本文關(guān)鍵詞：可溶性PD-L1分子對T淋巴細胞功能的影響及其機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：協(xié)同刺激信號在T淋巴細胞參與的免疫應(yīng)答過程不同階段發(fā)揮重要的調(diào)控作用。程序性死亡受體1(Programmed death-1,PD-1)是B7家族成員之一,而程序性死亡配體1(Programmed death ligand-1,PD-L1)為協(xié)同刺激分子PD-1的配體之一。PD-1主要表達于活化的T、B、單核細胞表面。PD-1/PD-L1介導(dǎo)的負性抑制信號可通過抑制T、B淋巴細胞功能參與多種疾病的發(fā)生、發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn),許多協(xié)同刺激分子除以細胞膜型外,還有可溶性形式存在,如CD28、CTLA-4(細胞毒T淋巴細胞相關(guān)抗原-4)、CD80、CD86、B7-H3和B7-H4等,這些可溶性因子的生物學(xué)意義及與臨床疾病的相關(guān)性尚待研究。通過研究PD-1/s PD-L1途徑對T淋巴細胞功能的影響,并闡明其作用機理,有望為人類疾病的免疫治療提供新策略。本研究通過觀察不同濃度s PD-L1對人T淋巴細胞功能的影響及PD-1胞漿區(qū)信號接頭分子酪氨酸蛋白酶(SHP)-1、SHP-2及磷酸化SHP-1(p-SHP-1)、p-SHP-2的改變,并分析其生物學(xué)意義,揭示PD-1/s PD-L1協(xié)同刺激信號對T淋巴細胞的抑制機理,進一步探究s PD-L1如何起負性調(diào)控作用。一、可溶性PD-L1通過PD-1/s PD-L1途徑抑制T淋巴細胞功能【目的】分析s PD-L1對T淋巴細胞增殖、周期、凋亡的影響�！痉椒ā繎�(yīng)用流式細胞術(shù)測定健康人外周血T淋巴細胞膜表面活化前后的PD-1分子的表達,應(yīng)用CCK-8法體外研究不同濃度s PD-L1對T淋巴細胞增殖的影響,確定抑制T淋巴細胞增殖的最低濃度,并流式細胞術(shù)測定此濃度s PD-L1對T淋巴細胞周期及凋亡的影響�！窘Y(jié)果】健康人外周血T淋巴細胞低表達PD-1,活化的T淋巴細胞表面則高表達PD-1,可溶性PD-L1蛋白(s PD-L1Ig)工作濃度為250 ng/ml時能通過PD-1/s PD-L1途徑抑制T淋巴細胞的增殖(P=0.017),低于此濃度的s PD-L1Ig均未能引起T淋巴細胞增殖的抑制(P0.05),特異性阻斷PD-1/s PD-L1抑制信號可部分恢復(fù)T淋巴細胞的增殖活性(P=0.035);s PD-L1Ig促使細胞周期G1期T淋巴細胞百分比明顯增高(P=0.000),特異性阻斷該抑制信號可降低G1期T淋巴細胞百分比(P=0.014);s PD-L1使T淋巴細胞凋亡率明顯增高(P=0.001),加入阻斷劑后可部分逆轉(zhuǎn)T淋巴細胞的凋亡率(P=0.002)。【結(jié)論】可溶性PD-L1可通過PD-1/s PD-L1途徑抑制活化T淋巴細胞的增殖,促使細胞周期停滯在G1期,促進其凋亡,s PD-L1表達的增高,可能與細胞免疫調(diào)節(jié)作用相關(guān)。二、PD-1/s PD-L1信號通路接頭分子SHP-1、SHP-2在對T淋巴細胞功能抑制作用中的意義【目的】檢測不同年齡段健康人血清中s PD-L1表達水平及s PD-L1作用下PD-1接頭分子蛋白酪氨酸磷酸酶(SHP)-1和SHP-2的募集量,探討s PD-L1激發(fā)PD-L1/s PD-1信號通路抑制信號的機制�！痉椒ā窟x取2013年6月至2014年5月于蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院體檢中心健康志愿者108例,采用酶聯(lián)免疫吸附方法檢測20-30歲,31-50歲,51-70歲年齡組人群血清中s PD-L1表達水平。免疫磁珠法分離健康人外周血T淋巴細胞,將細胞分為5組:A組:靜止T淋巴細胞組、B組:活化T淋巴細胞組、C組:活化T淋巴細胞+s PD-L1Ig組、D組:活化T淋巴細胞+s PD-L1Ig+m Ig G組、E組:活化T淋巴細胞+s PD-L1Ig+2H11組。免疫沉淀法沉積PD-1接頭分子SHP-1和SHP-2,Western印跡法檢測各組細胞SHP-1,p-SHP-1,SHP-2,p-SHP-2分子表達量。【結(jié)果】健康人外周血中存在s PD-L1分子表達,20-30歲年齡組的表達水平最低,其濃度約為(0.766±0.154)ng/ml,31-50歲組表達水平為(0.866±0.201)ng/ml,51-70歲年齡組則具有更高表達水平(1.047±0.453)ng/ml。20-30歲組與31-50歲組、51-70歲組、31-50歲組與51-70歲組s PD-L1分子表達水平均有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000;P=0.000;P=0.001)。根據(jù)第一部分細胞功能實驗結(jié)果,s PD-L1仍采用250 ng/ml工作濃度,并按前述細胞處理方法進行分組,各組細胞SHP-1、SHP-2的表達量(灰度值)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P0.05);C組p-SHP-1、p-SHP-2表達量均顯著高于B組(P=0.000;P=0.000);E組p-SHP-1表達量顯著低于D組(P=0.028)�！窘Y(jié)論】健康人外周血中s PD-L1中表達水平與年齡有關(guān);加入s PD-L1后p-SHP-1、p-SHP-2表達量均顯著高于未加入s PD-L1組,可能與PD-1/s PD-L1抑制途徑有關(guān)。特異性阻斷PD-1/s PD-L1抑制途徑抑制信號可部分恢復(fù)p-SHP-1功能,p-SHP-1在PD-1/s PD-L1抑制途徑中起重要作用。綜上所述,本課題研究獲得了以下研究結(jié)果:(1)s PD-L1Ig能抑制T淋巴細胞的增殖,使T淋巴細胞周期停滯在G1期,促進T淋巴細胞凋亡。通過PD-L1阻斷型單抗可部分恢復(fù)T淋巴細胞的功能。提示s PD-L1是通過與T淋巴細胞表面的PD-1結(jié)合而產(chǎn)生負性免疫調(diào)控作用。(2)健康人外周血中s PD-L1表達水平與年齡有關(guān);s PD-L1促進PD-1接頭分子p-SHP-1、p-SHP-2的表達,特異性阻斷PD-L1可部分恢復(fù)p-SHP-1功能。提示p-SHP-1在PD-1/s PD-L1抑制途徑中可能起重要作用,進而抑制T淋巴細胞的功能。
【關(guān)鍵詞】：T淋巴細胞 細胞增殖 可溶性程序性死亡配體1 程序性死亡受體1 信號傳導(dǎo)
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 前言12-14
• 第一部分 可溶性PD-L1 通過PD-1/PD-L1 抑制途徑對T淋巴細胞功能的影響14-23
• 1. 主要試劑與材料14-15
• 2. 方法15-17
• 3. 結(jié)果17-21
• 4. 討論21-23
• 第二部分PD-1/SPD-L1 信號通路接頭分子SHP-1、SHP-2 在對T淋巴細胞功能抑制作用中的意義23-31
• 1. 主要試劑與材料24
• 2. 方法24-26
• 3. 結(jié)果26-29
• 4. 討論29-31
• 結(jié)論與展望31-32
• 參考文獻32-37
• 綜述37-45
• 參考文獻41-45
• 縮寫詞表45-47
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文47-48
• 本課題獲得的基金資助48-49
• 致謝49-51

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;The SHP-2 tyrosine phosphatase: Signaling mechanisms and biological functions[J];Cell Research;2000年04期

  本文關(guān)鍵詞：可溶性PD-L1分子對T淋巴細胞功能的影響及其機制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：319359