本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在不同比例下混合培養(yǎng)后成骨分化能力的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本實(shí)驗的目的是研究探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)與脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(ADSC)在不同比例下混合共培養(yǎng)后對干細(xì)胞成骨能力的影響。方法:利用貼壁篩選法和酶消化法從大鼠身上分離提純分別獲得脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。在體外培養(yǎng)的環(huán)境下對這兩種干細(xì)胞分別進(jìn)行成軟骨、成骨、成脂肪誘導(dǎo)分化。使用甲苯胺藍(lán)試劑對成軟骨誘導(dǎo)組進(jìn)行鑒定;成骨分化組用茜素紅染色鑒定;而成脂肪組則用油紅O染色鑒定。之后將成骨誘導(dǎo)組分為6組。A組:未誘導(dǎo)分化的干細(xì)胞空白對照組;B組:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)組;C組:脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)組;D組:BMSC與ADSC混合誘導(dǎo)組,BMSC與ADSC的細(xì)胞比例為1:3;E組:BMSC與ADSC細(xì)胞比例為1:1的混合誘導(dǎo)組;F組:BMSC與ADSC細(xì)胞比例為3:1的混合誘導(dǎo)組。六組的細(xì)胞密度均采取1.0×104/cm2種植。以上六組細(xì)胞均采用Western-Blot技術(shù)檢測RUNX2和OCN等蛋白。體內(nèi)實(shí)驗隨機(jī)挑選不同性別的路易斯大鼠三十五只,分實(shí)驗組和空白對照組,將所有大鼠都造出顱骨缺損模型�？瞻讓φ战M植入空白的生物學(xué)支架材料,實(shí)驗組先將上述六組細(xì)胞植入生物學(xué)支架材料,再植入顱骨缺損處。六周后將材料取出進(jìn)行茜素紅染色觀察鈣化灶情況,并采用DR射片對大鼠顱骨恢復(fù)情況進(jìn)行分析。結(jié)果:ADSC和BMSC兩種細(xì)胞在成軟骨誘導(dǎo)條件下細(xì)胞進(jìn)行成軟骨分化,甲苯胺藍(lán)染色可見藍(lán)色;成骨誘導(dǎo)分化條件下細(xì)胞成骨分化,茜素紅染色可見片狀紅色;成脂誘導(dǎo)條件下誘導(dǎo)成為脂肪細(xì)胞,油紅O染色可見紅色。在成骨誘導(dǎo)分化的六組中,BCDEF各組細(xì)胞中的OCN和RUNX2蛋白表達(dá)水平顯著高于A組細(xì)胞(P0.05);B組細(xì)胞中的蛋白表達(dá)高于C組(P0.05);DEF組細(xì)胞中的蛋白表達(dá)較B、C組顯著性升高(P0.01);DEF三組中,蛋白表達(dá)量的順序依次為FED。體內(nèi)實(shí)驗的情況為六周后將植入材料和顱骨取出后發(fā)現(xiàn):茜素紅染色下實(shí)驗組均有鈣化灶形成,且鈣化灶的多寡為混合組單獨(dú)誘導(dǎo)組未誘導(dǎo)組,DR射片情況不佳(詳見后邊分析討論)。結(jié)論:混合共培養(yǎng)后,兩種細(xì)胞的成骨能力有所增強(qiáng)。成骨細(xì)胞植入支架材料后放入骨缺損模型大鼠體內(nèi),可促進(jìn)骨愈合,混合誘導(dǎo)的細(xì)胞成骨能力較單獨(dú)誘導(dǎo)的強(qiáng),且混合培養(yǎng)中骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞含量多的組成骨能力較好。
【關(guān)鍵詞】：脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 混合共培養(yǎng) 茜素紅 Ⅱ型膠原
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中英文縮略詞對照表5-7
• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-15
• 參考文獻(xiàn)12-15
• 實(shí)驗方法與實(shí)驗材料（資料與內(nèi)容）15-34
• 1 實(shí)驗內(nèi)容15
• 2 實(shí)驗動物、耗材和儀器15-19
• 3 實(shí)驗方法：原代細(xì)胞的提取與培養(yǎng)19-22
• 4 間充質(zhì)干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化22-24
• 5 細(xì)胞染色的實(shí)驗方法24-25
• 6 Western-blot的檢測技術(shù)25-32
• 7 相關(guān)體內(nèi)實(shí)驗32-34
• 結(jié)果34-39
• 討論39-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-45
• 綜述 脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在組織工程學(xué)和臨床應(yīng)用方面的研究進(jìn)展45-59
• 參考文獻(xiàn)55-59
• 作者簡介及讀研期間主要科研成果59-60
• 致謝60

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  本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在不同比例下混合培養(yǎng)后成骨分化能力的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：318887