發(fā)布時(shí)間：2017-04-23 21:14

  本文關(guān)鍵詞：Pin1抑制劑對(duì)小鼠植入前胚體外發(fā)育和ERα蛋白表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:觀察Pin1在小鼠植入前胚中的定位分布及其抑制劑(Juglone)對(duì)小鼠植入前胚體外發(fā)育的影響;研究Pin1受抑制后,對(duì)干細(xì)胞因子m RNA表達(dá)和ERa蛋白表達(dá)的影響;為進(jìn)一步闡明Pin1在合子基因組激活中的作用機(jī)制提供理論依據(jù)。方法:1.分別獲取KM雌性小鼠與雄性小鼠(♀KM×♂KM)交配所得不同生長階段的植入前胚,包括卵母細(xì)胞(不交配)、1-細(xì)胞胚、2-細(xì)胞胚、4-細(xì)胞胚、8-細(xì)胞胚、桑葚胚以及囊胚。通過免疫熒光檢測(cè)技術(shù)(immunofluorescence technique,IF),檢測(cè)Pin1在以上各階段植入前胚中的定位分布;2.獲取KM雌性小鼠與雄性小鼠(♀KM×♂KM)交配所得1-細(xì)胞胚,將其置于KSOM培養(yǎng)液及添加有不同溶度Juglone的培養(yǎng)液中進(jìn)行體外培養(yǎng),并觀察小鼠植入前胚體外發(fā)育情況;3.收集體外發(fā)育至2-細(xì)胞胚(h CG后45h)的植入前胚,利用Realtime-PCR檢測(cè)KSOM組和Juglone(25mM)組中Sox2、Oct4、c-Myc和Klf4四個(gè)干細(xì)胞因子m RNA的表達(dá)水平;4.分別獲取KM雌性小鼠與雄性小鼠(♀KM×♂KM)交配所得處于細(xì)胞周期間期及分裂期的1-細(xì)胞胚和2-細(xì)胞胚,通過免疫熒光檢測(cè)技術(shù)(IF),檢測(cè)Pin1和ERa在以上階段植入前胚中的定位分布;5.收集體外發(fā)育至2-細(xì)胞胚(h CG后45h)的植入前胚,利用免疫熒光檢測(cè)KSOM組和Juglone(25mM)組中胚內(nèi)pan-ERa和p ERa-S118定位和表達(dá)情況。結(jié)果:1.免疫熒光結(jié)果顯示,在卵母細(xì)胞和各發(fā)育階段的植入前胚中都存在Pin1蛋白,且細(xì)胞胞質(zhì)和胞核內(nèi)均有分布,從1-細(xì)胞胚開始,細(xì)胞核內(nèi)Pin1熒光著色更為明顯;2.Pin1抑制劑(Juglone)作用植入前胚體外發(fā)育全程(h CG后27h至120h),Juglone(10mM和25mM)可使1-細(xì)胞胚發(fā)育阻滯于2-細(xì)胞胚,并且極少能過渡至4-細(xì)胞胚(P0.01);Pin1抑制劑(Juglone)作用18h(h CG后27h至45h),Juglone(25mM)可使1-細(xì)胞胚發(fā)育阻滯于2-細(xì)胞胚,并且很少能過渡至4-細(xì)胞胚(P0.01)。3.Realtime-PCR結(jié)果顯示,Juglone(25mM)組中,Sox2 m RNA表達(dá)水平明顯低于KSOM組(P0.05),而Klf4、c-Myc和Oct4 m RNA表達(dá)量相較KSOM組無明顯差別(P0.05)。4.免疫熒光結(jié)果顯示,在1-細(xì)胞胚至2-細(xì)胞胚時(shí)期,Pin1與ERa蛋白隨著細(xì)胞周期進(jìn)程的定位分布,有著相同的變化。5.Juglone(25mM)組中,2-細(xì)胞胚內(nèi)pan-ERa熒光相對(duì)強(qiáng)度與KSOM組比較無明顯差別(P0.05)。2-細(xì)胞胚內(nèi)p ERa-S118熒光相對(duì)強(qiáng)度高于KSOM組(P0.01)。結(jié)論:Pin1抑制劑(Juglone)對(duì)2-細(xì)胞胚至4-細(xì)胞胚體外發(fā)育過渡具有明顯的抑制作用,出現(xiàn)“2-細(xì)胞”阻滯,并使干細(xì)胞因子Sox2 m RNA表達(dá)下調(diào),提示Pin1可能在合子基因組激活(ZGA)中具有重要作用。同時(shí),Pin1抑制劑使2-細(xì)胞胚內(nèi)ERa磷酸化修飾發(fā)生異常變化,說明Pin1可能通過影響ERa的功能活性,從而參與合子基因組激活的調(diào)控。
【關(guān)鍵詞】：Pin1 Juglone 干細(xì)胞因子 雌激素受體α 合子基因組激活
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R321
【目錄】：

• 英語縮略語表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 第一部分9-28
• 材料和方法10-18
• 結(jié)果18-25
• 討論25-28
• 第二部分28-38
• 材料和方法29-33
• 結(jié)果33-35
• 討論35-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 綜述43-52
• 參考文獻(xiàn)49-52
• 致謝52

【共引文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：Pin1抑制劑對(duì)小鼠植入前胚體外發(fā)育和ERα蛋白表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：323047