保留一側(cè)椎體骨質(zhì)2 mm,另外一端緊貼椎間盤終板外緣切除,制作骨-椎間盤-骨結(jié)構(gòu)FSU。將FSU用1%PBS清洗后,放入12孔板中并加入培養(yǎng)基連續(xù)培養(yǎng)28 d。在不同的時間節(jié)點（0、3、5、7、14、21、28 d）用MTT和DAPI（4′,6-diamidino-2-phenylindole）染色并冰凍切片分別檢測椎間盤纖維環(huán)和髓核的細(xì)胞活性。提取不同時間點椎間盤髓核組織檢測糖胺聚糖（glycosaminoglycan content, GAG）的差異性并做定量評估。Western blot檢測不同時間點椎間盤組織聚糖蛋白聚糖降解碎片（aggrecan fragment）中衰老標(biāo)志基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases, MMPs）及血小板反應(yīng)蛋白解整合素金屬肽酶（a disintegrin and metalloproteinase with thrombospo... 

【文章來源】：廣東醫(yī)學(xué). 2019,40(21)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試劑與儀器
    1.2 實驗動物
    1.3 建立FSU模型
    1.4 MTT染色及DAPI免疫熒光染色
    1.5 糖胺聚糖檢測(glycosaminoglycan content,GAG)
    1.6 蛋白印痕檢測(Western blot analysis)
    1.7 RT-qPCR檢測aggrecan及CollagenⅠ基因表達(dá)
    1.8 統(tǒng)計學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 FSU連續(xù)體外培養(yǎng)28 d細(xì)胞活性改變
    2.2 FSU連續(xù)體外培養(yǎng)7 d髓核內(nèi)GAG含量的改變
    2.3 FSU連續(xù)體外培養(yǎng)7 d椎間盤組織aggrecan fragment中金屬蛋白酶的表達(dá)差異
    2.4 FSU連續(xù)體外培養(yǎng)7 d椎間盤組織mRNA中衰老基因表達(dá)差異
3 討論



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