本文關(guān)鍵詞：白細胞介素-35促進T淋巴細胞凋亡機制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：1.觀察白細胞介素-35(IL-35)對T淋巴細胞凋亡的影響。2.探討IL-35在影響T淋巴細胞凋亡中的時間、劑量關(guān)系。3.探討IL-35促進T淋巴細胞凋亡作用機制。方法：采用Clone E6-1人類T淋巴細胞白血病細胞(T細胞系Jurkat,中國科學(xué)院細胞資源庫提供),作為實驗對象。用含有10%FBS RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng),每48h更換細胞培養(yǎng)液,72h進行細胞傳代。以每毫升1×106數(shù)量級細胞作為實驗需要標準樣品。從上述樣品中取1×106/ml細胞分別接種于12孔細胞培養(yǎng)板中,應(yīng)用不同刺激濃度(10ng/ml,80ng/ml,640ng/ml)細胞介素-35(IL-35)與其分別共培養(yǎng)24h,36h。在達到時間點后,收集細胞,并將細胞分成N組(Normal)、C組(Control)、10ng/ml組、8Ong/ml組、640ng/ml組。實驗一：應(yīng)用流式細胞檢測技術(shù),使用美國BD公司Annexin V-FITC凋亡檢測試劑盒,應(yīng)用流式細胞儀檢測細胞凋亡率。并進行統(tǒng)計學(xué)分析,解釋凋亡現(xiàn)象。實驗二：選取24h 10ng/ml組、80ng/ml組、640ng/ml組,為實驗對象。應(yīng)用Western Blot方法檢測B細胞淋巴瘤2蛋白(Bcl-2)表達情況、Akt Ser473位點磷酸化情況。應(yīng)用ELIS A試劑盒檢測各組caspse-3,8,9的蛋白表達變化情況。進行統(tǒng)計學(xué)分析,解釋其意義。實驗三、應(yīng)用流式細胞檢測技術(shù),使用abcom公司的Fluo-3 AM鈣離子探針檢測上述各組的細胞內(nèi)Ca2+濃度,并進行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果：1.IL-35促進T淋巴細胞凋亡,并存在時間/劑量關(guān)系。實驗結(jié)果表明,加入IL-35與Jurkat細胞共培養(yǎng)24h、36h與正常組(N組)及對照組(C組)比較凋亡率均升高(P0.01)。24h、36h在10ng/ml濃度IL-35的刺激下,與N組及C組比較可出現(xiàn)凋亡率上升的現(xiàn)象(P0.01)。在10ng/ml、80ng/ml的IL-35相同濃度下,36h的凋亡率高于24h (P0.01),640ng/ml的IL-35相同濃度下,24h的凋亡率高于36h(P0.01)。24h相同時間點,隨IL-35濃度的增加(80ng/ml、 640ng/ml)與N組及C組比較凋亡率呈上升趨勢(P0.01)；在IL-35濃度達到640ng/ml寸,凋亡率達到最高,如圖1。36h相同時間點,凋亡率隨著IL-35濃度的增加,在80ng/ml時凋亡率達到最高,如圖1。2.檢測24h,10ng/ml、80ng/ml、640ng/ml組的Bcl-2蛋白及AktSer473的磷酸化表達。1Ong/ml組Bcl-2蛋白與Control組比較表達降低(P0.05)。且隨IL-35濃度增加,Bcl-2蛋白與Control組比較表達呈逐漸下降趨勢(P0.01)。640ng/ml時,Bcl-2蛋白的與Contr ol組比較,表達顯著下降,并達到最低值(P0.01)。80ng/ml組、640ng/ml組AktSer473磷酸化與Control組比較表達明顯受到抑制,且在IL-35640ng/ml時磷酸化表達與Control組比較達到最低(P0.01)。3.檢測24h,10ng/ml、80ng/ml、640ng/ml組的Caspase-3,8,9。與Normal、Contral組比較,Caspase3,9的表達從10ng/ml開始升高,640ng/ml時與Control組比較均達到最高峰值(P0.01)。Caspase-8在此凋亡過程中幾乎不表達,如圖7。4.檢測24h,10ng/ml、80ng/ml、640ng/ml組的細胞內(nèi)Ca2+濃度變化。細胞內(nèi)Ca2+濃度隨IL-35濃度升高呈上升趨勢,且在640ng/ml刺激濃度時,達到峰值,如圖8。結(jié)論：1.IL-35促進T淋巴細胞凋亡,并受時間、劑量關(guān)系影響。2.IL-35促T淋巴細胞凋亡作用機制中,相關(guān)細胞凋亡因子：Bcl-2, Caspase-3,9、細胞內(nèi)Ca2+及AktSer473磷酸化位點變化與IL-35存在量效關(guān)系。3.IL-35促進T淋巴細胞凋亡中,線粒體凋亡途徑可能起重要作用。
【關(guān)鍵詞】：T淋巴細胞 鈣離子 IL-35 線粒體凋亡途徑
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R392.12
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 第一部分 IL-35對T淋巴細胞凋亡的影響11-18
• 材料和方法11-14
• 結(jié)果14-17
• 討論17-18
• 第二部分 IL-35促進T淋巴細胞凋亡作用的機制探討18-30
• 材料和方法18-23
• 結(jié)果23-28
• 討論28-30
• 全文總結(jié)30-31
• 參考文獻31-34
• 綜述34-46
• 參考文獻40-46
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文46-47
• 致謝47

【共引文獻】

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本文編號：317565