目的探討miR-148b/DUSP1信號通路調(diào)節(jié)巨噬細胞分泌細胞因子CD206的表達對肝癌發(fā)生的影響。方法利用全自動磁珠提取純化系統(tǒng)提取外周血單核細胞并培養(yǎng),用粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)和巨噬細胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)分別誘導生成M1型和M2型巨噬細胞,CD68、CD206進行表型鑒定,ELISA檢測M1和M2型巨噬細胞分泌的細胞因子CD206的表達,CCK-8和Transwell實驗檢測巨噬細胞分泌細胞因子CD206對肝癌細胞(Hep G2和Huh7細胞)增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移的影響,雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)驗證miR-148b與DUSP1的靶向結(jié)合。結(jié)果初步分離并鑒定M1和M2型巨噬細胞,M2型巨噬細胞分泌的細胞因子CD206促進肝癌細胞的生長和侵襲、轉(zhuǎn)移,雙熒光素酶報告基因證實DUSP1為miR-148b的靶基因,miR-148b/DUSP1信號通路促進肝癌的發(fā)生、發(fā)展,巨噬細胞標志物與肝癌患者的...

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【部分圖文】：

圖1倒置顯微鏡觀察M1和M2型巨噬細胞形態(tài)

LGiemsa染液的孔中，室溫染色15～30min;輕輕用清水沖洗浸泡數(shù)次，取出小室，吸去上室液體，用濕棉棒小心擦去上室底部膜表面上的細胞;用小鑷子小心揭下膜，底面朝上晾干，移至載玻片上用中性樹膠封片;顯微鏡下取9個隨機視野計數(shù)，統(tǒng)計結(jié)果。1．10統(tǒng)計學處理實驗至少重復3次，數(shù)據(jù)....

圖3Transwell實驗檢測與巨噬細胞共培養(yǎng)對肝癌細胞侵襲、轉(zhuǎn)移的影響(×400)

顯示，M2型巨噬細胞能明顯促進肝癌細胞的生長(P＜0．05，圖2)。為了檢測巨噬細胞否對肝癌細胞的侵襲轉(zhuǎn)移產(chǎn)生影響，Transwell實驗發(fā)現(xiàn)M2型細胞也可以促進肝癌細胞的侵襲與轉(zhuǎn)移(P＜0．05，圖3)。AB57.2μm57.2μmA:M1型;B:M2型圖1倒置顯微鏡觀察M1和....

圖5M2巨噬細胞中轉(zhuǎn)染DUSP1-shＲNA抑制其表達

調(diào)節(jié)細胞因子CD206的分泌;CCK-8實驗結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染miＲ-148binhibitor可以抑制肝癌細胞HepG2和Huh7的生長(P＜0．05)，而共轉(zhuǎn)染miＲ-148binhibitor和DUSP1-shＲNA后，分泌量增加的CD206可以促進細胞生長(P＜0.05，圖6....

圖1倒置顯微鏡觀察M1和M2型巨噬細胞形態(tài)

LGiemsa染液的孔中，室溫染色15～30min;輕輕用清水沖洗浸泡數(shù)次，取出小室，吸去上室液體，用濕棉棒小心擦去上室底部膜表面上的細胞;用小鑷子小心揭下膜，底面朝上晾干，移至載玻片上用中性樹膠封片;顯微鏡下取9個隨機視野計數(shù)，統(tǒng)計結(jié)果。1．10統(tǒng)計學處理實驗至少重復3次，數(shù)據(jù)....

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