發(fā)布時(shí)間：2017-04-21 06:42

  本文關(guān)鍵詞：煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（Nampt）在大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)制性衰老中的表達(dá)及意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）體外復(fù)制性衰老將造成組織工程的基礎(chǔ)研究和未來(lái)的產(chǎn)業(yè)化研究中種子細(xì)胞的不足，嚴(yán)重影響其在組織、器官再生和修復(fù)中的應(yīng)用，這是干細(xì)胞研究領(lǐng)域中重大的科學(xué)問(wèn)題。隨著以NAD+為中心的哺乳動(dòng)物衰老理論的提出，煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（Nampt）逐漸成為人們研究的焦點(diǎn)。Nampt是NAD+生物合成的關(guān)鍵限速酶，決定代謝中NAD+水平，而某些抗衰老蛋白的活性，如沉默信息調(diào)控因子Sirtuins，則嚴(yán)格受控于NAD+濃度。以往關(guān)于Nampt與細(xì)胞衰老關(guān)系的研究多集中于體細(xì)胞。Nampt可能是一種延緩人類(lèi)體細(xì)胞衰老的因子。結(jié)合我們前期實(shí)驗(yàn)，體外連續(xù)傳代培養(yǎng)使MSCs生長(zhǎng)減慢；衰老個(gè)體MSCs中Nampt表達(dá)降低。我們推測(cè)，在干細(xì)胞衰老過(guò)程中，Nampt可能發(fā)揮調(diào)控作用。 本研究以大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（rBMSCs）為研究對(duì)象，利用體外連續(xù)傳代培養(yǎng)法建立rBMSCs復(fù)制性衰老模型，并通過(guò)觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，分析細(xì)胞周期，檢測(cè)衰老相關(guān)-半乳糖苷酶（SA-β-gal）活性及衰老相關(guān)因子表達(dá)等，對(duì)模型進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)估；應(yīng)用qRT-PCR、Western blot和細(xì)胞免疫熒光，檢測(cè)Nampt在rBMSCs復(fù)制性衰老模型中的表達(dá)。 所得結(jié)果如下： 1.成功從大鼠骨髓中分離培養(yǎng)出rBMSCs，rBMSCs表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記物CD44、CD90和CD105，而不表達(dá)內(nèi)皮標(biāo)記物CD31和白細(xì)胞標(biāo)記物CD45，并具有成骨、成脂分化潛能。 2.成功建立rBMSCs體外復(fù)制性衰老模型。隨著傳代培養(yǎng)次數(shù)的增加，，rBMSCs形態(tài)出現(xiàn)衰老樣的改變，細(xì)胞長(zhǎng)寬比減小，細(xì)胞面積增大；細(xì)胞生長(zhǎng)增殖速度減慢，細(xì)胞群體倍增時(shí)間延長(zhǎng)；細(xì)胞周期發(fā)生阻滯，G0/G1期細(xì)胞增多，而S期細(xì)胞減少；rBMSCs成骨和成脂能力降低；衰老相關(guān)SA-β-gal活性增強(qiáng)；衰老相關(guān)因子p16INK4a表達(dá)增加。 3. Nampt表達(dá)于rBMSCs；在rBMSCs體外復(fù)制性衰老模型中，隨著傳代培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，無(wú)論在mRNA水平上，還是在蛋白水平上，Nampt表達(dá)均逐漸降低，呈時(shí)間依賴(lài)性。 綜上所述，Nampt在rBMSCs體外復(fù)制性衰老過(guò)程中表達(dá)下調(diào)，Nampt可能對(duì)rBMSCs復(fù)制性衰老具有調(diào)控作用。本研究既為闡明干細(xì)胞衰老的分子機(jī)制，又為維持干細(xì)胞數(shù)量及功能，滿足種子細(xì)胞需求以及延緩干細(xì)胞衰老提供重要的理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶 間充質(zhì)干細(xì)胞 衰老
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R339.38
【目錄】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-11
• 英文縮略詞表11-12
• 第1章 文獻(xiàn)綜述12-19
• 1.1 細(xì)胞衰老12-13
• 1.1.1 細(xì)胞衰老的類(lèi)型12
• 1.1.2 細(xì)胞衰老的特征12-13
• 1.2 干細(xì)胞衰老13-16
• 1.2.1 干細(xì)胞衰老的機(jī)制13-14
• 1.2.2 間充質(zhì)干細(xì)胞衰老14-16
• 1.3 抗細(xì)胞衰老16
• 1.4 煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（Nampt）16-19
• 1.4.1 Nampt 概述16-17
• 1.4.2 Nampt 與老齡化疾病17-18
• 1.4.3 Nampt 和細(xì)胞衰老18-19
• 第2章 實(shí)驗(yàn)研究19-45
• 第1節(jié) rBMSCs 的分離培養(yǎng)與鑒定19-27
• 1 實(shí)驗(yàn)材料19-20
• 2 實(shí)驗(yàn)方法20-24
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-27
• 第2節(jié) rBMSCs 體外復(fù)制性衰老模型的建立與評(píng)估27-38
• 1 實(shí)驗(yàn)材料27
• 2 實(shí)驗(yàn)方法27-31
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-38
• 第3節(jié) Nampt 在 rBMSCs 體外復(fù)制性衰老模型中的表達(dá)及意義38-45
• 1 實(shí)驗(yàn)材料39-41
• 2 實(shí)驗(yàn)方法41-42
• 2.1 Nampt 在 rBMSCs 中的表達(dá)41-42
• 2.2 在 rBMSCs 體外復(fù)制性衰老模型中 Nampt 的表達(dá)變化42
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果42-45
• 第3章 討論45-49
• 3.1 rBMSCs 的分離培養(yǎng)與鑒定45
• 3.2 體外 rBMSCs 復(fù)制性衰老模型的建立及評(píng)估45-48
• 3.3 Nampt 在 rBMSCs 復(fù)制性衰老模型中的表達(dá)及意義48-49
• 第4章 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-56
• 作者簡(jiǎn)介及在校期間所獲科研成果56-57
• 作者簡(jiǎn)介56
• 科研成果56-57
• 致謝57

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：319736