發(fā)布時(shí)間：2017-04-11 16:01

  本文關(guān)鍵詞：以β-葡聚糖為佐劑的腦膜炎多糖結(jié)合疫苗制備及其免疫原性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：流行性腦脊髓膜炎是由腦膜炎奈瑟氏球菌引起的化膿性腦膜炎,此病分布范圍廣,致死率高,具有耐藥性。但是單純的腦膜炎雙球菌莢膜多糖(簡(jiǎn)稱CPS)屬胸腺非依賴性抗原不能誘導(dǎo)免疫記憶,且只適用于成人,不適合常規(guī)接種兩歲以下兒童。將載體蛋白與CPS共價(jià)結(jié)合可使其轉(zhuǎn)化成T細(xì)胞依賴性抗原,從而刺激合成T細(xì)胞依賴性抗體,不僅可以產(chǎn)生免疫記憶,還能提高免疫球蛋白Ig G的抗體比例及抗體親和力的成熟,這種多糖結(jié)合疫苗可適用于成人,也適用于嬰幼兒。。然而,目前這些結(jié)合疫苗均存在接種劑量較大、免疫效率不高的缺點(diǎn),因此,亟待研發(fā)效率更高和免疫原性更強(qiáng)的新型結(jié)合疫苗。盡管?-葡聚糖佐劑已經(jīng)被用來提高抗原的免疫原性,但是將佐劑與結(jié)合疫苗化學(xué)偶聯(lián)或物理混合的研究幾乎沒有被研究。?-葡聚糖可以促進(jìn)細(xì)胞免疫和體液免疫,通過與特殊受體如CR3和Dectin-1等結(jié)合,可以激活巨噬細(xì)胞,影響細(xì)胞因子的釋放。本次研究中,活化的CPS與破傷風(fēng)類毒素(TT)化學(xué)偶聯(lián)成CPS-TT,?-葡聚糖與高碘酸鈉氧化羥基被氧化成醛基,再將?-葡聚糖偶聯(lián)CPS-TT生成CPS-TT-G。將?-葡聚糖與CPS-TT物理混合得到CPS-TT/G1和CPS-TT/G2。使用紅外色譜,核磁共振,動(dòng)態(tài)光散射儀,高效液相色譜分析等對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析。將CPS,CPS-TT,CPS-TT/Al,CPS-TT-G,CPS-TT/G1和CPS-TT/G2免疫小鼠后運(yùn)用ELISA方法測(cè)定小鼠血清中的抗體滴度,研究發(fā)現(xiàn)CPS產(chǎn)生的CPS特異性的Ig M抗體滴度遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于CPS-TT和CPS-TT-G的抗體滴度,這表明將TT偶聯(lián)到CPS上可大大增加CPS特異性的Ig M抗體滴度,同時(shí)注射第三針CPS-TT-G產(chǎn)生的CPS特異性Ig G/Ig M比率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于CPS-TT。這說明加入?-葡聚糖使抗體的合成更多地從Ig M轉(zhuǎn)為合成Ig G。將CPS-TT-G免疫小鼠21d后得到的CPS特異性Ig G抗體滴度是CPS-TT的8.2倍。這可能是將?-葡聚糖與CPS-TT化學(xué)偶聯(lián)可保證二者同時(shí)到達(dá)抗原遞呈細(xì)胞。然而,將?-葡聚糖與CPS-TT物理混合后,CPS特異性Ig G抗體滴度降低了,這可能是因?yàn)閷?-葡聚糖與CPS-TT物理混合后,?-葡聚糖會(huì)優(yōu)先到達(dá)抗原遞呈細(xì)胞,占據(jù)B細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn)。這充分說明,將?-葡聚糖化學(xué)偶聯(lián)是提高結(jié)合疫苗CPS特異性抗體滴度的一種很好的策略。
【關(guān)鍵詞】：腦膜炎球菌莢膜多糖 佐劑 β-葡聚糖 免疫原性
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R392-33
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 第1章 緒論12-24
• 1.1 生物制品12-13
• 1.1.1 生物制品的定義12
• 1.1.2 從疫苗生產(chǎn)看生物制品的發(fā)展概況12-13
• 1.2 腦膜炎雙球菌疫苗13-16
• 1.2.1 流行性腦脊髓膜炎介紹13-14
• 1.2.2 流行性腦膜炎致病因素及分布14-15
• 1.2.3 腦脊髓球菌莢膜多糖疫苗發(fā)展現(xiàn)狀15-16
• 1.3 腦膜炎球菌疫苗的 β-葡聚糖修飾16-19
• 1.3.1 β-葡聚糖的基本結(jié)構(gòu)17
• 1.3.2 β-葡聚糖的高級(jí)結(jié)構(gòu)17-18
• 1.3.3 β-葡聚糖的免疫調(diào)節(jié)作用18-19
• 1.3.4 β-葡聚糖的免疫調(diào)節(jié)作用機(jī)制19
• 1.4 β-葡聚糖修飾產(chǎn)物的分離純化技術(shù)19-20
• 1.5 β-葡聚糖修飾產(chǎn)物的常用表征方法20-22
• 1.5.1 電泳法20
• 1.5.2 圓二色光譜（CD）和熒光光譜分析20-21
• 1.5.3 核磁共振波譜法(NMR)21
• 1.5.4 傅里葉變換紅外光譜法。21
• 1.5.5 高效液相色譜法（HPLC）21
• 1.5.6 動(dòng)態(tài)光散射（DLS）21-22
• 1.6 佐劑修飾產(chǎn)物的免疫原性22
• 1.6.1 酶聯(lián)免疫吸附法（簡(jiǎn)稱ELISA）的原理22
• 1.6.2 酶聯(lián)免疫吸附法的種類22
• 1.7 論文的立題思想22-24
• 第2章 β-葡聚糖修飾腦膜炎多糖結(jié)合疫苗的研究24-40
• 2.1 引言24
• 2.2 試劑與儀器24-26
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法26-27
• 2.3.1 腦膜炎球菌莢膜多糖（簡(jiǎn)稱CPS）活化26
• 2.3.2 CPS-TT的制備與純化26
• 2.3.3 葡聚糖（簡(jiǎn)稱Glu）的氧化26
• 2.3.4 CPS-TT-G的制備與純化26-27
• 2.4 結(jié)構(gòu)分析和含量測(cè)定方法27-33
• 2.4.1 SDS-PAGE電泳分析27-30
• 2.4.2 蛋白濃度測(cè)定30-31
• 2.4.3 結(jié)合物中結(jié)合和游離Y糖含量測(cè)定31-32
• 2.4.4 動(dòng)態(tài)光散射32
• 2.4.5 尺寸排阻色譜分析32-33
• 2.4.6 ~1H核磁共振33
• 2.4.7 紅外光譜分析33
• 2.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論33-38
• 2.5.1 修飾產(chǎn)物的電泳分析33-34
• 2.5.2 修飾產(chǎn)物的SEC分析和定量分析34-36
• 2.5.3 修飾產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)表征36-38
• 2.6 本章小結(jié)38-40
• 第3章 修飾產(chǎn)物免疫原性的研究40-53
• 3.1 修飾產(chǎn)物的動(dòng)物免疫40
• 3.2 動(dòng)物血清的抗體滴度測(cè)定40-42
• 3.2.1 ELISA法包被底物的配制40-41
• 3.2.2 ELISA法抗體滴度的測(cè)定過程41-42
• 3.3 抗體特異性的測(cè)定42
• 3.4 抗體親和力的測(cè)定42
• 3.5 統(tǒng)計(jì)分析42-43
• 3.6 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論43-51
• 3.6.1 化學(xué)偶聯(lián)與物理混合的特異性抗體43-49
• 3.6.2 競(jìng)爭(zhēng)性ELISA研究49
• 3.6.3 抗體親和力測(cè)試49-51
• 3.7 本章小結(jié)51-53
• 第4章 結(jié)論53-55
• 參考文獻(xiàn)55-62
• 作者攻讀學(xué)位期間的科研成果62-63
• 致謝63

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