NGAL特異性核酸適配子的篩選及初步應(yīng)用
【文章頁數(shù)】:72 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
圖1磁珠SELEX篩選策略??
(2)磁珠SELEX篩選NGAL特異性適配子策略:??本研究的篩選策略是采用蛋白篩選中較為經(jīng)典成熟的磁珠SELEX來篩選??靶標(biāo)NGAL的特異性核酸適配子。具體策略如圖1:①包被NGAL的磁珠與??ssDNA庫孵育進(jìn)行SELEX篩選,并從第三輪開始在每輪篩選之前加入裸磁珠??進(jìn)行....
圖2?ELAA檢測(cè)策略??
或多個(gè)適配子及待測(cè)靶標(biāo)形成三明治夾心結(jié)構(gòu)的分析模式,其原理與EL1SA相??似。本研宄用NGAL最優(yōu)適配子A53替代EL1SA中的第二個(gè)抗體建立了?ELAA??檢測(cè)方法,具體檢測(cè)策略如圖2:①將NGAL抗體包被于96孔板上,用3%?BSA??封閉;②加入NGAL溶液孵育洗滌;③加....
圖3,Sllt的DNA庫
第二章材料和方法第二章材料和方法??材料??單鏈DNA(ssDNA)庫的設(shè)計(jì)和合成??用兩端各為20nt的固定的引物互補(bǔ)序列,中間為355nt的封閉型的ssDNA庫(圖3),庫容量大約1021,:??CAGAGGTCAGATG-N35-CCTATGCGTGCTACCG-N-N?N....
圖4?NGAL驗(yàn)證及包被結(jié)果??A,考馬斯亮藍(lán)染色驗(yàn)證NGAL純度;B,?BCA法測(cè)定蛋白包被前后上清溶液蛋白濃度,t??
干粉加入500叫ddw溶解后,用Pierce??BCA?Protein?Assay?Kit測(cè)其濃度為??1.06明/叫與說明書一致。取lO^LNGAL經(jīng)12%?SDS?PAGE膠電泳后考馬斯亮藍(lán)??染色,結(jié)果如圖4A,位于25kD左右顯示明亮清晰的NGAL條帶,條帶大小與說??明....
本文編號(hào):4003847
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