本文關(guān)鍵詞：畢氏酵母中重組人白介素15的表達(dá)純化及其生物學(xué)活性鑒定研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：白介素15 (interleukin-15, IL-15)作為一種炎癥因子,與IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-21一樣同屬4α超螺旋細(xì)胞因子家族。人源IL-15位于4號(hào)染色體短臂,含8個(gè)外顯子和5個(gè)內(nèi)含子,成熟IL-15編碼114個(gè)氨基酸序列,分子量大小為14-15KDa,主要表達(dá)于單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及樹突狀細(xì)胞中。IL-15主要的生物學(xué)功能為誘導(dǎo)T細(xì)胞、B細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell, NK cell)的分化已及促進(jìn)T細(xì)胞、B細(xì)胞和NK細(xì)胞的增殖。作為一種多效細(xì)胞因子,IL-15在免疫,腫瘤發(fā)生,過敏性反應(yīng)及自身免疫疾病中均發(fā)揮著重要作用。在本研究中,我們構(gòu)建了一種C端帶His標(biāo)簽和Myc標(biāo)簽的重組人白介素15 (rhIL-15)的表達(dá)載體pPICZaA-Pro-hIL-15-Tag。重組表達(dá)載體經(jīng)轉(zhuǎn)化畢氏酵母表達(dá)菌株X-33后,陽性表達(dá)菌株rhIL-15表達(dá)產(chǎn)量高達(dá)75mg/L。X-33菌株表達(dá)的rhIL-15經(jīng)鎳離子親和層析柱、DEAE陰離子交換柱純化后純度可達(dá)95%。畢氏酵母表達(dá)的重組白介素15存在不同程度的N-糖基化修飾形式,其分子量比預(yù)測(cè)理論分子量偏大。畢氏酵母中表達(dá)純化的rhIL-15可促進(jìn)小鼠CTLL-2及人NK細(xì)胞的增殖,具有良好的生物學(xué)活性。
【關(guān)鍵詞】：白介素15 畢氏酵母 蛋白表達(dá)純化 N-糖基化
【學(xué)位授予單位】：安徽大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R3416;Q78
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 第一章 研究背景8-27
• 1.1 重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)8-19
• 1.1.1 大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)8-10
• 1.1.2 酵母表達(dá)系統(tǒng)10-15
• 1.1.3 絲狀真菌表達(dá)系統(tǒng)15
• 1.1.4 桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)15-16
• 1.1.5 哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)16-18
• 1.1.6 植物表達(dá)系統(tǒng)18-19
• 1.2 白介素1519-27
• 1.2.1 白介素15結(jié)構(gòu)19-20
• 1.2.2 白介素15信號(hào)通路20-22
• 1.2.3 白介素15與腫瘤22-24
• 1.2.4 白介素15的臨床前研究24-25
• 1.2.5 白介素15毒性25-27
• 第二章 材料與方法27-44
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料27-33
• 2.1.1 儀器27-29
• 2.1.2 常規(guī)試劑及試劑盒29-30
• 2.1.3 耗材30-31
• 2.1.4 菌株及質(zhì)粒31
• 2.1.5 溶液配制31-33
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法33-44
• 2.2.1 畢氏酵母分泌型pPICZαA-Pro-rhIL-15-Tag表達(dá)載體構(gòu)建33-37
• 2.2.2 載體pPICZaA-Pro-rhIL-15-Tag轉(zhuǎn)化畢氏酵母X-33菌株37-38
• 2.2.3 白介素15多拷貝子高水平分泌表達(dá)酵母轉(zhuǎn)化子的篩選38
• 2.2.4 rhIL-15/X-33多拷貝酵母轉(zhuǎn)化子的小量誘導(dǎo)表達(dá)38-40
• 2.2.5 rhIL-15在搖瓶條件下的擴(kuò)大表達(dá)40-41
• 2.2.6 畢氏酵母表達(dá)上清中rhIL-15的純化41
• 2.2.7 肽指紋圖譜分析及比對(duì)41-42
• 2.2.8 rhIL-15的去糖基化42
• 2.2.9 rhIL-15的生物學(xué)活性測(cè)定42-44
• 第三章 結(jié)果與分析44-55
• 3.1 重組白介素15表達(dá)載體pPICZαA-Pro-rhIL-15-Tag構(gòu)建44-46
• 3.2 重組白介素15高拷貝表達(dá)菌株篩選46
• 3.3 rhIL-15/X-33表達(dá)菌株小量誘導(dǎo)表達(dá)46-47
• 3.4 rhIL-15/X-33表達(dá)菌株大量誘導(dǎo)表達(dá)純化47-49
• 3.5 rhIL-15肽脂紋圖譜分析49-50
• 3.6 rhIL-15的去糖基化50-52
• 3.7 rhIL-15的生物學(xué)活性測(cè)定52-55
• 第四章 討論55-57
• 第五章 本文小結(jié)57-58
• 附錄58-61
• 參考文獻(xiàn)61-66
• 致謝66-67
• 在讀期間(待)發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與取得的其他研究成果67

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3 許y斏，

本文編號(hào)：309463