本文關(guān)鍵詞：大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞多向分化能力鑒定及分化相關(guān)基因時序性表達(dá)分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)是干細(xì)胞家族的重要成員,中胚層和外胚層發(fā)育早期生成,屬于多能干細(xì)胞,間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)最初在骨髓中發(fā)現(xiàn),因其具有多向分化潛能,造血支持和促進(jìn)干細(xì)胞植入,免疫調(diào)控和自我復(fù)制,來源廣泛,獲取簡單易于分離培養(yǎng),體外增殖力強(qiáng),可進(jìn)行自體移植而不存在組織配型,免疫排斥和醫(yī)學(xué)倫理方面的問題等特點而日益受到人們的關(guān)注[1]。目前發(fā)現(xiàn)其具有能夠分化形成至7種組織細(xì)胞,如成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、成脂細(xì)胞、成肌細(xì)胞等組織細(xì)胞的潛能。可以為骨、軟骨、肌肉等結(jié)締組織的損傷修復(fù)提供潛在的細(xì)胞來源,被認(rèn)為是骨組織工程中最佳的種子細(xì)胞[2]。目的:實驗旨在建立一套簡便有效的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞原代培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化及染色方法,觀測骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性,及其成骨、成脂分化潛能,檢測其分化過程中不同時期相關(guān)基因表達(dá)量變化,為后續(xù)進(jìn)行骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化過程各基因功能差異分析實驗做好準(zhǔn)備。方法:本實驗通過全骨髓培養(yǎng)法分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,并用誘導(dǎo)分化培養(yǎng)液做定向誘導(dǎo)培養(yǎng),觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨及成脂肪細(xì)胞分化過程中的細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,進(jìn)行成骨成脂細(xì)胞染色鑒定,以探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)方法、生長規(guī)律及向成骨成脂細(xì)胞分化的條件。應(yīng)用實時熒光定量PCR檢測成骨分化標(biāo)志ALP、OCN、Runx2基因及成脂肪分化標(biāo)志性基因PPARγ、FABP4的表達(dá)。結(jié)果:(1)通過全貼壁法成功進(jìn)行了骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞原代及傳代培養(yǎng)并繪制出第4代細(xì)胞生長曲線;(2)通過茜素紅染色驗證了骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨分化能力;(3)通過油紅O染色驗證骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的成脂分化能力;(4)通過RT-PCR測得各標(biāo)志基因在誘導(dǎo)過程中各不同時相表達(dá)量變化。結(jié)論:全貼壁法提取的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)傳代4次左右可達(dá)到一定純度,在一定誘導(dǎo)條件下,經(jīng)特定染色方法鑒定,可分化為成骨細(xì)胞,脂肪細(xì)胞;Runx2、ALP、OCN及PPARγ、FABP4的表達(dá)量隨誘導(dǎo)時間延長而變化,從而對分化過程分別進(jìn)行調(diào)節(jié)。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 誘導(dǎo)分化 染色
【學(xué)位授予單位】：濟(jì)南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 摘要7-8
• ABSTRACT8-9
• 主要符號表9-10
• 前言10-23
• 1 BMSCs研究進(jìn)展10-19
• 1.1 BMSCs的來源與應(yīng)用10-12
• 1.2 BMSCs的多向分化12-14
• 1.2.1 成骨分化12-13
• 1.2.2 成脂肪分化13
• 1.2.3 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分化調(diào)控機(jī)制13-14
• 1.3 BMSCs的應(yīng)用前景14-19
• 1.3.1 BMSCs與骨性關(guān)節(jié)炎的治療15-16
• 1.3.2 BMSCs與股骨頭缺血性壞死的治療16-17
• 1.3.3 BMSCs與白血病的治療17-18
• 1.3.4 BMSCs與糖尿病潰瘍的治療18-19
• 2 成骨及成脂肪分化相關(guān)基因19-23
• 第一章 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞多向分化誘導(dǎo)及染色鑒定23-37
• 1 材料與方法23-31
• 1.1 實驗動物材料23-25
• 1.1.1 試劑23-24
• 1.1.2 儀器24-25
• 1.2 方法25-31
• 1.2.1 BMSCs的提取分離及體外培養(yǎng)25-27
• 1.2.2 P_4細(xì)胞生長曲線測定27
• 1.2.3 BMSCs成骨分化（osteogenesis differentiation，OD）及茜素紅27-29
• 1.2.4 BMSCs成脂肪分化（adipogenic differentiation，AD）及油紅O染色29-31
• 2 結(jié)果31-35
• 2.1 BMSCs各代細(xì)胞形態(tài)31-32
• 2.2 P_4細(xì)胞生長曲線繪制32-33
• 2.3 BMSCs成骨分化茜素紅染色結(jié)果33-34
• 2.4 BMSCs成脂肪分化油紅O染色結(jié)果34-35
• 3 討論35-37
• 第二章 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化相關(guān)基因各時相表達(dá)量差異分析37-44
• 1 材料與方法37-41
• 1.1 材料37-38
• 1.1.1 細(xì)胞37
• 1.1.2 試劑37
• 1.1.3 儀器37-38
• 1.2 方法38-41
• 1.2.1 BMSCs成骨、成脂分化誘導(dǎo)及種板38
• 1.2.2 BMSCs成骨、成脂誘導(dǎo)各時相RNA提取38-39
• 1.2.3 cDNA合成39
• 1.2.4 實時熒光定量PCR39-40
• 1.2.5 統(tǒng)計學(xué)方法分析40-41
• 2 結(jié)果41-42
• 2.1 P_4細(xì)胞成骨誘導(dǎo)各時相標(biāo)志基因表達(dá)量變化41
• 2.2 P_4細(xì)胞成脂肪誘導(dǎo)各時相標(biāo)志基因表達(dá)量變化41-42
• 3 討論42-44
• 參考文獻(xiàn)44-53
• 在校期間發(fā)表論文53-54
• 致謝54

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 呼瑩,馬麗,馬冠杰,姜學(xué)英,趙春華;成人和胎兒骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的比較研究[J];中華血液學(xué)雜志;2002年12期

2 李世元;付晉鳳;;豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞常用檢測方法[J];中華損傷與修復(fù)雜志(電子版);2011年01期

3 ;[J];;年期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 韓振忠;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞多向分化能力鑒定及分化相關(guān)基因時序性表達(dá)分析[D];濟(jì)南大學(xué);2016年

  本文關(guān)鍵詞：大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞多向分化能力鑒定及分化相關(guān)基因時序性表達(dá)分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：305934