發(fā)布時(shí)間：2017-04-18 08:19

  本文關(guān)鍵詞：Cchl1a3-R528H基因敲入小鼠低血鉀疾病模型的評(píng)估及其機(jī)制的探討，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的Cchl1a3基因(相當(dāng)于人類CACNA1S基因)第528位精氨酸被組氨酸所替代(R528H)是與低鉀型周期性麻痹(Hypokalemic periodic paralysis,Hypo PP)有關(guān)的錯(cuò)義突變,Hypo PP是以肌無力或肌麻痹為表現(xiàn)的離子通道異常性疾病,以周期性發(fā)作為特征,目前其發(fā)病機(jī)制尚不十分明確。近年來有研究發(fā)現(xiàn)部分Hypo PP患者本身就攜帶突變基因,其主要涉及的與離子通道相關(guān)的突變基因除了CACNA1S基因外,還有SCN4A基因和KCNE3基因,其中以CACNA1S-R528H基因最為常見。目前國內(nèi)外對(duì)Hypo PP的相關(guān)研究也僅局限于細(xì)胞水平及離子通道的電生理改變,對(duì)于相關(guān)突變是如何導(dǎo)致低血鉀及周期性麻痹的發(fā)生并未做出令人滿意的解釋。本課題組選擇人類代表性突出的Ca V1.1-R528H突變,應(yīng)用Red/ET技術(shù)和FLP/frt位點(diǎn)特異性重組系統(tǒng)在前期實(shí)驗(yàn)中已經(jīng)成功的創(chuàng)建了Cchl1a3-R528H基因敲入小鼠模型。而本實(shí)驗(yàn)將對(duì)該模型能否作為研究Hypo PP疾病的動(dòng)物模型做出評(píng)估,并對(duì)其相關(guān)機(jī)制進(jìn)行探討,以期從整體動(dòng)物水平來探索Hypo PP的發(fā)病機(jī)制,為臨床治療提供證據(jù)。方法1.檢測(cè)Cchl1a3-R528H基因敲入小鼠部分生化指標(biāo):選擇20只野生型C57BL/6J小鼠(8周齡,雌雄各半)及20只Cchl1a3-R528H基因敲入小鼠(8周齡,雌雄各半),檢測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶(AST)、葡萄糖(GLU)、血肌酐(Cr)、電解質(zhì)(K+、Na+、Cl-)等指標(biāo);2.驗(yàn)證干化學(xué)法測(cè)定微量鼠尾血電解質(zhì)的可行性:使用干化學(xué)法檢測(cè)Cchl1a3-R528H基因敲入小鼠靜脈血及鼠尾血電解質(zhì)(K+、Na+、Cl-),并與C57BL/6J小鼠進(jìn)行比較,計(jì)算電解質(zhì)分析儀的精密度及其相關(guān)性。3.觀察腎上腺素對(duì)Cchl1a3-R528H基因敲入小鼠血鉀的影響:選擇野生型C57BL/6J小鼠及Cchl1a3-R528H基因敲入小鼠(雄性,8周齡,各32只),按2×4析因設(shè)計(jì)方案進(jìn)行分組,分為8組(n=8):正常對(duì)照組、正常低劑量組、正常中劑量組、正常高劑量組、突變對(duì)照組、突變低劑量組、突變中劑量組、突變高劑量組,分別注射生理鹽水、腎上腺素(200ug/kg、250ug/kg、300ug/kg)及U0126(MEK抑制劑),分別記錄注射前0min(基線值)和注射后10、20、30、40、50、60min時(shí)的血鉀值。4.探討腎上腺素降低血鉀的相關(guān)機(jī)制:選擇野生型C57BL/6J小鼠及Cchl1a3-R528H基因敲入小鼠(雄性,8周齡,各8只),按2×2析因設(shè)計(jì)方案進(jìn)行分組,分為4組(n=8):對(duì)照組(正常對(duì)照)、u0126組、腎上腺素組(正常中劑量組)、u0126+腎上腺組,分別注射生理鹽水、腎上腺素及U0126(MEK抑制劑),血鉀記錄方法同上。結(jié)果1.野生型C57BL/6J小鼠組,雌雄小鼠之間生化指標(biāo)無差異(P0.05),Cchl1a3-R528H基因敲入小鼠組,雌雄小鼠之間生化指標(biāo)亦無差異(P0.05),兩組間,同性別小鼠比較,也無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),說明該突變基因未對(duì)Cchl1a3-R528H基因敲入小鼠的生化性能產(chǎn)生影響,且野生型C57BL/6J小鼠可以成為后續(xù)實(shí)驗(yàn)良好的參照標(biāo)本。2.干化學(xué)法測(cè)定靜脈血、鼠尾血電解質(zhì)和濕化學(xué)法測(cè)定靜脈血電解質(zhì)三項(xiàng)結(jié)果比較后,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),后兩者進(jìn)行相關(guān)性分析,得出Na+、K+、Cl-的相關(guān)系數(shù)分別為0.977、0.897、0.981,具有良好相關(guān)性,證實(shí)了干化學(xué)法測(cè)定微量鼠尾血電解質(zhì)是可行的。3.在相同處理因素前提下,突變因素對(duì)血鉀有顯著影響(P0.05),給藥因素對(duì)血鉀亦有顯著影響(P0.05),但突變與給藥的二級(jí)交互作用無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05):(1)野生型C57BL/6J小鼠組:與基線值相比,對(duì)照組血鉀無明顯變化(P0.05);腎上腺素組血鉀下降(P0.05);不同劑量腎上腺組之間相比,無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),無量-效關(guān)系;(2)Cchl1a3-R528H基因敲入小鼠組:與基線值相比,對(duì)照組血鉀無明顯變化(P0.05);腎上腺素組血鉀下降(P0.05);不同劑量腎上腺組之間相比,無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),無量-效關(guān)系;(3)對(duì)兩組小鼠相同劑量腎上腺素組比較,Cchl1a3-R528H基因敲入小鼠血鉀降低幅度較野生型C57BL/6J小鼠顯著,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.腎上腺素因素對(duì)血鉀有顯著影響(P0.05),抑制劑U0126因素對(duì)血鉀亦有顯著影響(P0.05),但腎上腺與抑制劑U0126的二級(jí)交互作用無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05):(1)與基線值相比,對(duì)照組、U0126、U0126+腎上腺組血鉀無明顯變化(P0.05),且三組之間進(jìn)行比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);(2)腎上腺素組血鉀下降(P0.05);且與對(duì)照組、U0126組、U0126+腎上腺組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1.建立了干化學(xué)法重復(fù)檢測(cè)微量鼠尾血電解質(zhì)的方法,解決了小鼠反復(fù)檢測(cè)血鉀的難題,為本實(shí)驗(yàn)提供了基礎(chǔ),也為其他類似實(shí)驗(yàn)提供了參考;2.證實(shí)Cchl1a3-R528H基因是Hypo PP的致病突變,Cchl1a3-R528H基因敲入小鼠作為Hypo PP疾病動(dòng)物模型是成功的;3.首次在整體動(dòng)物水平證實(shí)腎上腺素在骨骼肌細(xì)胞中是通過ERK信號(hào)通路激活Na+泵活性,促進(jìn)鉀向細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)移來降低血鉀。
【關(guān)鍵詞】：低鉀性周期性麻痹 基因敲入 血鉀 腎上腺素 ERK信號(hào)通路
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R-332;R591.1
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-19
• 材料與方法19-22
• 結(jié)果22-29
• 討論29-37
• 結(jié)論37
• 參考文獻(xiàn)37-44
• 附錄：個(gè)人簡(jiǎn)介44-45
• 致謝45-46
• 綜述：激素在低鉀性周期性麻痹中作用機(jī)制的研究進(jìn)展46-54
• 參考文獻(xiàn)52-54

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 姚合斌;高榮凱;王曉英;黃火高;喬媛媛;尚健;尹義存;;應(yīng)用同源重組技術(shù)構(gòu)建小鼠Cchl1a3基因R528H突變型打靶載體的策略[J];海軍總醫(yī)院學(xué)報(bào);2010年02期

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3 楊建嶺;顧淑萍;陳臣;王鑄鋼;許燕;費(fèi)儉;;用Red/ET重組酶構(gòu)建基因打靶載體[J];生物工程學(xué)報(bào);2006年06期

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5 甘淑芳;;甲狀腺功能亢進(jìn)合并低鉀性周期性麻痹68例臨床分析[J];中國醫(yī)療前沿;2013年18期

  本文關(guān)鍵詞：Cchl1a3-R528H基因敲入小鼠低血鉀疾病模型的評(píng)估及其機(jī)制的探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：314476