目的探討miR-148b/DUSP1信號通路調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子CD206的表達(dá)對肝癌發(fā)生的影響。方法利用全自動(dòng)磁珠提取純化系統(tǒng)提取外周血單核細(xì)胞并培養(yǎng),用粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)和巨噬細(xì)胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)分別誘導(dǎo)生成M1型和M2型巨噬細(xì)胞,CD68、CD206進(jìn)行表型鑒定,ELISA檢測M1和M2型巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子CD206的表達(dá),CCK-8和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子CD206對肝癌細(xì)胞(Hep G2和Huh7細(xì)胞)增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移的影響,雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)驗(yàn)證miR-148b與DUSP1的靶向結(jié)合。結(jié)果初步分離并鑒定M1和M2型巨噬細(xì)胞,M2型巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子CD206促進(jìn)肝癌細(xì)胞的生長和侵襲、轉(zhuǎn)移,雙熒光素酶報(bào)告基因證實(shí)DUSP1為miR-148b的靶基因,miR-148b/DUSP1信號通路促進(jìn)肝癌的發(fā)生、發(fā)展,巨噬細(xì)胞標(biāo)志物與肝癌患者的...

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【部分圖文】：

圖1倒置顯微鏡觀察M1和M2型巨噬細(xì)胞形態(tài)

LGiemsa染液的孔中，室溫染色15～30min;輕輕用清水沖洗浸泡數(shù)次，取出小室，吸去上室液體，用濕棉棒小心擦去上室底部膜表面上的細(xì)胞;用小鑷子小心揭下膜，底面朝上晾干，移至載玻片上用中性樹膠封片;顯微鏡下取9個(gè)隨機(jī)視野計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果。1．10統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次，數(shù)據(jù)....

圖3Transwell實(shí)驗(yàn)檢測與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)對肝癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移的影響(×400)

顯示，M2型巨噬細(xì)胞能明顯促進(jìn)肝癌細(xì)胞的生長(P＜0．05，圖2)。為了檢測巨噬細(xì)胞否對肝癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移產(chǎn)生影響，Transwell實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)M2型細(xì)胞也可以促進(jìn)肝癌細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移(P＜0．05，圖3)。AB57.2μm57.2μmA:M1型;B:M2型圖1倒置顯微鏡觀察M1和....

圖5M2巨噬細(xì)胞中轉(zhuǎn)染DUSP1-shＲNA抑制其表達(dá)

調(diào)節(jié)細(xì)胞因子CD206的分泌;CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染miＲ-148binhibitor可以抑制肝癌細(xì)胞HepG2和Huh7的生長(P＜0．05)，而共轉(zhuǎn)染miＲ-148binhibitor和DUSP1-shＲNA后，分泌量增加的CD206可以促進(jìn)細(xì)胞生長(P＜0.05，圖6....

圖1倒置顯微鏡觀察M1和M2型巨噬細(xì)胞形態(tài)

LGiemsa染液的孔中，室溫染色15～30min;輕輕用清水沖洗浸泡數(shù)次，取出小室，吸去上室液體，用濕棉棒小心擦去上室底部膜表面上的細(xì)胞;用小鑷子小心揭下膜，底面朝上晾干，移至載玻片上用中性樹膠封片;顯微鏡下取9個(gè)隨機(jī)視野計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果。1．10統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次，數(shù)據(jù)....

本文編號：3997114